兔激素性股骨头坏死病程中肝脂肪酶改变的意义.docx
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兔激素性股骨头坏死病程中肝脂肪酶改变的意义
兔激素性股骨头坏死病程中肝脂肪酶改变的意义
【摘要】目的：
探索激素性股骨头坏死病程中肝脂肪酶的变化及其意义.方法：
新西兰大白兔40只随机分为4组，A组：
空白对照；B组：
地塞米松；C组：
地塞米松+丙酸睾酮；D组：
丙酸睾酮.分别在给药的第0,1,3,5wk采血行三酰甘油，总胆固醇，高密度脂蛋白以及HL活性的检测.并于实验的第5,8wk分批处死实验对象，取股骨头标本行骨坏死指标的检测.结果：
B,C组TG,TCH,HDL较A，D组明显升高，B组的HL活性下降，C组的HL活性较B组明显升高，D组较正常组高.B组第8wk镜下可见股骨头内脂肪细胞增多，骨细胞坏死空骨陷窝形成明显；但第5wk时改变轻微.C组也存在类似改变，但病变程度较轻.结论：
激素性股骨头坏死病程中存在高脂血症、HL活性下降，给予HL活性增强剂可以改善血脂紊乱状态，并可以改善骨坏死的程度，延缓其进程.
【关键词】股骨头坏死；肝脂肪酶；高脂血症；糖皮质激素
0引言
股骨头坏死是临床常见病.研究发现不论是乙醇性还是激素性股骨头坏死，病程中都存在血脂代谢异常，研究人员认为血脂代谢异常诱发NFH.肝脂肪酶（hepaticlipase,HL）是脂质代谢过程中的关键酶之一，对维持体内血脂水平起重要作用.但就HL在NFH病程中的变化目前国内外少见报道.我们探讨了NFH病程中HL的变化，以及这种变化与骨坏死之间的关系.
1材料和方法1材料成年新西兰白兔40只，体质量~kg，雌雄各半，随机分为4组，每组10只.A组：
空白对照；B组：
按mg/kg，1次/d，自耳缘静脉iv地塞米松注射液，1wk后改为mg/kg,1次/2d，股后侧im；C组：
在B组给药的基础上，自股后侧im丙酸睾酮注射液5mg/kg,1次/3d；D组：
按上述方法单纯给予丙酸睾酮注射液.肝素钠注射液，丙酸睾酮注射液及地塞米松注射液，三油酸甘油酯及114C三油酸甘油酯，庚烷、丙酮、阿拉伯胶、牛白蛋白，检测血脂及HL的其他试剂均购自于WhitmanBiotech，分析仪为日本Olympus公司AU2700型全自动生化分析仪.
方法实验对象随机分组后按上述方式给药.分别在给药前及给药1,3,5wk清晨禁食前提下，按50U/kg自耳缘静脉iv肝素钠稀释液，15min后自耳缘静脉取血5mL，离心15min，取上清液置液氮内速冻后，置-70℃冰箱内低温保存、备用.将冻存上清液解冻后以酶法检测TG,TCH,HDL含量，参照Inamoto等［1］采用的方法行HL活性的检测.并于实验5,8wk采用随机化方法分两批处死实验对象，取双侧股骨头标本，置40g/L甲醛溶液内固定3d，随后置本研究所自制脱钙液内脱钙2wk，冲洗后经脱水机洗脱24h，将标本石蜡包埋后切片，行HE染色，观察软骨面的变化、软骨下骨质的改变、骨小梁的改变、骨细胞的变化、空骨陷窝的发生情况以及髓腔内脂肪细胞的数量和形态的变化.
统计学处理：
计量资料以x±s表示，用forwindows统计软件进行分析，对检测结果进行不同组别整体间的重复测量的方差分析，检验水准为有统计学意义.
2结果
肝素后HL活性及血脂的变化实验对象给予激素后肝素后血浆HL活性显着降低，降低的程度与激素剂量相关.在实验开始1wk静脉推注大剂量激素时，酶活性降低明显，而自2wk开始减小激素剂量后酶活性略有回升，而没给激素的甲组及丁组检测结果没有这种变动；给予丙酸睾酮HL的活性增强，各组间差异显着.与对照组相比，单纯给予激素组血脂成分明显升高，其中以三酰甘油升高最为显着，胆固醇呈中等程度升高，而HDL轻度升高；联合给药组仅有三酰甘油及总胆固醇升高，以三酰甘油升高为明显，HDL无显着改变；单纯给予丙酸睾酮组，各血脂成分变化无差异性.与单纯给予激素组相比，联合给药组血脂升高程度较低，仍以三酰甘油升高为明显，而HDL处于正常值界限内.减少激素剂量后血脂含量也相应下降.
表1肝素后血浆HL活性及TG，TCH，HDL值
,，在与对照组比较有显着差异前提下，各组间再比较；,，与第一个时间点比较有显着差异前提下，各时间点再比较.
A：
空白对照；B：
地塞米松；C：
地塞米松+丙酸睾酮；D：
丙酸睾酮.
A：
软骨HE×200；B：
骨组织HE×200；C：
髓内脂肪组织HE×100.
图1正常组织结构：
软骨结构正常，排列规则；坏死骨细胞罕见，空骨陷窝率5%；骨小梁沿应力线分布；脂肪细胞数少
图2早期坏死改变：
软骨细胞分布尚均匀规则，骨组织破坏罕见，空骨陷窝10%；髓腔脂肪细胞数量增多，散在分布
图3晚期坏死改变：
软骨细胞分布不均匀，失去层次性，排列紊乱，骨质破坏明显，骨细胞分布不均匀，空骨陷窝率30%；
髓腔脂肪细胞明显增多，直径增大，且多聚集成团
图4治疗早期改变：
镜下见组织正常，仅髓腔脂肪细胞增多，呈散在分布
图5治疗晚期改变：
软骨结构紊乱，细胞分布失去层次性，骨质结构紊乱，空骨陷窝率30%；髓腔脂肪细胞明显增多，呈散在分布
股骨头的病理改变各组股骨头标本外观上无明显差异.A组：
光镜下见关节面无破坏，软骨细胞愈近髓腔愈成熟，排列规则；软骨下骨质无破坏，骨组织排列规则，骨细胞分布均匀，空骨陷窝罕见，空骨陷窝率5%；骨小梁无明显中断或破坏，髓腔脂肪细胞呈散在分布，数目少.B组：
5wk，镜下存在异常改变但不明显，软骨面完整，软骨细胞排列尚规则，无明显软骨细胞坏死；骨组织灶状破坏罕见，空骨陷窝＞10%；骨小梁连续性尚可；髓腔脂肪细胞数量增多，大多呈散在分布.8wk，关节面完整，软骨细胞分布不均匀，排列紊乱，可见空软骨陷窝；软骨下骨质局灶性破坏明显，骨组织结构紊乱，骨细胞分布不均匀，空骨陷窝率＞30%；可见骨小梁连续性中断，结构紊乱；髓腔脂肪细胞明显增多，平均直径增大，且多聚集成团，镜下表现为多个脂肪细胞融合成大的脂肪空泡，髓内组织减少.C组：
5wk，镜下见其余组织正常，仅髓腔脂肪细胞增多，呈散在分布.8wk，镜下见关节面无明显破坏，软骨结构紊乱，软骨细胞分布不均匀，失去层次性，偶见空软骨陷窝；软骨下骨质无明显破坏，但组织结构紊乱，骨细胞分布不均匀，空骨陷窝率30%；骨小梁连续性完整，结构紊乱，灶状新生骨质罕见；髓腔脂肪细胞明显增多，呈散在分布，仅少量聚集成较大的脂肪空泡.D组：
镜下结构同正常对照组.
3讨论
NFH已引起人们高度重视，但其发病机制目前仍未明确.大量临床及动物实验证实不论是在激素性还是在乙醇性NFH病程中存在明显的血脂代谢紊乱，这在激素性NFH病程中尤为明显［2-3］，但其产生机制却悬而未决［4］.HL是体内脂质代谢的三大关键酶之一，对控制体内TG,TCH含量，维持HDL的正常水平起重要作用［5］.我们首次从酶代谢的角度探索骨坏死的产生机制.在参照国内外文献的基础上结合本研究所的经验，我们成功建立了NFH的动物模型.模型组HL活性明显下降，出现显着的血脂代谢紊乱，早期髓腔脂肪细胞增多，骨坏死不明显，后期出现明显的骨坏死改变，髓内组织明显减少.这种结果可能与糖皮质激素抑制HL活性有关［6］.在建立模型的同时给予雄激素［7］后，HL活性又有回升，虽然也出现一定程度的血脂代谢紊乱，但比模型组要轻得多，髓腔脂肪细胞也增多，但融合成脂肪团块的较少，骨坏死改变也较模型组轻得多.统计分析后我们发现，NFH病程中HL活性与血脂状态及骨坏死程度呈负相关关系：
HL活性下降出现血脂代谢紊乱，骨坏死改变明显，活性上调后则这种改变减轻.但HL活性增高对生理状态下的正常血脂含量不起作用，其原因是，虽然单纯给予增强剂组的HL活性比正常组还高，但两者的血脂成分却无显着性差异.
我们认为，NFH的产生可能与机体内HL活性下调有关；糖皮质激素可能是通过某种机制抑制了HL的活性而诱发高脂血症，后者的长期存在造成股骨头髓腔脂肪细胞增多，脂肪栓塞，最终造成股骨头坏死病变的形成；且随用药时间延长，骨坏死愈明显，这与临床病例是吻合的；HL活性增强剂能有效增强酶活性，改善NFH病程中的高血脂状态，减少髓腔脂肪细胞及脂肪栓子的数量，抑制或延缓股骨头坏死病变的形成.由此我们提出这样的设想：
临床长期应用皮质激素治疗各类疾病时，可考虑同时给予HL增强剂或脂质清除剂，以避免或延缓股骨头坏死病变的出现.
【参考文献】
［1］InamotoY,TeramotoT,ShiraiK,etal.Severehypercholesterolemiaassociatedwithdecreasedhepatictriglyceridelipaseactivityandpseudohyponatremiainpatientsafterallogeneicstemcelltransplantation［J］.IntHematol,2005,82（4）:
362-366.
［2］赵德伟，刘强，何伟，等.骨坏死［M］.北京：
人民卫生出版社,2004:
11-34.
［3］李峻辉，宁亚功，叶建红，等.激素性股骨头坏死家兔血液流变学及血脂观察［J］.云南医药,2003,24
（2）:
82-88.
［4］AldridgeJM,UrbaniakJR.Avascularnecrosisofthefemoralhead:
Etiology,pathophysiology,classification,andcurrenttreatmentguidelines［J］.AmOrthop,2004,33（7）:
327-332.
［5］AmbonA,Bertocco ofhepaticlipasetothemetabolismoftriacylglycerolrichlipoproteins［J］.Biochem,2003,31（5）:
1070-1074.
［6］PerretB,MabileL.Hepaticlipase:
Structure/functionrelationship,synthesis,andregulation［J］.LipidResearch,2002,43:
1163-1169.
［7］KarenL,JohnK,JohnD,etal.TestosteroneadministrationtomenincreaseshepaticlipaseactivityanddecreasesHDLandLDLsizein3wk［J］.PhysiolEndocrinolMetab（Am）,2003,284:
E1112-E1118.
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