01AGILENT 1100高效液相色谱仪安装确认方案解析.docx

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01AGILENT1100高效液相色谱仪安装确认方案解析

质量控制部

高效液相色谱仪确认方案

设备编码：

QCD-JY-001

方案编号：

QCD.EV.12001.IQOQPQ

XXXXX药业有限公司

1目的

2范围

3职责

4参考文件

5系统描述

6确认的实施

6.1人员及人员培训确认

6.2安装确认

6.3运行确认

6.4性能确认

7偏差报告

8偏差清单

9安装确认结论和报告

10变更控制

起草

审核

审核

批准

生效日期

部门

质量控制部

质量控制部

质量保证部

质量管理

负责人

职务

检验员

负责人

负责人

副总

签名

日期

1.

目的

为了确认本公司质量控制部XXXX高效液相色谱仪的安装、运行和性能是否符合《药品生产质量管理规范（2010年修订）》的要求和检测要求。

通过确认，证明此设备安装、运行、性能等符合设备要求和使用维护要求，根据风险评估的结果，对XXXX高效液相色谱仪的安装、运行及性能提出要求，并能有效达到，降低检测风险。

2.范围

本确认范围为安装在质量控制部的的XXXX高效液相色谱仪的安装、运行、性能确认。

3.职责

序号

部门

验证职责

1

质量控制部QC

负责起草验证方案，实施验证方案，出具验证报告。

2

质量保证部QA

负责验证方案的数据收集审核，监控验证过程。

3

质量管理负责人

负责验证方案与报告的批准。

4.参考文件

《药品生产质量管理规范（2010年修订）》

《药品GMP指南质量控制实验室与物料管理》（中国医药科技出版社）

《药品生产验证指南2003》（化学工业出版社）

《中国药典》2010年版（中国医药科技出版社）

国家计量检定规程：

高效液相色谱仪JJG705-2002

5.系统描述

XXXX型高效液相色谱仪，主要由输液系统、进样系统、柱温控制系统和检测系统组成，全部由XXXX公司生产。

主要用于公司原辅料、中间产品和成品的鉴别、含量、有关物质的检测。

6确认的实施

6.1人员确认

列出和确认所有执行本方案的人员，并确保每个参与确认的人员都得到了培训。

标准要求和确认记录见附表1。

6.2安装确认

6.2.1硬件、资料的确认和售后服务保障

查看仪器的各部件是否齐全。

检查仪器所带资料是否齐全。

记录仪器设备的售后联系方式。

标准要求和确认记录见附表2。

6.2.2安装条件确认

对照使用说明书要求安装，确认环境、电源等符合要求。

标准要求和确认记录见附表3。

6.3运行确认

在不提供任何样品的前提下，运行仪器以确认仪器运行是否正常及是否符合设计要求。

标准要求和确认记录见附表4。

6.4性能确认

6.4.1泵性能确认

6.4.1.1泵耐压确认

将仪器各部分连接好，以100%甲醇为流动相，流量为1ml/min，启动仪器，压力稳后保持10min，用滤纸检查各管路接口处应无湿迹。

卸下色谱柱，堵住泵出口端，使压力达到最大允许值的90%，保持5分钟无泄漏。

标准要求和确认记录见附表5。

6.4.1.2泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差SR的确认

按要求设定流量，启动仪器，压力稳定后，在流动相出口处用事先清洗称重的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按下式计算Ss和SR。

式中Fm－－Fm=（W2-W1）/（ρt·t），流量实测值，ml/min;

W2－－容量瓶+流动相的质量，g；

W1－－容量瓶的质量，g；

ρt－－实验温度下流动相的密度，g/cm3;

t－－收集流动相的时间，min；

－－同一组测量的算术平均值，ml/min；

FS－－流量设定值，ml/min；

Fmax－－同一组测量中流量最大值，ml/min；

Fmin－－同一组测量中流量最小值，ml/min；

标准要求和确认记录见附表6。

6.4.1.3梯度误差的确认

由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序，A溶剂为纯水，B溶剂为含0.1%丙酮的水溶液，B经由5个阶梯从0变到100%，如下图所示。

将输液泵和检测器连接（不接色谱柱），开机后以A溶剂冲洗系统，基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线。

求出A,B溶剂不同比例时的输出信号值，重复测量2次，计算平均值。

从B溶剂的含量及对应的输出信号值，按下式计算梯度误差Gci，取Gci最大者作为仪器梯度误差。

记录见下表

式中：

－－第i段梯度误差（%）；

－－第i段输出信号值平均值；

－－各段输出信号平均值的平均值。

标准要求和确认记录见附表7。

6.4.2柱温箱性能确认

柱温箱温度设定值误差ΔTS和温控稳定性Tc的确认

将数字温度计控头固定在柱温箱内，选择35℃、45℃和60℃进行检定。

设定温度，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值。

平均值与设定值之差为ΔTS，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性Tc。

标准要求和确认记录见附表8

6.4.3紫外检测器的性能确认

6.4.3.1紫外检测器的波长示值误差和波长重复性确认

将高效液相色谱仪开机，正常运行后，用注射器将紫外波长标准溶液（标准波长为235nm，257nm，313nm和350nm）从检测器入口注入样品池中冲洗，并将池流满。

将检测器波长调到低于标准波长5nm处，调节检测器的波长，每5～10s改变1nm,画出如下图所示的信号值折线，折线的最高点或最低点对应的波长与标准溶液波长之差为波长示值误差。

每个波长重复测定3次，其中最大值与最小值之差为波长重复性误差。

标准要求和确认记录见附表9。

6.4.3.2紫外检测器基线噪声和基线漂移的确认

选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，紫外检测器的波长选择254nm，待仪器稳定后记录基线60min，计算基线噪声和漂移。

标准要求和确认记录见附表10。

6.4.3.3紫外检测器最小检测浓度的确认

选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，紫外检测器的波长选择254nm，取10～20ul的1×10-7g/ml的萘/甲醇溶液，记录色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰-峰高，按下式计算最小检测浓度cL（按20ul进样量计算）。

式中：

cL－－最小检测浓度，g/ml；

Nd－－基线噪声峰-峰高，AU；

c－－标准溶液浓度，g/ml；

H－－标准溶液的色谱峰高，AU；

V－－进样体积，ul。

标准要求和确认记录见附表11

6.4.3.4紫外检测器的线性范围的确认

检测波长选择254nm，用2%的异丙醇/水溶液冲洗检测池至平衡，记录响应值，再分别用丙酮/2%异丙醇系列的水溶液（丙酮含量为0.1%，0.2%，0.3%，0.4%，0.5%，0.6%，0.7%，0.8%，0.9%，1.0%）冲洗检测池，并记下各溶液对应的稳定的响应值，每个溶液重复测量3次，取算术平均值。

以5个丙酮含量（0.1%，0.2%，0.3%，0.4%，0.5%）和对应的响应值做标准曲线，在曲线上找出丙酮含量大于0.5%各点的读数，与对应含量的测量值做比较，测量值低于读数5%时，认为曲线弯曲，此点的浓度作为检测上限cH。

选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，紫外检测器的波长选择254nm，取10～20ul的1×10-7g/ml的丙酮/甲醇溶液，记录色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰-峰高，按下式计算最小检测浓度cL（按20ul进样量计算）。

由cH/cL算出检测器的线性范围。

式中：

cL－－最小检测浓度，g/ml；

Nd－－基线噪声峰-峰高，AU；

c－－标准溶液浓度，g/ml；

H－－标准溶液的色谱峰高，AU；

V－－进样体积，ul。

标准要求和确认记录见附表12。

6.4.4荧光检测器性能确认

6.4.4.1荧光检测器波长示值误差和重复性

将高效液相色谱仪开机，正常运行后，用注射器将1×10-5g/ml萘/甲醇溶液（萘在激发波长290nm和发射波长330nm有最大荧光强度）从检测器入口注入样品池中冲洗，并将池流满。

将检测器激发波长调到290nm处，改变发射波长，从325nm到335nm，每5～10s改变1nm,画出如下图所示的信号值折线，折线的最高点或最低点对应的波长与标准溶液波长之差为波长示值误差。

每个波长重复测定3次，其中最大值与最小值之差为波长重复性误差；将发射波长调到测得的曲线最高点对应的波长，改变激发波长，从285nm到295nm，用与前面相同的方法测出激发波长的示值误差和重复性误差。

标准要求和确认记录见附表13

6.4.4.2荧光检测器基线漂移和基线噪声的确认

选用C18色谱柱，以85%甲醇/水溶液为流动相，流量为1.0ml/min，激发波长先在345nm，发射波长选在455nm，基线稳定后记录基线60min，记录检测器的基线噪声和基线漂移。

标准要求和确认记录见附表14

6.4.4.3荧光检测器最小检测限浓度的确认

选用C18色谱柱，以85%甲醇/水溶液为流动相，流量为1.0ml/min，激发波长先在345nm，发射波长选在455nm，基线稳定后，将10ul～20ul的1×10-9g/ml的硫酸奎宁/高氯酸水溶液，记录色谱图，按下式计算最小检测浓度（按20ul计算）。

式中：

cL－－最小检测浓度，g/ml；

Nd－－基线噪声峰-峰高，AU；

c－－标准溶液浓度，g/ml；

H－－标准溶液的色谱峰高，AU；

V－－进样体积，ul。

标准要求和确认记录见附表15。

6.4.4.4荧光检测器的线性范围的确认

激发波长选择345nm，发射波长选择455nm，用0.05mol/L的高氯酸水溶液冲洗检测池至平衡，记录响应值，再分别用硫酸喹宁/高氯酸水溶液系列的水溶液（硫酸喹宁含量为1×10-5g/ml，2×10-5g/ml，3×10-5g/ml，4×10-5g/ml，5×10-5g/ml，6×10-5g/ml，7×10-5g/ml，8×10-5g/ml，9×10-5g/ml，1×10-4g/ml）冲洗检测池，并记下各溶液对应的稳定的响应值，每个溶液重复测量3次，取算术平均值。

以5个丙酮含量（1×10-5g/ml，2×10-5g/ml，3×10-5g/ml，4×10-5g/ml，5×10-5g/ml）和对应的响应值做标准曲线，在曲线上找出丙酮含量大于5×10-5g/ml各点的读数，与对应含量的测量值做比较，测量值低于读数5%时，认为曲线弯曲，此点的浓度作为检测上限cH，由cH/cL算出检测器的线性范围。

标准要求和确认记录见附表16。

6.4.5示差折光检测器的确认

6.4.5.1示差折光检测器基线漂移和基线噪声的确认

选用C18柱，以水为流动相，流量为1ml/min，参比池充满流动相，待仪器稳定后，记录基线60min。

计算基线噪声和基线漂移。

（室温波动不超过2℃）

标准要求和确认记录见附表17。

6.4.5.2示差折光检测器最小检测浓度的确认

选用C18柱，以水为流动相，流量为1ml/min，参比池流满流动相，待仪器稳定后，用10～20ul的1×10-5g/ml丙三醇水溶液，记录色谱图，按下式计算最小检测浓度cL。

标准要求和确认记录见附表18。

6.4.5.3示差折光检测器线性范围确认

用水反复冲洗样品池与参比池，并充满参比池，稳定后记录读数。

依次向样品池中注入1×10-3g/ml，2×10-3g/ml，3×10-3g/ml，4×10-3g/ml，5×10-3g/ml，6×10-3g/ml，7×