植物显微技术教材.docx
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植物显微技术教材
一前言及概述
（一）前言
显微技术的内容极为广泛，本课程仅是侧重生物显微技术（Biologicalmicrotechnique）中的植物显微技术是应用显微镜包括光学显微镜和电子显微镜来研究我们所要研究的对象，即通过一定的方法，技术，仪器进行临时制片或永久的各种制片技术，来了解其整体或个别组织，器官，细胞，染色体甚至细胞器等的形态和内部结构。
近年来由于新理论，新假设的提出，新技术，新方法及新仪器的使用，使生物显微技术的发展突飞猛进。
而技术本身就是促进科学发展，提高工作效率的重要手段之一。
所以，掌握一定的技术是与从事科学研究工作有着密切的关系。
而技术，方法及仪器是获得科学知识的必要工具，必须经常的革新，不断地应用其它科学的新仪器，新技术，新方法为本学科服务，使之不断提高，植物显微技术当然也不例外。
本课程的目的在于要通过认识这些技术方法和手段有个初步的基础，今后遇到不生疏，有可能的话能够创造条件开展这方面的工作，为今后从事科研，教学和生产打下良好的基础。
根据我们的专业口径，科学角度，要求是不一致的，同学们毕业后所奔赴的工作岗位会有担任教师的，也会有到研究所和研究单位的，或到农场，园艺场，推广站等生产单位或到商业公司，企业开发中心等各行各业，不一定全用上这些方法和手段，不管将来在任何方面去侧重，但作为踏上工作岗位，毕业为祖国贡献力量，是有必要努力去消除知识上的缺陷，好好地打基础，大基础像金字塔一样，要先广后专，扎扎实实的推也不倒。
从课程内容，技术性都比较强，为要进入显微结构领域，首先从掌握技术手段下功夫，只有过好这一关，第一手资料和数据才能拿到，才谈得上去研究它。
由于内容比较多，而学时是有限的，故旨在给同学引个路子，至于如何不断开拓新的研究领域去解决具体的细节问题，将由同学们自己去探索去发挥，但这里必须指出的一点，从农业的专业口径的要求微观一定要与宏观结合，理论要结合实践，反过来理论又应该指导实践，这是不可脱节的有机联系。
（二）概述
要在自然状态下观察研究对象，如蔬菜或果树的内部结构是极为困难的，必须经过一定的技术，方法，手段来观察研究材料的内部结构，概括起来有两方面：
1.非切片法：
不采用切片，能保持其组织每个单位的完整，如种子纹饰，花粉粒，气孔，毛状体，染色体等。
但彼此间的相互关系（整体封固除外）就不一定看的清楚。
整体封固法，涂抹压片法（压碎法，涂布法），离析法（或离解）法，透明法等均属非切片法。
在电子显微镜中，扫描电镜的观察即属非切片法。
2.切片法：
包埋软材料切片法，硬材料（如果树枝干，木材等）切片法均属切片法，其切制片的结果，使研究材料组织间的各种结构仍是保持着正常的相互关系，对于某一部分的细胞和组织，也能观察得很清楚。
不过因为材料小且切的很薄，在一切片上往往不能看到整个组织，有时甚至一个细胞也被分开两个切片或多个切片。
在电子显微镜中，透射电镜的观察，属切片法。
二应用植物制片方法和技术时，必须注意和掌握的几个问题
（一）实验室注意事项
为保证实验做的顺利，避免忙乱或出差错，必须严格遵守以下注意事项：
1.必须保持室内清洁，包括实验者的双手及各种器皿，用具的清洁。
2.室内各种用具，器皿，药品都需放在一定的位置，所有药品和试剂必需帖上标签，注明名称，配置日期，绝不能凭记忆和感觉去辨认，用后必须放回原处。
剧毒，易燃的要注明。
3.配制所有药品，试剂都必须用清洁，干燥的器皿（事先作好准备），每种器皿用后应趁潮湿时，便放在流水中冲洗，若一时没空冲洗，也应先浸泡水中。
记住及时清洗。
4.几种主要的试剂如酒精，油类，酸类，碱类等取用时，应用量筒，滴管，吸管（移液管）等分开取用。
不可用同一管吸取各种试剂溶液。
倾倒试剂溶液时应标签处近手心，以免药剂沾染标签，试剂溶液倒出后，不能将剩余的有倒回去。
5.装脱水溶液的器皿，一定要将并塞塞紧，以免水气进入，装挥发性药品的容器亦应紧盖，切忌“张冠李戴”错换塞盖。
6.取用酸类时，应特别小心，避免接近眼，鼻，口等。
在稀释时，只准将酸慢慢倒入水中，切不可将水倒入酸中，以免产生爆炸。
也要注意不要过于急剧倒入，免至过分发热，最好不断用玻璃棒搅动。
7.称量药品时，砝码要用干净镊子，称盘上应先垫称量纸（或白而光滑的纸），以便保护量具及以免药剂相混，称量用的药匙一定要分别用干净的，切不可用同一药匙取几种药品。
8.使用药品，试剂要注意节约，不要浪费，用过的废酒精、二甲苯、氯仿丙酮等可分别回收。
9.不要随便将杂物，尤其粘性物如树胶、石蜡、棉胶等倒入水槽，因这些易塞水槽。
若有少量强酸或强碱要冲去，应先开自来水管立即稀释冲去，免侵蚀水槽及下水道。
10.对自己尚未掌握的仪器，切勿乱动，不要随便拆卸。
11.使用喷灯，酒精灯，电炉等，注意远离易燃药品，以保安全，用后即捡收好。
12.每次工作结束或暂告一段落仪器用具要排列整齐，桌面要擦干净，一切废物要及时处理，放入特设废物箱中，切记随便一丢，更不能往窗下丢。
一切有始有终。
13离开实验室记住关电制（冰箱例外）关灯，停电停水先关好电制及水龙头。
14.损坏仪器或打破玻璃仪器，器皿要主动承担责任，登记在登记本上，借物要登记在借物本上。
（二）洗液的配制
⒈强酸氧化剂洗液（根据以下比例，依需要量配备）
重铬酸钾（K2Cr2O7）20克置40毫升水中加热溶解，再加水至100毫升冷却后徐徐加入浓硫酸（H2SO4）100毫升（工业硫酸即可）。
浓硫酸要一滴滴边加边搅拌，每加20毫升时可停一会直至加完100毫升后放冷备用。
（千万不要将水或重铬酸钾溶液加如H2SO4中）
鲜液红褐色，氧化能力很强，用后变黑绿色则无氧化洗涤力。
贮存洗液要加盖，免H2SO4吸水减弱洗涤能力。
⒉碱性洗液：
洗油污的器皿要较长时间（24小时）浸泡，或浸煮，切忌接触会烧伤皮肤。
常用的有：
碳酸钠（Na2CO3）即纯碱
碳酸氢钠（NaHCO3）即小苏打
磷酸钠（NaPO4）即磷酸三钠
磷酸氢二钠（Na2HPO4）
以上各自加水稀释成约5％左右即可。
个别难洗的油污器皿，也有用稀氢氧化钠（NaOH）
或氢氧化钾（KOH）液洗涤。
⒊有机溶剂汽油丙酮CH3COCH3乙醚（C2H5）2O
甲苯C6H5CH3二甲苯C6H4（CH3）2
酒精C2H5OH三氯甲烷（氯仿）CHCl3
但以上溶剂价格昂贵，只有无法用刷子的小件特殊仪器如活塞内空移液管尖头，滴定管尖头,滴定管活塞、滴管、小瓶等才用。
（三）清洗玻璃器皿及玻片
若是新的玻璃器皿，特别是新的玻片，可先用洗液泡浸4—24小时，取出后放在具网的塑料篮中用清水彻底洗净，过蒸馏水一次，然后浸入盐酸酒精（95%酒精100毫升加入浓盐酸2毫升）浸数小时，再用流水冲洗干净，取出浸于95%酒精中备用。
若是用过的玻璃器皿及旧玻片可先用肥皂水或洗衣粉液煮沸5~10分钟或更长，在热水中洗去残留的树脂，浆糊等；清水冲洗；洗液中浸30分钟或更长，用清水洗去余留的洗液，用蒸馏水过洗；在95%酒精浸数分钟即可擦干备用。
若是盖玻片最好用酒精灯火焰稍烘一下，注意酒精纯度要较高的。
（四）我国化学试剂等级及标志
规格同行中印有“GB”符号及号码为国家化学试剂标准；“HG”为化学工业部标准；“HGB”为化学工业部暂行化学试剂标准；“企标”均为企业标准。
我国化学试剂等级标记表
级别
一级品
二级品
三级品
四级品
中文
标志
保证试剂
（优级纯）
分析试剂
（分析纯）
化学试剂
（化学纯）
实验试剂
生物试剂
代号
G、R、
A、R、
C、P、
L、R、
BR或CR
并签
颜色
绿
红
兰
棕或其它
黄或其它
G、R——GuaranteedReagent
A、R——AnalytIcalReagent
C、P——ChemIcalPure
L、R——LaboratoryReagent
（五）植物学上用的长度单位及其代号
Metre
米（M）
MIllImet-re
毫米（mm）
Micron
微米
（μ或μm）
MIllImIc-ron
毫微米
（mμ或nm）
Angstron-unIt
埃（A．）
1
103=千
106=百万
109=十亿
1010=百亿
10-3=1/千
1
103=千
106=百万
107=千万
10-6=1/百万
10-3=1/千
1
103=千
104=万
10-9=1/十亿
10-6=1/百万
10-3=1/千
1
10
10-10=1/百亿
10-7=1/千万
10-4=1/万
0.1
1
（六）试剂的浓度及其配制
制片过程中，常用的试剂，有以水为溶剂的，也有以有机溶剂为溶剂的，一般溶剂如不说明溶剂是什么，即指水溶剂。
其溶液浓度随溶剂里所含溶质的量而定。
表示试剂的浓度方式多种，通常用的有：
1、百分比浓度：
溶液的浓度用溶质对全部溶液量的百分比来表示，而往往在配制稀溶液时不必减去溶质重量的溶剂，而在配制浓溶液时则需减去。
例如：
配0.5%苏丹Ⅲ酒精溶液，是称0.5克苏丹Ⅲ溶解于100毫升的70%酒精中即得。
另例如：
配制30%蔗糖浓溶液，应在100毫升水中减去溶质蔗糖的重量（100-30=70）。
配制时称取30克蔗糖加进70毫升水即得。
此外也有用溶质与溶剂的体积或重量来表示溶液浓度的。
例如硫酸溶液的浓度是1：
5，那就是5体积浓硫酸所配制成。
另例如：
氢氧化钠的浓度是1：
10，那就是10分重量的水和1分重量的氢氧化钠所配成。
要注意比例前面的数字表示试剂的体积。
一般百分比浓度的溶液常按体积比进行稀释，使用起来比较方便。
例如：
配制70%酒精时，把70毫升无水究竟用蒸馏水稀释至100毫升即得。
另例如：
10%氯化钠溶液，即表示在100毫升氯化钠溶液中，含有10克氯化钠，配制时称取10克氯化钠，用蒸馏水溶解后，再加蒸馏水稀释至100毫升即得。
2、克分子浓度（M）：
浓度用1000毫升溶液中含有溶质的克分子数表示，常以M代表，即含有1克分子称为1M。
例如：
用无水酒精配制0.002M的8－羟基喹啉溶液，即为1000毫升溶液中含有0.002克分子溶质8－羟基喹啉的溶液。
配制时，先计算8－羟基喹啉的分子量，其分子式为HOC6H3N：
CHCH：
CH3分子量145.17。
0.002M为1/500M，故称取8－羟基喹啉为145.17/500，即0.29克，然后投入容积为1000毫升的容量瓶中，加入无水酒精溶解后再继续加至瓶颈刻线止。
如果溶质含结晶水，计算分子量时应考虑在内。
3、当量浓度（N）：
浓度用1000毫升溶液中所含溶质的克当数表示。
或称规定溶液，以N代表，含有1克当量称为1N，如含0.1克当量即为十分之一当量溶液（0.1N）等。
在配制当量溶液时，其当量计算因各种化合物而异，如酸的当量是以酸分子中可被金属取代的氢原子数去除。
例如：
H2SO4（分子量98）的当量等于98/2=49。
如碱的当量等于其分子量被碱中金属的原子价去除。
例如：
NaOH（分子量40）的当量等于40/1=40。
若要配制1NHCl，则1000毫升溶液中需要HCl36.5克，如果配制用的是37％HCl，比重为1.19，则每毫升37%HCl含有HC0.4403克（1.19×37%=0.4403），所以36.5克HCl需要37%HCl82.8毫升（36.5÷0.4403=82.8），故配制时取82.8毫升37%HCl置容积为1000毫升的容量瓶中，加蒸馏水至瓶颈刻线为止。
值得注意的是，这样配制的克分子浓度或当量浓度的酸，碱溶液，其浓度是近似的因试剂瓶标签明的浓度是个近似数，特别是HCl易挥发，浓度随着会改变，即使用比重表量得比重，误差也大，而NaOH则易吸收空气中的CO2生成碳酸盐，所以在要求准确度高的使用时，应该再用标准碱（通常用碳酸钠）或标准酸（通常用草酸）滴定校正之，这里不详述。
（七）显微镜的附属用具：
在显微镜下检视制片的组织或细胞的大小及将部分组织或细胞描绘下来，要使用以下附属用具。
1显微测微器（micrometer），此器分两种：
（1）接目测微计（ocularmicrometer）简称目尺为一玻璃园片，其大小恰好可装入通常显微镜的目镜内，片的中央刻有由0.5厘米分50格的等距离线（进口的由1厘米分100格），每格为0.001厘米，即0.1毫米或100微米。
（2）接物测微计（objectmicrometer）简称物尺，是在像载玻片大小的玻片中央以1毫米分100格，每格为0.01毫米即10微米（载玻片左方刻有0.01毫米标记表示每格长度）。
测检制片中某部分组织或细胞前，要先校正系数――用物尺校正目尺在不同倍数的系数（每格相当多少毫米），校正方法是将目尺装入物镜中，再将物尺放入载物台上，然后严格检查若干格的目尺与若干格的物尺相符，记下各自格数依下公式算出：
物尺格数×10
系数＝——————————
相当目尺的格数
（××倍数下目尺每格微米数）
测量时，移去物尺，换上制片，即可用目尺的刻度来测量制片中物象的大小。
所测物长度（ūm）＝系数×目尺格数
例：
在目镜10×物镜×10时校正
物尺5格数相当于目尺15格，依系数公式：
5×10
系数＝————————＝3.3um
15
继在这倍数下测物时，若物长为目尺的4格，则此物长度为3.3×4＝13.2um
2、描绘器（drawingcamera或cameralucida）是安装在显微镜目镜抽管上端专为描绘制片中的物象的附属用具（有称描绘目镜）。
这里介绍国产的北京第三光学仪器厂产的描绘器，它也像显微镜的目镜一样，有不同的倍数，可根据需要选用，在描绘前应先用物尺校正，是从描绘目镜中看到的物尺分格依次在白纸上的直线所标出每格的量线长度都是相等的，即显微镜筒的倾斜度（一般约为45°左右）调整到与描绘器上的平面镜与纸面平行。
然后调整反光镜使能在显微镜视野内的物象同时看到笔尖（一般光线稍暗），并移动笔尖，检查所需描绘的物象均能落在图纸上的适当位置。
这样便可顺势沿着目的物移动笔尖，把图像的轮廓描绘出来。
三植物制片技术中常用药品配制及其基本原理
植物制片的方法虽然很多，繁简不同，但基本原理大同小异。
现以本课程的重点石蜡包埋切制片法，也是目前应用尚比较广的方法技术为主线，分述各步骤环节的基本原理及药品的配制。
（一）固定与固定剂：
固定就是以屋里的方法（如加热）或化学的方法，使材料很快被杀死，并保持其生活时的形状，结构和化学成分的不变，同时使细胞各部分在染色时易于着色。
所谓杀死就是设法立刻停止细胞的各种生命活动。
当前广泛使用的固定方法主要为化学方法，即用化学试剂来作固定剂，力求在生命死亡之前避免发生萎缩，干枯或分裂变化，有时放在水利是不会立即干枯，但外界的微生物也会很快入侵组织，致使组织变坏。
同时活的细胞中都具有各种活动的酶，当细胞死亡以后，本身亦会促进破坏作用，使细胞自行分解，因此，要选择渗透力强的药品，才能保证在很短的时间内迅速浸到材料组织中每一个细胞内。
理想的固定液应具备的条件——迅速渗入材料、杀死原生质、固定其微细结构，使细胞中不至于因固定引起人为的改变，凝固原生质以后，增加细胞对各种穿透的抵抗力，不至于因固定后的处理而使固定原生质变形、（膨胀或缩小）；增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别；可增加媒染作用和染色能力；使组织变硬适于切片，但又不至于材料太坚硬而松脆；固定后又能具保存作用，可放存些日子，不受时间控制那么短暂。
固定液的用量，一般最好为固定材料的总体积的20倍。
材料水份少的可以稍减少用量，含水多的材料，最好多换一次固定液，以保证固定液维持一定的浓度，且注意材料四面都有固定液以保证短期内浸透好，若材料太重会紧压并底，可用线将材料悬起。
一些内部细胞间隙较大的材料有空气，使固定液不易进入，故宜在固定前将材料内的空气抽出、抽气的方法，若有条件的可用真空干燥器带马达抽气，若无条件可用针筒抽气法，示材料的大小，配不同大小的针筒，先将抽筒提出，左手拿针筒，食指带胶指套按住针头插孔，将固定液和材料倒入，然后插入抽筒，并倒转针筒使针头插孔向上，并移去食指，接着将抽筒齐齐推入，直到固定液开始从针头孔冒出为止，此时筒内只有固定液和材料，无其它空隙，再用食指按住针头插孔，右手拔抽筒，连拔2~3次，材料内空气即被抽出，最好再将材料和固定液一起倒回固定瓶内，材料若下沉说明其内空气已被抽出，固定液已透入材料内。
固定剂的种类很多，归纳起来两大类，一类是单一固定液，如酒精（C2H5OH）、甲醛（HCHO）（37~40%）、醋酸（乙酸）（CH3COOH）、铬酸（H2CrO4）、重铬酸钾（K2Cr2O7）、苦味酸（C6H2（NO2）3OH）、氯化汞（HgCL2）、氯仿（CHCL3）；另一类是混合固定液，这里着重介绍几种常用效果比较好的混合固定液及电子显微镜观察制样固定常用的单一固定液的配制。
1、F．A．A固定液配方Ⅰ
50%（柔嫩材料）或70%（坚硬材料）酒精（Alcohol）90毫升
冰醋酸（Aceticacid）5毫升
福尔马林（Farmalim）（37~40%甲醛）5毫升
F．A．A．被称“标准固定液”在植物形态解剖研究上，特别是对器官、组织用途很广泛，但也不是什么都用F．A．A．用作细胞学上的固定它则不及专用的好；对染色体的观察效果亦较差。
其最大的优点是兼有保存剂的作用，材料在此液中可较长期地存放；一般材料固定需18小时以上，用50%酒精或流水冲洗；并可根据不同材料改变醋酸和福尔马林的比例，因醋酸有使原生质发生膨胀的作用，能抵消有酒精或福尔马林造成的收缩现象，故如植物胚胎材料上可改用以下比例。
2、F．A．A．配方Ⅱ
50%酒精89毫升
醋酸6毫升
福尔马林5毫升
3、福尔马林——酒精混合液
70%酒精100毫升
福尔马林（38%甲醛）6~10毫升
此配方适于固定一般植物组织，简单易行而经济，适于野外采集材料时使用，既可固定也较长期保存，固定后可直接用70%酒精脱水。
4、金氏固定液
5%福尔马林100毫升
95%酒精150毫升
纯甘油50毫升
此配方可固定植物根、茎、叶、，滑走式切片的硬材料以此固定液很好。
5、含铬酸的固定液：
能凝固一切蛋白质，适宜固定细胞，尤其固定核酸。
铬酸对脂肪无影响，可固定线粒体，根据固定对象不同，可以有强、中、弱、三种不同配方。
成份
强
中
弱
10%铬酸
10%醋酸
蒸馏水
10毫升
10毫升
80毫升
7毫升
10毫升
83毫升
3毫升
5毫升
92毫升
适宜固定
对象
木质茎坚韧的叶子等
幼嫩组织如根尖、茎尖、子房、胚珠等
丝状藻类、菌类、苔藓和蕨类、原叶体等
6、纳瓦兴（Navaschin’s）固定液（Carf）配法见下表。
常备液
原式
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
Ⅴ
甲液
1%铬酸
1%醋酸
10%醋酸
冰醋酸
75毫升
5毫升
20毫升
75毫升
20毫升
10毫升
30毫升
20毫升
40毫升
30毫升
50毫升
35毫升
乙液
福尔马林
蒸馏水
20毫升
5毫升
5毫升
65毫升
10毫升
40毫升
10毫升
40毫升
15毫升
以上固定液在植物制片上应用极广，特别在细胞学及组织学上是一种优良的固定液，对幼嫩组织如根尖、花药及细胞、胚胎等材料都很适合，（12°~15℃）低温固定效果更优。
自1912年Navaschin’s创立后在应用过程中改良很多，现原式已很少应用。
其中以Ⅲ最常用，本人固定蔬菜材料常用此式，效果很不错。
配方中含有还原剂（福尔马林）和氧化剂（铬酸），故甲、乙液必须在临使用时才能混合。
为了方便常配好的甲、乙液分别贮于棕色并中备用，固定3~5小时用50%酒精冲洗，若固定12小时以上要流水冲洗24小时。
7、卡诺（Carnoy’s）固定液
纯酒精30毫升（6份）
氯仿15毫升（3份）
冰醋酸5毫升（1份）
也可用纯酒精15毫升（3份）
冰醋酸5毫升（1份）
上两配方均有极快渗透力，用于植物组织及细胞，固定时间都很短，如根件、茎尖、花粉、花蕊等只需15~60分钟，在这固定液中固定不宜超过一天，免细胞变脆或膨胀变形。
花粉母细胞或根尖涂压片观察染色体均常用上配方，若固定后未能及时制片，需先用95%酒精冲洗，然后保存在70%的酒精中。
8、戊二醛（C5H8O2）固定液：
戊二醛固定液为非凝固性固定剂，渗透力很强，是强还原剂，对保存蛋白质结构效果很好，还能保存某些酶的活性，因此在电子显微镜观察的制样固定常用它，也可以用于组织化学方面的测定。
商品戊二醛都为水溶液，出售的浓度有8%、25%、50%、70%，高浓度的溶液比较容易自发凝聚起来而不能用，所以通常最好购买25%的溶液，贮存在2~4℃备用。
商品戊二醛常含有微量的戊二酸，会使溶液PH偏低，不适宜用作固定。
用前可在溶液液内加入碳酸钡（BaCO3），100毫升戊二醛内加入2克碳酸钡摇动5~10分钟，后过滤备用。
用作固定液时，一般浓度为2~4%，可按下表配制：
0.2M磷酸缓冲液（毫升）
25%戊二醛
（毫升）
重蒸馏水
（毫升）
戊二醛最终
浓度%
50
50
50
50
8
10
12
16
42
40
38
34
2.0
2.5
3.0
4.0
附0.2M磷酸缓冲液的配制
原液Ⅰ：
将2.76克磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）或3.12克NaH2PO4·2H2O溶于100毫升重蒸馏水中即成0.2M的磷酸二氢钠溶液。
原液Ⅱ：
3.56克磷酸氢二钠（NaH2PO4·H2O）或5.36克NaH2PO4·7H2O或7.16克NaH2PO4·12H2O溶于100毫升重蒸馏水中即成0.2M的磷酸氢二钠。
将Ⅰ和Ⅱ依下表混合成不同PH缓冲液50毫升。
PH
6.4
6.6
6.8
7
7.2
7.4
原液Ⅰ
36.7
31.3
25.5
19.5
14.0
9.5
原液Ⅱ
13.3
18.7
24.5
30.5
36.0
40.5
配成后用酸度计或精密PH试纸测其实际PH值，一般若药品、操作均无问题，PH应该准确。
一般用以配固定液的磷酸缓冲液最
好配成PH７.２～７.４，即中性略偏碱为好。
如PH大于７.４时可再加Ⅰ液调整，反之加Ⅱ液调整，直到PH达到７.２～７.４的范围为止。
若需形态组织结构方面的电镜观察，最好在用戊二醛固定之后，接着用１～２％锇酸重复固定０.５～２小时，但在重复固定时前，一定要把残留在细胞内的戊二醛洗干净，免至与锇酸起反应，形成黑色沉淀物，毁坏样品的影象。
９、锇酸固定液：
锇酸固定液又称四氧化锇（ＯSＯ4），也是一种很好的非凝固性固定剂，它不单能固定蛋白质，同时对一些脂类，尤其是不饱和的脂类，具有很好的固定作用，因此它能将戊二醛未能固定的组织加以固定，锇酸是一种强烈的氧化剂，不能与酒精、甲醛液混合，商品锇酸通常为０.１、０.２５、０.５、１克晶体，密封在玻璃管内，锇酸剧毒，它释放出来的气体，只要闻上一分钟左右，便可以使嗅觉细胞永远失去知觉。
故在配制时要特别注意安全，必须在抽气槽（或通风橱）内进行，且要小心操作。
可先在密封玻璃管外用小砂轮刻上一圈痕，用洗液浸泡一夜，取出用蒸馏水洗数次，再以重蒸馏水洗，用干净滤纸擦干，放入事先洗干净烘干
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