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关于壁虎不同提取工艺成分抗肿瘤作用的研究
【编者按】：
医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果
的论说性文章。
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关于壁虎不同提取工艺成分抗肿瘤作用的研究
作者：
李钦青，孙明江，代龙，孔令提
【摘要】目的比较壁虎不同提取工艺成分对S180和H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及免
疫器官的影响。
方法以肉瘤S180、肝癌H22荷瘤小鼠作为动物模型，以抑瘤率及胸
腺、脾脏指数为指标比较壁虎原粉及水煎煮、胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶酶解、仿生酶
解等不同工艺成分的抗肿瘤作用。
结果3种酶解工艺成分对肉瘤S180和H22肝癌抑瘤
率均明显高于原粉与水煎煮液，相比模型组有显著性差异（P0.05），但对荷瘤小鼠的胸
腺指数、脾脏指数无明显影响。
结论壁虎酶解工艺成分对S180、H22荷瘤小鼠均有明
显抗肿瘤作用。
1
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【关键词】壁虎;酶解;抗肿瘤;S180;H22
壁虎，别名守宫、壁虎、蝎虎、天龙，味咸性寒，功能祛风，定惊，散结，解毒。
壁虎作为药材始见于《本草经集注》，而《本草纲目》就称其能治瘰疬初起血积成
痞，反胃膈气，痈疮大痛。
其可入血分透筋达络，既善破血散结解毒，又能通经活
络而止痛。
随着壁虎多种药理活性，特别是抗肿瘤活性被发现后[1]，人们对壁虎的关
注度日益提高。
目前壁虎临床一般以原粉、水煎煮等方法应用，存在服用量大、易被
微生物污染等缺点。
现代药理研究表明，动物类药材发挥作用的主要为其小分子肽
[2～4]，因此，我们拟采用酶解方法得到其小分子肽，并与常规原粉和水煎煮液比较其
抗肿瘤作用的差异。
1材料
1.1动物昆明种小鼠，雄性，体质量（202）g，购自山东中医药大学实验动物中心，动
物许可证号为：
SCXK（鲁）20050015。
S180腹水小鼠和H22肝癌小鼠均购自山东省医
学科学院。
1.2仪器JJ-2型组织捣碎机，江苏江南仪器厂;摇摆式高速中药粉碎机，浙江大德中
药器械有限公司;W-O型恒温水浴锅,上海申顺生物科技有限公司，TDL-5飞鸽牌离心
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机，上海安亭科学仪器厂;小型切向流超滤系统，美国Millipore公司（密理博）。
1.3试剂及药品胃蛋白酶（酶活力1200U/g），胰蛋白酶（酪蛋白转化力25.0），均购
自国药基团化学试剂有限公司，注射用环磷酰胺，200mg/支，江苏恒瑞医药股份有限
公司，批号：
08051354，氟尿嘧啶注射液（5-Fu），上海旭东海普药业有限公司，批
号:
080302。
壁虎购自济南兴旺蟾业，经本校周风琴教授鉴定系壁虎科动物无蹼壁虎
GekkoswinhonisGunther的干燥全体，置干燥箱60℃以下真空干燥，粉碎，过80目
筛，细粉备用。
2方法
2.1供试品溶液的制备
2.1.1原粉液的制备取壁虎细粉，用0.2%羧甲基纤维素将其稀释成1ml∶0.5g的混
悬液，备用。
2.1.2水煎煮提取液的制备取壁虎细粉，加8倍量水煮沸煮沸60min，离心，残渣加
8倍量水煮沸30min，离心，合并上清液，浓缩至1:
0.5（每毫升药液相当于0.5g药
材，下同），即得水煎煮提取液。
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2.1.3胃蛋白酶酶解液的制备[5]取壁虎细粉90g，置于组织捣碎器中，加入5倍量
水，匀浆（10000r/min）10min，等分为3份，取1份，煮沸15min，放冷，调节pH
2.0，移至37℃恒温水浴锅中，保温10min，加入1%胃蛋白酶，2h后取出，离心（4
000r/min）10min，取上清液，微滤（0.22m），超滤（相对分子质量3000），收集相对分子
质量小于3000部分，浓缩至1∶0.5，即得胃蛋白酶酶解液。
2.1.4胰蛋白酶酶解液的制备[6]取2.1.3项下一份样品液，煮沸15min，放冷，调节
pH7.5，移至55℃恒温水浴锅中，保温10min，加入1%胰蛋白酶，3h后取出，离心
（4000r/min）10min，取上清液，微滤（0.22m），超滤（相对分子质量3000），收集相对分
子质量小于3000部分，浓缩至1∶0.5，即得胰蛋白酶酶解液。
2.1.5仿生酶解液的制备取2.1.3项下一份样品液，煮沸15min，放冷，调节pH
2.0，移至37℃恒温水浴锅中，保温10min，加入1%胃蛋白酶，2h后取出，调节pH
7.5，移至55℃恒温水浴锅中，保温10min，加入1%胰蛋白酶，3h后取出，离心（4
000r/min）10min，取上清液，微滤（0.22m），超滤（相对分子质量3000），收集相对分子
质量小于3000部分，浓缩至1∶0.5，即得仿生酶解液。
tips:
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【编者按】：
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关于不同生长季节玳玳果中总黄酮的定量分析研究
作者：
刘永静，陈丹，邱红鑫，叶梦屏
【摘要】目的研究不同生长季节玳玳果中总黄酮的含量差异，以便更有效地利用玳
玳果总黄酮。
方法以柚皮苷为对照品，运用紫外可见分光光度法对不同生长季节的玳
玳果中总黄酮含量进行定量分析，检测波长为284nm。
结果建立了玳玳果总黄酮的含
量测定方法，结果表明不同生长季节的玳玳果中总黄酮含量存在一定的差异。
结论所
建立的含量测定方法精密度、稳定性及重复性良好，准确度高，可做为玳玳果总黄酮
的定量分析方法，且玳玳青果中总黄酮的含量最高。
【关键词】玳玳果;总黄酮;生长季节;定量分析
Abstract：
ObjectiveTostudythecontentoftotalflavonoidsfromCitrusaurantiumL.var
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daidaiTanakafruitsgatheredindifferentseasonsforeffectiveutilization.MethodsThe
contentwastotalflavonoidsanalyzedbyultravioletspectroscopy.Thenaringinwasusedas
thechemicalreferencesubstanceandthedetectionwavelengthwassetat284nm.ResultsThe
determinationmethodoftotalflavonoidswasestablished.Thecontentofthetotalflavonoids
gatheredindifferentgrowingperiodswasevidentlydifferent.ConclusionThemethodis
sensitive,accurate,reproducibleandcanbeusedtocontrolthequalityofthetotalflavonoids
fromCitrusaurantiumL.vardaidaiTanakafruits,andthequalityofgreenfruitsisthebest.
Keywords：
CitrusaurantiumL.vardaidaiTanakafruits;Totalflavonoids;Growing
seasons;Quantitativeanalysis
玳玳又称代代CitrusaurantiumL.vardaidai，是芸香科柑桔亚属植物，为酸橙的变
种，在我国福建、四川、浙江等地都有栽培。
玳玳的未成熟果实称玳玳花枳壳或苏枳
壳，幼果有被当作枳实入药，具有理气宽中、行滞消胀的功效，主要用于胸腹满闷胀
痛、食积不化、痰饮、胃下垂、脱肛、子宫脱垂等病症[1,2]。
实验证明，玳玳果中含
黄酮、生物碱、挥发油等活性成分，其中黄酮类成分以柚皮苷等为主要成分，具有良
好的抗氧化活性[3～5]，而不同采收期的玳玳果中总黄酮含量不同。
为了确保玳玳药材
的质量稳定性和对药材的合理利用，本研究以玳玳果总黄酮中代表性成分柚皮苷为指
标成分[6]，分析比较了不同生长季节的玳玳果中总黄酮的含量。
1仪器与试药
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1.1仪器BP-211D型电子分析天平（德国Sartorius公司）;FA2004电子天平（上海精密
科学仪器有限公司）;UV-4802双光束紫外可见分光光度计（尤尼柯上海仪器有限公司）。
1.2试药玳玳果（福建恒馨天然香料有限公司提供;福建中医学院中药鉴定教研室范世
明高级实验师鉴定）;柚皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：
110722-200610）;
甲醇等试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1对照品溶液的制备精密称定柚皮苷对照品5.08mg，置50ml量瓶中，加甲醇适
量使溶解，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含0.1016mg的溶液，即得。
2.2供试品溶液的制备取新鲜晾干的玳玳幼果果皮、青果果皮、橙果果皮分别低温烘
干，粉碎，过20目筛，即得玳玳果皮粗粉。
精密称取玳玳果皮粗粉50g，置250ml
锥形瓶中，用6倍量的75%的乙醇回流提取，共回流提取3次，每次2h，合并提取
液，回收乙醇使成浸膏，减压干燥呈橙色粉末，即得玳玳幼果、青果、橙果果皮醇提
粉末。
分别精密称取玳玳幼果、青果、橙果醇提粉末各20.0mg，置50ml量瓶中，加甲醇
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适量使溶解，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
2.3测定波长的选择分别取对照品溶液和供试品溶液，以甲醇为溶剂空白，在230～
400nm波长范围扫描，结果显示，对照品溶液和供试品溶液的吸收光谱图基本一致，
最大吸收波长均在284nm，故测定波长选择284nm。
结果见图1。
1.玳玳果醇提液2.
柚皮苷对照品图1吸收光谱图
2.4标准曲线的制备与线性关系的考察分别精密吸取柚皮苷对照品溶液0.4，0.7，
1.0，1.3，1.6，1.9，2.1ml于10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，以甲醇为空白，在
284nm波长处测定吸光度。
以浓度（C，mg/ml）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制
标准曲线，得回归方程为A=3.634101C-4.60910-3，r=0.9998，柚皮苷在0.004064～
0.021336mg/ml范围内呈良好的线性关系。
标准曲线见表1，图2。
2.5精密度实验分别精密吸取同一供试品溶液6份，按样品含量测定项下同法操
作，计算。
结果见表2。
表1线性关系测定结果图2标准曲线表2精密度实验结果
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2.2抗肿瘤作用的比较[7]
2.2.1对S180荷瘤小鼠的影响无菌抽取传代8d的S180腹水小鼠腹腔肿瘤细胞，加
入生理盐水调整浓度至4109个/L，于每只小鼠右腋下注射0.2ml，接种140只。
接种
24h后，将小鼠随机分为7组，每组20只，即模型组、原粉组、水煎煮组、胃蛋白酶
酶解组、胰蛋白酶酶解组、仿生酶解组与阳性对照组。
模型组灌胃生理盐水10mlkg-
1，连续10d;原粉组、水煎煮组、胃蛋白酶酶解组、胰蛋白酶酶解组、仿生酶解组均5
g药材kg-1药液，连续10d;阳性对照组腹腔注射环磷酰胺，剂量30mgkg-1，连续3
d;给药量均为10mlkg-1。
第11天，各组动物颈椎脱臼处死，剥离肿瘤、胸腺、脾
脏，称重，计算抑瘤率、胸腺与脾脏指数，计算公式如下：
抑瘤率（%）=（空白组瘤重均值-样品组瘤重均值）/空白组瘤重均值100%
胸腺（脾脏）指数=重量（mg）/体质量（g）
2.2.2对H22荷瘤小鼠的影响建模方法、给药方式、剂量均同S180荷瘤小鼠（对照组
为5-Fu，25mgkg-1）。
2.3统计学方法实验数据采用SPSS10.0统计软件进行分析，所有测定数值以s表
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器官的影响
4讨论
壁虎在临床上常用于肿瘤，特别是消化道肿瘤的治疗，一般焙干研细或水煎煮入
药，但壁虎起抗肿瘤作用的物质基础还不清楚。
小分子肽抗肿瘤作用逐渐引起了人们
的注意。
越来越多的研究表明，动、植物含有小分子肽具有很好的抗肿瘤作用，世界
上许多国家正在竞相研究开发小分子肽类抗肿瘤的防治药物，如谷胱甘肽、海参五
肽、槲寄生肽、胸腺五肽等[8，9]。
本研究运用酶解的方式，使壁虎含有的蛋白类成分
酶解成小分子肽，对其抗肿瘤作用进行研究。
研究结果表明，壁虎经酶解后的抗肿瘤
作用明显高于原粉组与水煎煮组。
本实验中的壁虎仿生酶解是指模拟人体消化过程，先用胃蛋白酶酶解，再以胰蛋白
酶酶解的方法，对壁虎药材进行酶解。
小分子肽的界限划分迄今未有明确定义，鉴于国内外热门研究小分子肽的相对分子
质量都在3000以下[10]，本实验中3种酶解液均为经过超滤所得的相对分子质量小于
3000的小分子肽。
【参考文献】
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医药卫生栏目
13
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