无菌制剂滴眼剂培养基模拟灌装实用工艺验证.docx
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无菌制剂滴眼剂培养基模拟灌装实用工艺验证
培养基模拟灌装验证
文件编码
VPZ17001
颁发部门
制定部门：
制定人：
日期：
日期：
审核部门：
审核人：
日期：
日期：
批准人：
日期：
生效日期：
年月日
分发部门
质量管理中心
［√］
质量保证部
［］
质量控制部
［√］
生产技术部
［］
设备工程部
［］
采购部
［］
财务部
［］
行政人资部
［］
研发部
［］
销售部
［］
综合无菌
制剂车间
［］
培训
培训部门：
培训岗位：
验证领导小组会签
项目负责人：
日期：
验证协调员：
日期：
QC负责人：
日期：
质量部负责人：
日期：
生产部负责人：
日期：
工程部负责人：
日期：
变更历史
版本号
修订原因与容
修订后版本号
生效日期
验证小组人员
所在部门
职务
主要职责
生产技术部
质量保证部
质量控制部
储运部
设备工程部
培养基模拟灌装验证方案
文件编码
颁发部门
制定部门：
制定人：
日期：
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审核部门：
审核人：
日期：
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批准人：
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生效日期：
年月日
分发部门
质量管理中心
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质量保证部
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质量控制部
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生产技术部
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设备工程部
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采购部
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财务部
［］
行政人资部
［］
研发部
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销售部
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综合无菌
制剂车间
［］
培训
培训部门：
培训岗位：
验证领导小组会签
项目负责人：
日期：
验证协调员：
日期：
QC负责人：
日期：
质量部负责人：
日期：
生产部负责人：
日期：
工程部负责人：
日期：
变更历史
版本号
修订原因与容
修订后版本号
生效日期
1概述
2验证目的
3适用围
4相关部门职责
5验证条件
6验证引用的文件
7培养基
8培养基模拟灌装试验条件
9培养基模拟灌装试验的频率
10培养基模拟灌装量和灌装数量的确定
11培养基模拟灌装最差条件的设计
12培养基配制和无菌灌装操作过程
13取样计划
14试验样品的培养
15试验结果评价
16环境监控和微生物限度控制
17清场与清洁
18培养基灌装过程监控记录
19偏差调差
20纠偏措施
21异常情况处理程序
22变更
23拟定再验证周期
24验证结果评定与结论
附录
附录1：
人员培训
附录2：
系统验证及设备验证确认
附录3：
纯化水检验报告单
附录4：
注射用水检验报告单
附录5：
环境监测报告单
附录6：
胰酪胨大豆肉汤培养基适应性实验结果
附录7：
胰酪胨大豆肉汤培养基灵敏度检查结果
附录8：
培养基及包材确认
附录9：
最差条件确认
附录10：
包材检验结果
附录11：
未参加培养灌装瓶原因说明
附录12：
培养基的培养观察记录
附录13：
培养基的培养阳性结果和培养基灌装失败情况说明
附录14：
培养基灌装过程中监控统计表
附录15：
灌装生产结束清洁记录
附录16：
质控过程监控
产品基本信息：
产品名称
培养基模拟灌装
产品代码
----
规格
-----
批量
6000瓶/批
记录编码
验证车间
滴眼液车间
本次验证工艺关键步骤
称量、配制、过滤、洗瓶、洗塞盖、灌装（无菌转运）
1概述
培养基模拟灌装主要用的是胰酪胨大豆肉汤培养基，适用于天龙药业江北新厂滴眼剂车间生产线。
依据批准的滴眼剂车间培养基模拟灌装验证方案，实施培养基模拟灌装试验；评价无菌生产工艺的可信限度达到可接受的合格标准，确认滴眼剂车间生产过程的可靠性，有效性。
本方案规定了滴眼剂车间培养基模拟灌装的验证方法和标准。
2验证目的
通过对滴眼剂灌装过程中采用与正常生产工艺相同的条件和操作方法（包括生产环境等），向8ml滴眼瓶灌装经过除菌过滤的无菌培养基，在适当条件下培养，并对培养品观察、结果判定的验证，来确定滴眼剂车间生产无菌灌装工艺的无菌保证水平，判定无菌生产要素是否能够达到可接受的合格标准的能力，以确认无菌生产工艺过程的可靠性。
3适用围
本验证方案适用于本公司江北分厂滴眼剂车间滴眼液生产线。
4相关部门职责
部门
职责
验证小组
□负责验证方案的审批。
□负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。
□负责验证数据及结果的审核。
□负责对验证中出现的问题提出指导意见、执行偏差调查、批准变更等。
□负责验证报告的审批。
□负责发放验证证书。
□负责培养基模拟灌装工艺验证周期的批准。
生产技术部
□负责验证方案编制。
□培训操作人员。
□负责设备的清洁、生产操作等工作并提供原始记录
□安排滴眼剂车间进行培养基模拟灌装实际生产。
□负责向验证管理小组及时报告验证中出现的问题。
□对检测结果进行汇总分析。
□起草验证报告。
质量管理部
□负责验证方案的审核。
□负责制订培养基模拟灌装配制药液中间产品和包装成品的取样及检验。
□负责对配制药液中间产品和包装成品进行检测，并根据检验结果出具检验报告单。
□负责验证过程中的环境监测。
□负责验证过程中的标准操作规程执行情况等确认。
□负责验证报告的批准。
5验证条件
5.1所有相关设备及其工艺均要事先通过确认或验证，并符合规定。
如洁净生产区环境须通过静态、动态验证（A级区域的风速、空气的悬浮粒子、浮游菌、沉降菌及表面微生物均要符合相应规定），操作人员的卫生及其操作行为均须经过严格的培训，参加人员的更衣、行为规、微生物知识、标准操作规程等经过培训，生产主要设备（如洗瓶机、洗塞盖机、配液系统、灌装加塞机旋盖等）以及与生产相关的其它辅助工艺（如湿热灭菌、干热灭菌、除菌过滤等），均须通过确认或验证。
确认或验证合格后方可进行培养基模拟灌装验证，本实验要模拟整个无菌操作过程，包括从工器具的灭菌直至完成灌装和容器密封的整个过程，降低实际生产的无菌风险。
本实验要在滴眼剂车间生产中选择最差合理条件进行评估，为实际生产提供依据。
5.2人员培训
对所有参加培养基模拟灌装人员进行培训。
5.2.1更衣、更鞋程序培训
培训主要容：
根据《进入洁净区更衣更鞋标准操作规程》对进入洁净区的工作人员进行培训。
合格标准：
培训人员掌握正确的洗手程序，确保手部的清洁；正确的洁净服穿戴程序，防止对洁净服的污染及将污染物带入洁净区。
5.2.2行为规培训
容：
对进入洁净区的工作人员进行正确的行为规培训。
合格标准：
充分的认识到在洁净区正确的行为的重要性。
5.2.3微生物、清洁、消毒、灭菌知识的培训
容：
对微生物的相关知识、清洁及消毒标准操作规程和灭菌知识进行培训。
合格标准：
了解微生物的种类及生存条件，认识到微生物在药品生产过程中的危害；明确清洁、消毒、灭菌在药品的整个生产过程中的重要性。
5.2.4岗位标准操作规程培训
容：
根据各岗位的标准操作规程进行培训
合格标准：
各岗位操作人员能够掌握相关的岗位知识，熟练的进行岗位操作。
5.2.5培养基模拟灌装实验容的培训
容：
详细讲解培养基模拟灌装实验容及各岗位的相关操作容。
合格标准：
掌握培养基模拟灌装整个过程，包括培养基的配制、灌装过程中所用管线器具的灭菌、管线的安装、洗瓶、洗塞盖、灌装的操作。
5.2.6无菌检查人员对模拟灌装产品的判定培训
容：
讲解培养基和微生物生长繁殖的相关知识。
合格标准：
能准确的判断培养基中是否有微生物的繁殖及受污染的原因。
培训人员
培训容
受训人员
洁净区更衣更鞋标准操作
参加培养基无菌灌装所有工作人员
洁净区工作人员的行为规
参加培养基无菌灌装所有工作人员
微生物、清洁、消毒、灭菌知识
参加培养基无菌灌装所有工作人员
无菌培养基模拟灌装实验容
参加培养基无菌灌装所有工作人员
灌装岗位操作规程培训
参加培养基无菌灌装所有工作人员
培养基和微生物生长繁殖的相关知识
参加培养基无菌灌装所有工作人员
无菌检查人员培训
参加培养基无菌灌装检查人员
6验证引用的文件
6.1相关生产标准规程
序号
名称
文件编号
1
滴眼剂原辅料称量岗位标准操作规程
SOPPZ27001-00
2
配制岗位标准操作规程
SOPPZ27002-00
3
灌装岗位标准操作规程
SOPPZ27003-00
4
理瓶岗为标准操作规程
SOPPZ27004-00
5
洗瓶岗位标准操作规程
SOPPZ27005-00
6
洗塞岗位标准操作规程
SOPPZ27006-00
7
洗盖岗位标准操作规程
SOPPZ27007-00
8
灯检岗位标准操作规程
SOPPZ27008-00
9
包装岗位标准操作规程
SOPPZ27009-00
10
滴眼剂车间过滤器完整性测试标准操作规程
SOPPZ27010-00
6.2相关生产标准操作规程
序号
名称
文件编号
1
综合无菌制剂车间空气净化系统过滤器更换标准操作规程
SOPPZ7001-00
2
综合无菌制剂车间压缩空气过滤器更换标准操作规程
SOPPZ7002-00
3
综合无菌制剂车间称量衡器标准操作规程
SOPPZ7003-00
4
综合无菌制剂车间酒度计使用标准操作规程
SOPPZ7004-00
5
综合无菌制剂车间清洁剂、消毒液标准操作规程
SOPPZ7005-00
6
综合无菌制剂车间紫外灯使用标准操作规程
SOPPZ7006-00
7
综合无菌制剂车间传递窗（柜）标准操作规程
SOPPZ7007-00
8
综合无菌制剂车间物料及其它物品进入车间（生产区）标准操作规程
SOPPZ7008-00
9
综合无菌制剂车间滤芯完整性测试标准操作规程
SOPPZ7009-00
10
综合无菌制剂车间药液过滤介质标准操作规程
SOPPZ7010-00
11
综合无菌制剂车间洁净区洗衣岗位操作规程
SOPPZ7011-00
12
综合无菌制剂车间剩余尾药处理标准操作规程.
SOPPZ7012-00
13
综合无菌制剂车间清场标准操作规程
SOPPZ7013-00
14
综合无菌制剂车间生产用工具清洁标准操作规程
SOPPZ7014-00
15
综合无菌制剂车间特殊清洁标准操作规程
SOPPZ7015-00
16
综合无菌制剂车间水池、地漏清洁标准操作规程
SOPPZ7016-00
17
综合无菌制剂车间洁净区送、回风口清洁标准操作规程
SOPPZ7017-00
18
综合无菌制剂车间空调机组清洁标准操作规程
SOPPZ7018-00
19
综合无菌制剂车间一般区周转容器清洁标准操作规程
SOPPZ7019-00
20
综合无菌制剂车间一般生产区设备清洁标准操作规程
SOPPZ7020-00
21
综合无菌制剂车间一般生产区清洁工具清洁标准操作规程
SOPPZ7021-00
22
综合无菌制剂车间一般生产区工作服清洗、更衣柜清洁标准操作规程
SOPPZ7022-00
23
综合无菌制剂车间D级洁净区工作服清洗标准操作规程
SOPPZ7023-00
24
综合无菌制剂车间C级洁净区工作服清洗标准操作规程
SOPPZ7024-00
25
综合无菌制剂车间洁净区清洁工具清洁操作规程
SOPPZ7025-00
26
综合无菌制剂车间人员进出一般生产区更衣操作规程
SOPPZ7026-00
27
综合无菌制剂车间人员进出D级洁净区更衣操作规程
SOPPZ7027-00
28
综合无菌制剂车间人员进出C级洁净区更衣操作规程
SOPPZ7028-00
29
综合无菌制剂车间传递窗清洁操作规程
SOPPZ7029-00
30
综合无菌制剂车间卫生间清洁操作规程
SOPPZ7030-00
31
综合无菌制剂车间过滤器使用清洁操作规程
SOPPZ7031-00
32
综合无菌制剂车间人员进入生产区手清洁消毒操作规程
SOPPZ7032-00
33
综合无菌制剂车间一般生产区洗衣岗位操作规程
SOPPZ7033-00
34
综合无菌制剂车间A/B级洁净区工作服清洗标准操作规程
SOPPZ7034-00
35
综合无菌制剂车间洁净区清洁标准操作规程
SOPPZ7035-00
36
综合无菌制剂车间一般区清洁标准操作规程
SOPPZ7036-00
37
综合无菌制剂车间烘手器操标准操作规程
SOPPZ7037-00
38
综合无菌制剂车间烘手器清洁标准操作规程
SOPPZ7038-00
39
综合无菌制剂车间手消毒器标准操作规程
SOPPZ7039-00
40
综合无菌制剂车间手消毒器清洁标准操作规程
SOPPZ7040-00
6.3相关的设备标准操作规程
序号
名称
文件编号
1
全自动眼液外盖（塞）清洗机标准操作规程
SOPPZ23001-00
2
高速小圆瓶理瓶机标准操作规程
SOPPZ23002-00
3
立式洗瓶机标准操作规程
SOPPZ23003-00
4
隧道式过氧化氢灭菌烘箱标准操作规程
SOPPZ23004-00
5
灌装加塞旋盖机标准操作规程
SOPPZ23005-00
6
干热灭菌柜标准操作规程
SOPPZ23006-00
7
脉动真空灭菌器（纯蒸汽）标准操作规程
SOPPZ23007-00
8
FFU小推车一台标准操作规程
SOPPZ23008-00
9
配液罐标准操作规程
SOPPZ23009-00
10
灯检工作台标准操作规程
SOPPZ23010-00
11
微波灭菌机标准操作规程
SOPPZ23011-00
12
澄明度检测仪标准操作规程
SOPPZ23012-00
13
全自动眼液外盖（塞）清洗机清洁标准操作规程
SOPPZ23013-00
14
高速小圆瓶理瓶机清洁标准操作规程
SOPPZ23014-00
15
立式洗瓶机标清洁准操作规程
SOPPZ23015-00
16
隧道式过氧化氢灭菌烘箱清洁标准操作规程
SOPPZ23016-00
17
灌装加塞旋盖机清洁标准操作规程
SOPPZ23017-00
18
干热灭菌柜清洁标准操作规程
SOPPZ23018-00
19
脉动真空灭菌器（纯蒸汽）清洁标准操作规程
SOPPZ23019-00
20
FFU小推车一台清洁标准操作规程
SOPPZ23020-00
21
配液罐清洁标准操作规程
SOPPZ23021-00
22
灯检工作台清洁标准操作规程
SOPPZ23022-00
23
微波灭菌机清洁标准操作规程
SOPPZ23023-00
24
澄明度检测仪标准操作规程
SOPPZ23024-00
6.4相关验证文件
序号
文件名称
文件编码
空气净化系统验证报告
粉针生产线厂房验证报告
压缩空气系统验证报告
纯化水制备系统验证报告
注射用水制备系统验证报告
KCZP型超声波自动洗瓶机验证报告
GMS系列隧道式层流灭菌干燥机验证报告
GA55CP-10型固定式螺杆空气压缩机验证报告
CZQ-200纯蒸汽发生器验证报告
RXH-1系列热风循环烘箱验证报告
XG1.U型脉动真空灭菌器验证报告
GCXB型超声波胶塞漂洗罐验证报告
工衣清洗存放验证报告
胶塞清洗存放验证报告
工器具清洗验证报告
玻瓶清洗验证报告
铝盖清洗验证报告
厂房清洁验证报告
KFC系列抗生素玻瓶螺杆分装机验证报告
KFC系列抗生素玻瓶螺杆分装机清洁验证报告
培养基灌装试验报告
BT-300型不干胶自动贴标机验证报告
7培养基
7.1培养基的选择
为了尽可能地检出无菌生产工艺系统中可能会给实际产品造成污染的微生物，所选用的培养基要尽可能适应广谱微生物的生长，包括细菌、霉菌和酵母菌等。
验证试验前，要鉴别验证培养基的可行性。
首先严格按照培养基生产商的要求进行配制和灭菌，然后将无菌培养基灌装至8ml滴眼剂瓶。
同时制备好三种微生物（枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌）的悬浮液，菌液浓度控制为100～1000个菌/ml。
将上述准备无菌培养基分成三等份，且每份至少两瓶，分别加入上述菌悬液各0.1ml。
将接枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的培养基于30～35℃下培养，接有白色念珠菌的培养基于20～25℃下培养。
如果在7天，每种微生物培养基均至少有50％长菌，则认为该培养基可用于无菌工艺验证试验。
根据《无菌制剂GMP实施指南》提供胰酪胨大豆肉汤培养基做上述试验，适用于培养基模拟灌装试验。
7.2胰酪胨大豆肉汤培养基灵敏度检查
本次试验均采用同批号的培养基，根据培养基的正确配制方法进行配制，按照《中国药典》2010年版二部附录中无菌检查法中的培养基灵敏度检查。
7.2.1菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0种），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌〔CMMCC（B）26003〕
铜绿假单胞菌〔CMMCC（B）10104〕
枯草芽孢杆菌〔CMCC（B）63501〕
生孢梭菌〔CMCC（B）64941〕
白色念珠菌〔CMCC（F）98001〕
黑曲霉菌〔CMCC（F）98003〕
本地菌（沉降菌）
7.2.2菌液制备：
接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、本地菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，23～28℃培养24～48小时，接种本地菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，23～28℃培养24～48小时，上述培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100CFU的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100CFU的孢子悬液。
7.2.3培养基接种：
取每管装量为12ml的胰酪胨大豆肉汤培养基11支，分别接种1ml小于100CFU的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、本地菌（沉降菌）各2支、另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的胰酪胨大豆肉汤培养基5支，分别接种1ml小于100CFU的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。
逐日观察结果。
7.2.4结果判断：
空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。
7.3培养基微生物生长性试验
每一批的培养基在使用前都要做微生物的生长性试验，以确认用于实验的培养基的性能。
7.3.1操作方法：
按标准操作规程制备胰酪胨大豆肉汤培养基并灭菌，将灭菌后的培养基分装于20支无菌试管中，在10支试管中接种枯草杆菌，接种量小于100CFU；在另10支试管中接种白色念珠菌，接种量小于100CFU；接种后盖塞、封口并分别在30-35℃和20-25℃培养7天。
7.3.2合格标准：
7天至少50%以上接种的各试管的胰酪胨大豆肉汤培养基中应出现明显的所接种的微生物的生长。
7.4培养基无菌性试验
每一批除菌后的培养基均要做无菌性试验，以确定培养基的无菌性，防止出现假阳性的结果。
培养基模拟灌装试验的结果受培养基无菌性的影响很大，若不能保证培养基在模拟灌装试验前的无菌性，则不能保证试验结果的可信性。
证明培养基的无菌性之后进行模拟灌装的方法，以排除培养基无菌性对此项试验的影响，从而确认模拟灌装试验中污染来源于灌装过程。
7.4.1操作方法：
将除菌过滤后用于模拟灌装的培养基灌装于50ml无菌试管中，盖塞、封口后在相应温度下培养7天。
7.4.2合格标准：
7天各试管胰酪胨大豆肉汤培养基中应无任何微生物生长。
若发现有污染，应明确记录编号、数量，同时检查试管。
7.5影响培养基生长对试样结果不利的风险分析
培养基灌装实验，要求培养基在最适合的条件下进行，要防止由于操作条件等原因抑制微生物生长，从而降低实验的可信度，对培养基微生物抑制风险评估如下：
抑菌影响分析——物料准备、储存过程
风险点
解释
控制方法
配制溶液的注射用水温度高于70℃
高温会抑制微生物生长
将配制培养基的注射用水冷却到室温，在室温下（20-25℃）配制
正常生产溶液PH值偏高或偏低
酸性或碱性环境不利于微生物生长
培养基的PH调整到适合微生物生长的围
配制好的溶液在低温下保存
低温会抑制微生物生长
培养基在储存容器中常温保存
抑菌影响分析——灌装
风险点
解释
控制方法
生产工艺规程中使用惰性气体（如氮气）保护产品
大多数为需氧微生物，惰性气体有一定抑菌作用
用压缩空气或空气来代替惰性气体
培养基灌装量偏少
滴眼剂瓶壁不能被完全接触，微生物不能生长
8ml滴眼剂瓶灌装至少4ml培养基，以保证足够量培养基用于培养
抑菌影响分析——中间过程
风险点
解释
控制方法
对设备的清洗、消毒和灭菌
消毒剂会杀灭微生物
避免设备上的消毒剂残留
正常生产时消毒剂（如喷洒消毒酒精，对操作人员手部消毒）的使用
消毒剂会杀灭微生物
对于模拟试验过程中消毒剂（如喷洒消毒酒精）的使用，应该注意不能超出正常生产时的使用频率，不能将消毒剂直接接触到培养基上
班次轮换，清场消毒
消毒剂会杀灭微生物
对于两班次灌装轮换期间不进行消毒清场
8培养基模拟灌装试验条件
培养基模拟灌装试验的条件是完全与实际的生产条件相同。
8.1环境监测：
对空气悬浮粒子、表面微生物监测、空气浮游菌监测、沉降菌监测。
监测项目
检测合格标准
监测点
空气浮游菌监测
A级环境的测试标准＜1个/m3；B级环境的测试标准≤10个/m3；C级环境的测试标准≤100个/m3；
灌装间
沉降菌监测
A级环境的测试标准＜1个/皿；B级环境的测试标准≤5个/皿；C级环境
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