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1、推荐下载关于壁虎不同提取工艺成分抗肿瘤作用的研究键入文字关于壁虎不同提取工艺成分抗肿瘤作用的研究【编者按】：医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。论文网为您提供医药论文范文参考，以及论文写作指导和格式排版要求，解决您在论文写作中的难题。关于壁虎不同提取工艺成分抗肿瘤作用的研究作者：李钦青，孙明江，代龙，孔令提【摘要】 目的比较壁虎不同提取工艺成分对 S180 和 H22 荷瘤小鼠的抑瘤作用及免疫器官的影响。方法以肉瘤 S180、肝癌 H22 荷瘤小鼠作为动物模型，以抑瘤率及胸腺、脾脏指数为指标比较壁虎原粉及水煎煮、胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶酶解、仿生酶解等不同工

2、艺成分的抗肿瘤作用。结果 3 种酶解工艺成分对肉瘤 S180 和 H22 肝癌抑瘤率均明显高于原粉与水煎煮液，相比模型组有显著性差异(P 0.05)，但对荷瘤小鼠的胸腺指数、脾脏指数无明显影响。结论壁虎酶解工艺成分对 S180、H22 荷瘤小鼠均有明显抗肿瘤作用。1键入文字【关键词】 壁虎; 酶解; 抗肿瘤; S180; H22壁虎，别名守宫、壁虎、蝎虎、天龙，味咸性寒，功能祛风，定惊，散结，解毒。壁虎作为药材始见于本草经集注，而本草纲目就称其能治 瘰疬初起 血积成痞，反胃膈气，痈疮大痛 。 其可入血分透筋达络，既善破血散结解毒，又能通经活络而止痛。随着壁虎多种药理活性，特别是抗肿瘤活性被发现

3、后1， 人们对壁虎的关注度日益提高。目前壁虎临床一般以原粉、水煎煮等方法应用，存在服用量大、易被微生物污染等缺点。现代药理研究表明，动物类药材发挥作用的主要为其小分子肽24，因此，我们拟采用酶解方法得到其小分子肽，并与常规原粉和水煎煮液比较其抗肿瘤作用的差异。1 材料1.1 动物昆明种小鼠，雄性，体质量(20 2)g，购自山东中医药大学实验动物中心，动物许可证号为：SCXK(鲁)20050015。S180 腹水小鼠和 H22 肝癌小鼠均购自山东省医学科学院。1.2 仪器 JJ-2 型组织捣碎机，江苏江南仪器厂;摇摆式高速中药粉碎机，浙江大德中药器械有限公司;W-O 型恒温水浴锅,上海申顺生物科

4、技有限公司，TDL-5 飞鸽牌离心2键入文字机，上海安亭科学仪器厂;小型切向流超滤系统，美国 Millipore 公司(密理博)。1.3 试剂及药品胃蛋白酶(酶活力 1 200 U/g)，胰蛋白酶(酪蛋白转化力 25.0)，均购自国药基团化学试剂有限公司，注射用环磷酰胺，200 mg/支，江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：08051354，氟尿嘧啶注射液(5-Fu)，上海旭东海普药业有限公司，批号:080302。壁虎购自济南兴旺蟾业，经本校周风琴教授鉴定系壁虎科动物无蹼壁虎Gekko swinhonis Gunther 的干燥全体，置干燥箱 60以下真空干燥，粉碎，过 80 目筛，细粉备用。2

5、方法2.1 供试品溶液的制备2.1.1 原粉液的制备取壁虎细粉，用 0.2%羧甲基纤维素将其稀释成 1 ml0.5 g 的混悬液，备用。2.1.2 水煎煮提取液的制备取壁虎细粉，加 8 倍量水煮沸煮沸 60 min，离心，残渣加8 倍量水煮沸 30 min，离心，合并上清液，浓缩至 1:0.5(每毫升药液相当于 0.5 g 药材，下同)，即得水煎煮提取液。3键入文字2.1.3 胃蛋白酶酶解液的制备5取壁虎细粉 90 g，置于组织捣碎器中，加入 5 倍量水，匀浆(10 000 r/min)10 min，等分为 3 份，取 1 份，煮沸 15 min，放冷，调节 pH2.0，移至 37 恒温水浴锅

6、中，保温 10 min，加入 1%胃蛋白酶，2 h 后取出，离心(4000 r/min)10 min，取上清液，微滤(0.22 m)，超滤(相对分子质量 3 000)，收集相对分子质量小于 3 000 部分，浓缩至 10.5，即得胃蛋白酶酶解液。2.1.4 胰蛋白酶酶解液的制备6取 2.1.3 项下一份样品液，煮沸 15 min，放冷，调节pH 7.5，移至 55 恒温水浴锅中，保温 10 min，加入 1%胰蛋白酶，3 h 后取出，离心(4 000 r/min)10 min，取上清液，微滤(0.22 m)，超滤(相对分子质量 3 000)，收集相对分子质量小于 3 000 部分，浓缩至 10

7、.5，即得胰蛋白酶酶解液。2.1.5 仿生酶解液的制备取 2.1.3 项下一份样品液，煮沸 15 min，放冷，调节 pH2.0，移至 37 恒温水浴锅中，保温 10 min，加入 1%胃蛋白酶，2 h 后取出，调节 pH7.5，移至 55 恒温水浴锅中，保温 10 min，加入 1%胰蛋白酶，3 h 后取出，离心(4000 r/min)10 min，取上清液，微滤(0.22 m)，超滤(相对分子质量 3 000)，收集相对分子质量小于 3 000 部分，浓缩至 10.5，即得仿生酶解液。tips:感谢大家的阅读，本文由我司收集整编。仅供参阅！4键入文字【编者按】：医药论文是科技论文的一种是用

8、来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。论文网为您提供医药论文范文参考，以及论文写作指导和格式排版要求，解决您在论文写作中的难题。关于不同生长季节玳玳果中总黄酮的定量分析研究作者：刘永静，陈丹，邱红鑫，叶梦屏【摘要】 目的研究不同生长季节玳玳果中总黄酮的含量差异，以便更有效地利用玳玳果总黄酮。方法以柚皮苷为对照品，运用紫外可见分光光度法对不同生长季节的玳玳果中总黄酮含量进行定量分析，检测波长为 284 nm。结果建立了玳玳果总黄酮的含量测定方法，结果表明不同生长季节的玳玳果中总黄酮含量存在一定的差异。结论所建立的含量测定方法精密度、稳定性及重复性良好，准确度高，可做为玳玳果总黄酮的定量分

9、析方法，且玳玳青果中总黄酮的含量最高。【关键词】 玳玳果; 总黄酮; 生长季节; 定量分析Abstract：ObjectiveTo study the content of total flavonoids from Citrus aurantium L. var5键入文字daidai Tanaka fruits gathered in different seasons for effective utilization. MethodsThecontent was total flavonoids analyzed by ultraviolet spectroscopy. The nari

10、ngin was used asthe chemical reference substance and the detection wavelength was set at 284nm.ResultsThedetermination method of total flavonoids was established. The content of the total flavonoidsgathered in different growing periods was evidently different.ConclusionThe method issensitive, accura

11、te, reproducible and can be used to control the quality of the total flavonoidsfrom Citrus aurantium L. var daidai Tanaka fruits, and the quality of green fruits is the best .Key words：Citrus aurantium L. var daidai Tanaka fruits;Total flavonoids;Growingseasons;Quantitative analysis玳玳又称代代 Citrus aur

12、antium L. var daidai，是芸香科柑桔亚属植物，为酸橙的变种，在我国福建、四川、浙江等地都有栽培。玳玳的未成熟果实称玳玳花枳壳或苏枳壳 ，幼果有被当作枳实入药，具有理气宽中、行滞消胀的功效，主要用于胸腹满闷胀痛、食积不化、痰饮、胃下垂、脱肛、子宫脱垂等病症1,2。实验证明，玳玳果中含黄酮、生物碱、挥发油等活性成分，其中黄酮类成分以柚皮苷等为主要成分，具有良好的抗氧化活性35，而不同采收期的玳玳果中总黄酮含量不同。为了确保玳玳药材的质量稳定性和对药材的合理利用，本研究以玳玳果总黄酮中代表性成分柚皮苷为指标成分6，分析比较了不同生长季节的玳玳果中总黄酮的含量。1 仪器与试药6键入文

13、字1.1 仪器 BP-211D 型电子分析天平(德国 Sartorius 公司);FA2004 电子天平(上海精密科学仪器有限公司);UV-4802 双光束紫外可见分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司)。1.2 试药玳玳果(福建恒馨天然香料有限公司提供;福建中医学院中药鉴定教研室范世明高级实验师鉴定);柚皮苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110722-200610);甲醇等试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 对照品溶液的制备精密称定柚皮苷对照品 5.08 mg，置 50 ml 量瓶中，加甲醇适量使溶解，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含 0.101 6 mg 的溶液，即得。2.2

14、供试品溶液的制备取新鲜晾干的玳玳幼果果皮、青果果皮、橙果果皮分别低温烘干，粉碎，过 20 目筛，即得玳玳果皮粗粉。精密称取玳玳果皮粗粉 50 g，置 250 ml锥形瓶中，用 6 倍量的 75%的乙醇回流提取，共回流提取 3 次，每次 2 h，合并提取液，回收乙醇使成浸膏，减压干燥呈橙色粉末，即得玳玳幼果、青果、橙果果皮醇提粉末。分别精密称取玳玳幼果、青果、橙果醇提粉末各 20.0 mg，置 50 ml 量瓶中，加甲醇7键入文字适量使溶解，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。2.3 测定波长的选择分别取对照品溶液和供试品溶液，以甲醇为溶剂空白，在 230400 nm 波长范围扫描，结果显

15、示，对照品溶液和供试品溶液的吸收光谱图基本一致，最大吸收波长均在 284 nm，故测定波长选择 284 nm。结果见图 1。1.玳玳果醇提液 2.柚皮苷对照品图 1 吸收光谱图2.4 标准曲线的制备与线性关系的考察分别精密吸取柚皮苷对照品溶液 0.4，0.7，1.0，1.3，1.6，1.9，2.1 ml 于 10 ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，以甲醇为空白，在284 nm 波长处测定吸光度。以浓度(C ，mg/ml)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为 A=3.634 101C-4.609 10-3，r=0.999 8，柚皮苷在 0.004 0640.021 336 m

16、g/ml 范围内呈良好的线性关系。标准曲线见表 1，图 2。2.5 精密度实验分别精密吸取同一供试品溶液 6 份，按 样品含量测定 项下同法操作，计算。结果见表 2。表 1 线性关系测定结果 图 2 标准曲线 表 2 精密度实验结果tips:感谢大家的阅读，本文由我司收集整编。仅供参阅！8键入文字2.2 抗肿瘤作用的比较72.2.1 对 S180 荷瘤小鼠的影响无菌抽取传代 8 d 的 S180 腹水小鼠腹腔肿瘤细胞，加入生理盐水调整浓度至 4 109 个/L，于每只小鼠右腋下注射 0.2 ml，接种 140 只。接种24 h 后，将小鼠随机分为 7 组，每组 20 只，即模型组、原粉组、水煎

17、煮组、胃蛋白酶酶解组、胰蛋白酶酶解组、仿生酶解组与阳性对照组。模型组灌胃生理盐水 10 ml kg-1，连续 10 d;原粉组、水煎煮组、胃蛋白酶酶解组、胰蛋白酶酶解组、仿生酶解组均 5g 药材 kg-1 药液，连续 10 d;阳性对照组腹腔注射环磷酰胺，剂量 30 mg kg-1，连续 3d;给药量均为 10 ml kg-1。第 11 天，各组动物颈椎脱臼处死，剥离肿瘤、胸腺、脾脏，称重，计算抑瘤率、胸腺与脾脏指数，计算公式如下：抑瘤率(%)=(空白组瘤重均值-样品组瘤重均值)/空白组瘤重均值 100%胸腺(脾脏)指数=重量(mg)/体质量(g)2.2.2 对 H22 荷瘤小鼠的影响建模方法

18、、给药方式、剂量均同 S180 荷瘤小鼠(对照组为 5-Fu，25 mg kg-1)。2.3 统计学方法实验数据采用 SPSS 10.0 统计软件进行分析，所有测定数值以 s 表9键入文字器官的影响4 讨论壁虎在临床上常用于肿瘤，特别是消化道肿瘤的治疗，一般焙干研细或水煎煮入药，但壁虎起抗肿瘤作用的物质基础还不清楚。小分子肽抗肿瘤作用逐渐引起了人们的注意。越来越多的研究表明，动、植物含有小分子肽具有很好的抗肿瘤作用，世界上许多国家正在竞相研究开发小分子肽类抗肿瘤的防治药物，如谷胱甘肽、海参五肽、槲寄生肽、胸腺五肽等8，9。本研究运用酶解的方式，使壁虎含有的蛋白类成分酶解成小分子肽，对其抗肿瘤作

19、用进行研究。研究结果表明，壁虎经酶解后的抗肿瘤作用明显高于原粉组与水煎煮组。本实验中的壁虎仿生酶解是指模拟人体消化过程，先用胃蛋白酶酶解，再以胰蛋白酶酶解的方法，对壁虎药材进行酶解。小分子肽的界限划分迄今未有明确定义，鉴于国内外热门研究小分子肽的相对分子质量都在 3 000 以下10，本实验中 3 种酶解液均为经过超滤所得的相对分子质量小于3 000 的小分子肽。【参考文献】11键入文字tips:感谢大家的阅读，本文由我司收集整编。仅供参阅！1 叶云珍. 中药壁虎的研究进展J.中药材，2009，32(7):1160.2 Shimonishi Y. Peptide Science-Present

20、 and FutureM.Dordrecht:Kluwer AcademicPublishers，1999:436.3 王爱华，柳美玲，戴志明，等.小肽的吸收机制与营养价值研究进展J.上海畜牧兽医通讯，2008，2:7.4 王克夷.开发小肽，筛选新药J.中国生化药物杂志，2003，24(1):48.5 钱 方，邓 岩，刘 阳，等.胃蛋白酶水解大豆蛋白的研究J.中国乳品工业，2001，29(3):10.12键入文字6 黄开华，周艳明，吴 畏，等.胰蛋白酶酶解鹿血条件的优化J.湖北农业科学，2007，46(2):302.7 徐叔云.药理学实验方法学M.北京：人民卫生出版社，2001:1270.8 徐桂华，毕力夫，苏秀兰.抗肿瘤生物活性肽研究进展J.中国医药生物技术，2007，2(2):130.9 张延坤，张东祥.生物活性肽的抗肿瘤作用及其机理研究进展J.中国生化药物杂志，2006，27(6):379.10 刘绛光，张海鸿.小分子肽分离方法研究进展J.中国生化药物杂志，2005，26(4):244.医药卫生栏目13键入文字tips:感谢大家的阅读，本文由我司收集整编。仅供参阅！14