血常规全自动分析仪COULTERLH750仪器sop编写附件.docx

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3．仪器原理、性能、方法原理

1.1白细胞计数原理

1.1.1电阻抗法：

血细胞是一种不良导体，将血标本稀释、溶血后制成白细胞悬液，在负压的作用下，悬液流经一个带有微孔的恒压电路时，每个细胞会产生一个电阻脉冲信号，这些信号经过微机的放大、甄别、整形等处理，最后计算出单位体积内的白细胞数。

1.1.2光学法：

血标本在稀释液和溶血剂的作用下制成一定浓度的白细胞悬液，根据流体力学的鞘流技术原理，使得白细胞一一流经仪器检测器，每个细胞在通过检测器时都会受到一束固定波长的激光照射，微机根据光的折射、反射、前向角等信号识别和计数细胞。

1.2白细胞分类原理

1.2.1体积、电导、光散射法：

血标本在特殊的稀释液和溶血剂作用下红细胞被破坏，但白细胞形态和结构仍保持自然状态。

当白细胞在鞘流的引导下流经检测器时，会同时受到V、C、S3种技术的检测。

V是利用电阻抗法测定细胞体积；C是利用高频电磁波，根据各种细胞核浆的电导性不同测量细胞内部结构、核浆比例；S是利用光散射原理测量细胞内颗粒的大小、密度等结构特性。

计算机根据这3种技术得到的资料综合分析，将中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞一一分开，以白细胞分类散点图显示这些细胞，并提示异常淋巴细胞、幼稚细胞、有核红细胞、抗溶血红细胞等信息。

1.2.2电阻抗与射频技术分类法：

通过4个不同的检测系统完成白细胞的分类：

嗜酸性细胞、嗜碱性细胞利用其特有的抗酸和抗碱能力，在各自特殊试剂的作用后，进入独立通道直接计数；在直流电和交流电的同时作用下，仪器根据细胞大小以及细胞内部的核结构、核浆比例、胞浆颗粒等信息区分中性、淋巴、单核细胞；幼稚细胞由于其膜上脂质成份比成熟细胞少，在硫化氨基酸的保护下具有一定的抗溶血能力，在独立的通道内直接计数。

1.3红细胞检测原理

1.3.1红细胞计数（RBC）、平均红细胞体积（MCV）、血细胞比容（HCT）、红细胞分布宽度（RDW）一般采用电阻抗法。

原理同白细胞计数。

1.3.2血红蛋白浓度（HGB）测定：

采用溶血比色法。

血标本在溶血素的作用下，红细胞破坏，溶血素与血红蛋白结合成稳定的氰化血红蛋白（或HGB-季胺盐衍生物）。

在特定波长（通常为530～550nm）下比色，吸光度的变化与液体中血红蛋白含量成正比，溶血液在流经比色池时仪器根据吸光度计算出HGB的含量。

1.3红细胞平均血红蛋白含量（MCH）、红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）是根据RBC、HCT、HGB计算而得。

1.4血小板检测原理

1.4.1电阻抗法：

血小板测定与红细胞计数原理一致，仪器将直径2～30fl的颗粒统计为血小板，大于36fl的颗粒统计为红细胞。

1.4.2光学法：

根据同质性球体光散射的Mie理论，当球形化的血小板单个通过激光照射区时，仪器在两个角度测定激光的散射强度：

高角度主要测细胞的折射指数（RI），它与细胞的密度有关；低角度主要测细胞体积的大小。

血小板的体积在1～30fl，RI在1.35～1.40。

微机对存储的测量信息进行分析处理，得出血小板计数结果。

4．环境要求

5．开、关机程序

3.1联机电脑开机

选择OK，工作站检查口令并开始正确运行。

3.2仪器开机

3.2.1确认仪器已打开电源。

如电源关着，按稀释器键盘的PowerOn。

3.2.2气泵开着。

如果电源气泵灯红色或未开，或者分析仪屏幕空白时，表示气泵关着。

在稀释器键盘上按PrimeApert启动气泵系统。

3.2.3查电源和压力水平。

状态和功能水平显示

输入电压（AC）状态绿色

输出电压（DC）状态绿色

气泵（Pneu）状态绿色

温度（Temp）状态绿色

60PSI（60±5）PSI

30PSI（30±1）PSI

5PSI（5±0.1）PSI

Vaccum22mmHg以上

ACLine＞90V

顺时针调节增加压力，逆时针调节减少压力。

3.2.4查各计数池功能是否正常。

3.3初始化

3.3.1在稀释器键盘上按StartUp，开始自动开机测试。

3.3.2观察测试的正常试剂流动。

3.3.3查开机测试结果。

3.3.3.1在中央命令栏选择QA→日期显示每日开机测试结果。

3.3.3.2采取适当措施解决未通过的项目

3.3.3.2.1当试剂背景通不过时，确认试剂信息已被正确输入，更换过期的试剂。

3.3.3.2.2当空白背景通不过时，执行背景测试或重新按StartUp，检查最近是否作了校准，这可能会影响开机测试结果。

3.3.3.2.3当稀释器、分析仪、电源、信息传送、HGB电压或VCS通不过时，重新按StartUp。

3.3.3.2.4当精密度测试通不过时，确认清洁后小孔被稀释液覆盖且计数池中没有清洁液，再重复精密度测试。

3.3.3.2.5当斜率试验通不过时，确认清洁后小孔被稀释液覆盖且计数池中没有清洁液，再重复斜率测试。

3.4关机

3.4.1操作每日关机（每24h至少执行1次）：

在稀释器键盘，按ShutDown，让清洁剂浸泡管道30min以上，再关掉工作站。

3.4.2操作延长关机

3.4.2.1　按ShutDown，让清洁剂浸泡管道30min以上。

3.4.2.2　将网织红细胞的管道从试剂中移开，用去离子水清洗外面的管道，并将管道放入去离子水中浸泡。

3.4.2.3　把其他管道从试剂容器中拿开，并把这些管道放进去离子水中浸泡。

3.4.2.4　按ShutDown用去离子水灌注清洁管道系统。

3.4.2.5　按F17用去离子水冲洗清洁泵系统。

3.4.2.6　按F673次用去离子水冲洗所有的试剂管道。

6．试剂加载程序

4.1试剂信息更换

4.1.1在中央命令栏选SystemSetup→QA→Reagent，显示可更换的试剂信息。

4.1.2如使用配套专用试剂，确定库尔特试剂栏已选√。

输入试剂批号，按Tab。

4.1.3核对试剂打开的有效日期，输入试剂的储存有效期。

选

保存更换。

7．样品加载程序

5.1标本测定模式

5.1.1选择测定模式：

在工作站监视屏幕下方DefaultType处选择处理标本的默认实验类型。

可以选C，CD，CDR，CR，和R。

屏幕显示当前测定模式。

5.1.2进样管次的编号：

分析仪屏幕出现SystemRun→按AspirationsTube→键入进样号码→Enter。

5.1.3启动/关闭血液探测器：

回到分析仪屏幕，按MainMenu→System　Configuration→Blood　Detector直到出现适合的设置，按System　Run测定标本。

5.2标本进样模式

5.2.1自动进样模式：

每个标本在测定时读取标本架的号码和标本在标本架上的位置，自动读取试管的条形码。

5.2.2手工进样模式：

在稀释器键盘输入标本ID。

5.3标本测定

5.3.1自动进样模式测试标本

5.3.1.1试管装载标本架，将标本架安稳地放在稀释器右侧的加载床上，仪器自动开始测试。

5.3.1.2测定时仪器自动读取样本试管的条形码，如读不出则自动读取标本架的号码和标本在标本架上的位置，还是读不出则报警。

5.3.2手工进样模式测试标本。

5.3.2.1在稀释器键盘按ID，输入标本ID号

5.3.2.2打开标本管塞子，进样针头浸入试管，仪器自动吸取标本。

当听到嘀的一声后将试管从进样针头移走。

5.4结果查询和处理

5.4.1检查标本结果

5.4.1.1在中央命令栏选择Patient显示患者测试屏幕。

在此屏幕中可选择Results　&　Graphics结果或图形窗口，显示标本测定的参数、识别信息统计、CBC数据、分类数据、网织红细胞数据等。

5.4.1.2查询结果时将窗口更新成显示当前标本，可浏览图形、统计表、详细的参数结果。

5.4.1.3要检查分析过程的资料,在结果或图形窗口选择ReaerchData显示分析资料窗口，检查随机识别信息、各计数孔的结果、附加参数、标志和代码、可疑/确定信息、拟合曲线等。

5.4.2检查二维点射图

5.4.2.1默认形式下，点射图显示不同细胞群的分布情况。

不同颜色代表不同类型的细胞。

颜色的深浅表示细胞的数目——颜色越鲜艳细胞密度越大。

5.4.2.2　双击点射图后，此图放大显示，选择Close回到正常大小。

在放大窗口顶部选择参数按键，从点射图移除相应的细胞群。

选择Expand显示典型的的VCS散点图（DF1）和分类数据图，但不能从图上移走细胞群。

5.4.3检查三维点射图

5.4.3.1选择3DDataPlot（s）显示三维点射图窗口，检查标本三维分类数据图。

5.4.3.2　3D点射图显示不同细胞群在其中的分布情况。

不同颜色代表不同类型的细胞。

颜色的深浅表示细胞的数目——颜色越鲜艳细胞密度越大。

5.4.3.3在三维分类数据图窗口边选择一个参数按键，从图中移走相应的细胞群。

当再次选择相关细胞群时，工作站自动刷新该三维数据图。

5.4.3.4改变比例：

拖滚动条可旋转点射图的角度；也可使用下列操作

选　择结　　　　　果

AutoRotate旋转点射图

Playback从始至终进行分析

Rewind倒退分析至最初

Forward前进分析至最后

5.4.4检查直方图

5.4.4.1双击直方图可看到放大版本.选择Cancel返回到正常大小。

5.4.4.2检查：

个别细胞位置与正常或典型的位置比较；细胞群之间分开数量与正常或典型分开的比较；每个细胞群的相关集中与正常或典型集中的比较；不常见或非典型的细胞群出现。

5.4.5编辑标本结果

5.4.5.1在中央命令栏选择PatientResults屏幕。

5.4.5.2找到想要编辑的结果，选择EditthisSample窗口。

5.4.5.3根据需要可编辑以下内容：

预先指定、阅读的识别信息；参数结果；统计表信息。

8．日常操作程序（流程图）

开机自检→质控检测→输入工作表→加载标本→测定操作→结果审核→报告。

9．检测项目设置程序

10．校准程序

8.1校准要求

8.1.1为了准确性和可比性，要求对血液学分析仪定期进行校准，通常一年校准两次。

8.1.2仪器安装时由厂家进行校准并提供校准记录。

8.1.3在维修或更换重要部件后，以及室内质控结果有漂移或平均室内温度改变超过校准温度10℃以上时应进行校准，并记录校准结果。

仪器校准后，必须开展室内质控，监测结果是否发生漂移。

8.1.4建立校准程序并写成文件，记录校准物的溯源性、来源、名称及其保存方法。

8.2校准方法

8.2.1仪器在校准前用清洁液浸泡管道、测试室30min。

8.2.2做本底计数、重复性（连续测10次）、携带污染试验，均应合格。

8.2.3校准物的准备：

配套校准物从冰箱内取出，室温放置15min，检查效期、是否变质或污染，充分混匀；打开瓶塞时，垫上纱布或软纸。

8.2.4取1支校准物在仪器上连续检测11次，结果填写到校准表格中，取2～11次的均值，计算相差百分比。

8.2.5计算各参数的均值与定值相差的百分比，计算公式：

（均值－定值）/定值×100%。

8.2.6仪器校准用判别标准（百分比差异，%）：

　　　————————————————————

参数第1列第2列

————————————————————

WBC1.510.0

RBC1.010.0

Hb1.010.0

MPV2.0　　10.0

MCV1.010.0

Plt3.015.0　　　

　　—————————————————————

8.2.7各参数均值与定值相差的百分比判定：

差异等于或小于第1列数值，不需调整；差异界于第1列与第2列数值之间，需调整；差异大于第1列数值，需维修。

8.3校准结果的验证

8.3.1取另一支校准物在已校准仪器上连续检测11次，结果填写到校准验证表格中，取2～11次的均值，计算相差百分比。

8.3.2各参数的差异全部等于或小于第1列数值，校准合格。

反之，为不合格。

11．日维护程序

每日执行StartUp程序，仪器自动进行开机清洗。

每日执行ShutDown程序，仪器自动进行关机清洗。

12．周维护程序

仪器除尘、清洗进样针周围。

13．月维护程序

清洗计数池、清洗分血片、清洗空气过滤网。

14．注意事项

8.2仪器到期需要进行校验前3个月，由使用人员报告生化室主管和科主任，由科主任向医院设备科汇报，与公司有关人员取得联系，由公司派工程师进行校验。

8.3在规定的校验周期内，如进行了特定保养、故障维修、仪器搬动或（室内质控）失控无法纠正时，也可申请进行仪器校验。

8.4仪器校验由工程师按厂家标准进行，至少应包含以下内容

8.4.1检测仪器电源电压、温度、液压及气压系统。

8.4.2校正仪器电路部分、气液路、机械部分；更换应该更换的管道与部件。

8.4.3调整仪器光路部分。

8.5校准后使仪器各个性能技术指标尽可能恢复至出厂时的状态，并由工程师针对各项指标进行验证，记录各项数据。

8.6校验完成后，由校验工程师填写书面报告，并与实验室负责人共同签字。

签字后的校验报告存档，归档在仪器管理档案中。

5校准品与校准

5.1校准品：

使用与仪器配套的校准品PLUS5或新鲜全血。

5.2校准的方法参见本室的《BECKMANCOULTERLH750自动血液学分析仪校准程序》。

5.3校准没有规定的间隔时间，一般每六个月作一次校准。

但在仪器的重要部件更换后，故障维修后，质控测定发生严重失控时，也进行校准。

6质控品与质控规则

6.1质控品：

使用与仪器配套的质控品，有正常值与异常值两种浓度水平。

质控的项目为RBC、WBC、PLT和HB四项。

6.2质控操作与要求参见本室的《BECKMANCOULTERLH750自动血液学分析仪室内质控程序》。

6.3质控规则采用L-J质控，以±3s为控制限，s由本实验室自己的实验数据中得到。

6.4如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到在控状态后开始标本检测。

15．常见问题的处理

16．有关引用程序与文件

COULTERLH750操作手册

17．SOP涉及的记录与表格

15.1使用、维护记录表

15.2试剂更换记录表

15.3模式间比对记录表

15.4失控及失控处理记录表

15.5结果镜检修正记录表

4试剂

4.1抗凝剂：

150g/L的EDTA-K2水溶液。

4.2试剂：

LH750五分类血球仪配套试剂包括清洗液，稀释液，溶血剂，分类剂。

4.3添加与更换同一批号的试剂，可连续添加使用

4.4试剂在室温保存可稳定至失效期。

（二）BECKMANCOULTERLH750自动血液分析仪　分析参数设置程序

1试剂信息更换

1.1在中央命令栏选SystemSetup→QA→Reagent，显示可更换的试剂信息。

1.2如使用配套专用试剂，确定库尔特试剂栏已选√。

输入试剂批号，按Tab。

1.3核对试剂打开的有效日期，输入试剂的储存有效期。

选

保存更换。

2质控设置

2.1在中央命令栏选SystemSetup→QA→Controls，显示已设置的质控信息。

2.2选

，选择质控品来源、类型及质控水平。

2.3选SetupLabLimits设置质控的实验室界限。

2.4编辑所需要的数值：

参考值、自动停止、自动传送、指定值、预期值、分类方式参数、网织方式参数、实验室界限、限定值。

2.5选

，保存参考值并返回到已有的质控设置列表。

选

返回到系统设置窗口。

3乳胶参考值设定

3.1在运行此程序之前，必须要完成设置质控中的操作步骤。

明确是否将结果自动传送到信息系统。

3.2输入乳胶质控的批号并按Tab，输入质控的有效日期并按Tab。

确定是否将其作为默认的批号。

3.3在适当区域输入数值：

分类方式参数、网织方式参数。

选

保存参考值并返回到设置新质控文件夹窗口。

4全血细胞质控参考值设定

4.1在运行此程序之前，必须要完成设置质控中的操作步骤。

明确是否将结果自动传送到信息系统。

4.2输入质控批号并按Tab，输入质控的有效日期并按Tab，确定是否将其作为默认的批号。

4.3在适当区域输入数值：

确定值、允许范围。

选

保存参考值并返回到设置新质控文件夹窗口。

5X-B分析设置

5.1在中央命令栏选SystemSetup→QA→X-B，显示X-B。

5.2通过X-B分析可以自动停止标本检测，确定自动停止详情。

5.3输入各参数的靶值和界限值，按Tab键在不同区域间移动。

选

保存更改。

6报告显示标记/阳性标志符设置

6.1在中央命令栏选SystemSetup→GeneralSettings→DisplayLabels，进入显示标识符信息。

6.2若改变各标识符/阳性标识显示，可输入要显示的标识，出现在工作站或报告单上数据旁的相关区域。

选

保存更改。

7报告参数确定

在中央命令栏选SystemSetup→Patient→Parameters，显示并确认在分析系统上可获得的参数。

选

保存更改。

8报告单位设置

8.1在中央命令栏选SystemSetup→Patient→ReportingUnits，显示工作站报告信息。

8.2选择报告单位格式，可以通过选Custom建立SI5、SI6、SI7格式，并确定各参数的单位。

8.3用特殊数字符号显示所指定的几组参数。

选

保存更改。

9标识范围设置

9.1在中央命令栏选SystemSetup→Patient→FlaggingLimits，显示设置的标记范围列表，选

建立新的范围。

9.2输入与规定的属性相关的名称。

确定与区域相关的范围；确定与年龄相关的范围。

9.3在设置新范围窗口选

，保存范围名称、区域以及年龄范围。

选择新范围窗口，选ModifyLimitValues，显示标记范围设置窗口。

确认是否要自动更改结果使其与所建范围相符合。

9.4用Tab键在不同区域间移动选择

9.4.1　输入以男性各参数上限和下限值为默认值。

9.4.2　确定女性标本的上限和下限值，并确定是否将未超出范围的结果自动释放。

9.4.3　确定实验室需要处理标本的上限和下限值，并确定是否将未超出范围的结果自动释放。

9.4.4　确定危重的以及需要立即复查的标本上限和下限值，并确定是否将未超出范围的结果自动释放。

9.4.5　确定要定义的信息，并确定是否将未超出范围的结果自动释放。

9.5选

，工作站用范围名称保存范围信息，并返回到患者信息设置窗口的标记范围键。

选√关闭患者信息设置窗口，返回到系统设置窗口。

10标本结果显示标识的标准设置

10.1在中央命令栏选SystemSetup→Patient→Decision　Rule　&　Criteria，显示已有的规则列表。

10.2选择

设置参数标准。

选

建立新标准。

确定标准名称、类型和简称。

定义δ检查标准或反馈标准。

10.3选

返回到设置患者判断标准的键。

用↓和↑键来区分判断标准的优先次序。

选×或□在允许行中分别完成能或不能的判断标准。

选

关闭患者信息设置窗口，返回系统设置窗口。

11报告单设置

11.1在中央命令栏选SystemSetup→GeneralSettings→ReportingOptions，显示定义在工作站的各报告的内容。

11.2各报告的号码（键1～7）：

规定报告形式；规定是否有图形的报告；规定打印输出的选项。

11.3各报告的号码（键8～10）：

选出打印和传送的参数；规定报告形式；规定是否有图形的报告；规定打印输出的选项。

11.4选

关闭患者设置窗口，返回系统设置窗口。

（四）　BECKMANCOULTERLH750自动血液分析仪　室内质控程序

1乳胶质控——用于白细胞分类

1.1检查标准乳胶和质控品的批号。

新批号的质控品，使用前应正确设定。

1.2在稀释器键盘，按F55Enter，显示PressManualOrClearAperture。

1.3按ClearApert，显示PressManualOrPresentSample。

1.4打开标准乳胶小瓶的盖子，进样针头浸入标准乳胶小瓶，仪器自动进样标准乳胶。

当听到嘟的一声时，从进样针处移去小瓶。

1.5在工作站检查标准乳胶的结果。

在Primer栏的结果应≤500。

1.6在稀释器键盘按Enter，再次激活乳胶质控的功能。

显示PressManualOrClearAperture。

轻轻混匀乳胶质控品，进样针头浸入乳胶质控品小瓶，仪器自动吸取质控品。

1.7在工作站检查乳胶质控的结果，在稀释器键盘按Stop退出此功能。

2乳胶质控—用于网织红细胞

2.1检查标准乳胶和质控品的批号。

新批号的质控品使用前应正确设定。

2.2在稀释器键盘，按F56Enter，显示PressManualOrClearAperture。

2.3按ClearApert，显示PressManualOrPresentSample。

2.4打开标准乳胶小瓶的盖子，进样针头浸入标准乳胶小瓶。

仪器自动吸取标准乳胶。

当听到嘟的一声时，从进样针处移去小瓶。

2.5在工作站检查标准乳胶的结果，在Primer栏的结果应≤500。

2.6在稀释器键盘按Enter，再次激活乳胶质控的功能。

显示PressManualOrClearAperture。

轻轻混匀乳胶质控品，进样针头浸入乳胶质控品小瓶，仪器自动吸取质控品。

2.7在工作站检查乳胶质控的结果。

在稀释器键盘按Stop退出。

35C或5C-ES和网织红细胞质控

3.1自动进样模式测试质控品：

确定质控品已在工作站正确设定。

将质控品放到标本架上，再将标本架稳妥地放在载物台上，仪器开始测试质控品。

若质控品试管有条形码标签，则在中央命令栏选择AutoAnalysis进行质控品分析。

检查质控结果。

3.2手工进样模式测试质控品：

确定质控品已在工作站正确设定。

在稀释器键盘上按ID→PrimeApert→键入质控批号→Enter。

打开试管盖，进样针头浸入试管，仪器自动吸取质控标本。

当听到嘟的一声，从进样针头处移去试管，在工作站检查质控结果。

4分析质控结果

4.1在中央命令栏选择QA→QC。

4.2选择所检查结果的特殊质控，质控结果表格、统计表、图形显示在窗口。

4.3用窗口滚动条查看各参数和图形。

用书写对质控运行结果进行注解。

5当质控超出允许范围时

5.1检查质控标本是否正确混匀。

5.2检查质控信息是否正确输入，若使用条形码阅读器，确认条形码标签是干净的且位置正确；如使用稀释器键盘，确认输入了正确信息。

5.3检查质控品信息（指定值和允许范围）是否与质控品说明书上一致，若不是，应将质控品信息改为与说明书上一致。