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（完整）华科考博分子生物学历年真题汇总（葵花宝典2016）s
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华中科技大学同济医学院考博分子生物学（专业基础）简答题历年试题汇总
1.顺式作用元件有哪些,并加以解释。
2015，2012考
2.人类基因组计划的4张图，各自的意义是什么？
3.癌基因激活的主要途径？
问答:
1。
什么是基因治疗,基因治疗的主要策略是什么？
基因治疗的技术及主要内容，2015，2014，2013考
问答2。
蛋白质组学的主要技术有哪些并解释？
2015，2012考
2014简问答题
1.PCR原理,步骤，写出6种PCR衍生技术2013，2014，2009考
2.何谓基因克隆？
简述其基本过程。
09年
3。
重组DNA技术,问答题20分，14年考
4.举例说明基因表达的调控机制。
题目太大,原核调控，真核调控？
13年
问答5。
人类基因定位的常用方法及原理.12年，09年考
简问6.简述反式作用因子的结构特点及作用方式09年
简问7。
简述逆转录病毒的结构特点09年考
问答：
真核细胞中基因表达的特异性转录调控因子是指什么？
根据他们的结构特征可以分为哪些类型？
它们和DNA相互识别的原理是什么？
2013年考
问答:
试述大肠杆菌中表达蛋白质产物的步骤。
2013年考
试比较克隆载体、原核载体和真核载体的特点2012年考
2016年真题
英译中名词解释（20分）
反义RNA； 操纵子 ；限制性核酸内切酶； 选择性剪切； 抑癌基因； 基因诊断； RNA干扰 ;质粒； genemaping; 管家基因
简答题。
真核基因组的结构和功能特点20分
人类基因组的结构特征15分
原癌基因的特点15分
蛋白质组研究常用技术有那些，简介其作用。
15分
当前 基因治疗技术面临的技术问题有哪些？
15分
以下为2001-2004年试题及网上答案
一、若要获得IL—2的基因工程产品，你应该怎么做？
基因工程是在分子水平上对基因进行操作的复杂技术，是将外源基因通过体外重组后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内复制、转录、翻译表达的操作，又叫分子克隆，DNA重组技术。
1。
在GENBANK中检索IL-2的mRNA序列；在genecard里检索IL—2高表达的组织；同时检索一下有关文献;
2.如果考虑使用原核表达系统（通常是大肠杆菌表达系统），将IL-2的成熟肽的基因序列找出（呵呵，我没有检索，不清楚是否有信号肽）进行分析;
3.根据表达载体，设计含有合适酶切位点的、对应成熟肽编码区的引物;
4.提取IL—2高表达的组织的mRNA，RT—PCR，T载体克隆或直接酶切克隆至表达载体中、测序.
二、试述反式作用因子的结构特征及作用方式（20分）
Trans-actingfactor是一类细胞核内的蛋白质因子，能够与顺式作用元件和RNA—pol相互作用,调节基因转录活性。
一般含有DNA结合结构域和转录活化结构域。
DNA结合结构域:
（1）Helix-turn-helix含有3个helix，其中helix3与DNA识别结合，helix1和helix2与其它蛋白质结合。
（2）Zenicfinger锌指结构：
由相对保守的一段氨基酸序列和锌离子结合，形成相对独立的功能域，像一根手指插入DNA的大沟。
两种类型的DNA结合蛋白有这样的模序,一是锌指蛋白,另一个是甾体受体。
（3）LeucineZipper：
亮氨酸拉链，两个蛋白质之间相互作用，共同建立一个转录复合体。
是一种富含亮氨酸的蛋白质形成的二聚体motif。
这种motif可以识别特殊的DNA序列。
两个亮氨酸拉链区的反式作用因子依靠疏水力量相互结合，N—端有碱性氨基酸构成的a—helix能够与DNA结合。
Eg：
AP1与SV40增强子的结合（4）helix—loop-helix：
兼性a-helix具有疏水面和亲水面，两个具有这种的motif反式因子可以形成dimer。
仅靠helix的N-端有一段富含碱性氨基酸的序列可以与DNA结合.HLH以同二聚体或者异二聚体作用于顺式作用元件。
（5）同源异形结构域homeodomain，同源异性盒是一种编码60aa的序列，长180bp，几乎存在于所有真核生物中.
转录激活域：
与其他转录因子相互作用的结构成分。
常见的转录激活结构域有富含谷氨酰胺结构域，富含脯氨酸结构域及酸性α螺旋结构域。
三、试述2型限制酶的功能与特性（20分）
Ⅱ型酶相对来说最简单，它们识别回文对称序列，在回文序列内部或附近切割DNA,产生带3'—羟基和5'-磷酸基团的DNA产物，需Mg2+的存在才能发挥活性，相应的修饰酶只需SAM。
识别序列主要为4—6bp，或更长且呈二重对称的特殊序列，但有少数酶识别更长的序列或简并序列，切割位置因酶而异，有些是隔开的。
①有特异识别和切割的序列部位
②DNA分子上两个单链断裂的部位通常不是直接相对的
③断裂所形成的DNA片段常具有碱基互补的单链尾巴（粘性末端）
④内切酶的切割和修饰功能由两个不同的酶催化所完成,即内切酶活性和甲基化作用活性是分开的
四、试述影响原核基因转录的因素（20分）
原核基因表达调控与真核存在很多共同之处，但因原核生物没有细胞核和亚细胞结构，其基因组结构要比真核生物简单，基因表达的调控因此而比较简单.虽然原核基因的表达也受转录起始、转录终止、翻译调控及RNA、蛋白质的稳定性等多级调控,但其表达开、关的关键机制主要发生在转录起始.其特点包括以下3方面：
（1）σ因子决定RNA聚合酶的识别特异性:
原核生物只有一种RNA聚合酶，核心酶催化转录的延长，亚基识别特异启动序列，即不同的因子协助启动不同基因的转录.
（2）操纵子模型的普遍性:
除个别基因外,原核生物绝大数基因按功能相关性成簇地连续排列在染色体上，共同组成一个转录单位即操纵子，如乳糖操纵子等。
一个操纵子含一个启动序列及数个编码基因。
在同一个启动序列控制下,转录出多顺反子mRNA。
（3）阻遏蛋白与阻遏机制的普遍性：
在很多原核操纵子系统，特异的阻遏蛋白是控制启动序列活性的重要因素。
当阻遏蛋白与操纵基因结合或解离时，结构基因的转录被阻遏或去阻遏。
原核生物在细胞质内转录，转录和翻译同时进行。
五、试述病毒核酸的结构特点（10分）
（1）病毒内的核酸结构相对简单，其遗传物质可以是DNA或者RNA，也有阮粒病毒以蛋白质作为遗传物质,成熟的病毒内只有一种遗传物质,要么是DNA，要么是RNA。
（2）病毒基因可以连续也可以中断，很少有重复序列。
病毒基因组大部分是用来编码蛋白质的，其编码区大于90％.非编码区较少。
非编码区通常是基因表达的调控区（3）有重叠基因存在，使得较小的基因片段可以携带较多的遗传信息。
（4）病毒基因组是单倍体，功能相关的蛋白质基因常常丛集于基因组的一个或者多个特定部位，形成一个功能单元或者转录单元。
六、真核细胞中基因表达的特异性转录调控因子是指什么?
根据它们的结构特征可以分为哪些类型？
它们和DNA相互识别的原理是什么?
特异性转录调控因子是指是除基本转录因子之外，与转录核心区以外的顺式作用元件相结合，影响基因转录的因子,分为DNA结合结构域和转录激活结构域.与GGGCGG结合的特异性转录调控因子叫Sp1。
与CCAAT结合的转录因子叫CBF.大多数类固醇激素与受体结合之后,构成特异性转录因子，与顺式作用元件结合,激活基因转录。
也有转录调控抑制因子，可以覆盖转录活化区，覆盖转录起始区.还有HSP.与DNA的识别模式有:
（1）螺旋—转角-螺旋,helix3识别结合DNA，helix1,helix2结合其它蛋白质因子。
（2）Zenicfinger与DNA大沟相结合，可以与RNA—pol3及其它转录因子相互作用。
（3）亮氨酸拉链：
N—末端由碱性氨基酸构成的a—helix可以与DNA相结合。
（4）helix—loop-helix兼性a-helix具有疏水侧面和亲水侧面，两个具有这种motif的反式因子可以形成dimer。
紧靠helixN—末端的碱性氨基酸组成的序列可以结合DNA.转录因子的DNA结合区都有特定的空间构型和带电性质。
可以和结构和电荷量相匹配的DNA结合。
七、简述细胞内癌基因激活的方式？
（1）点突变：
基因中单个碱基替换，引起表达的蛋白质氨基酸序列改变。
例如，结肠癌中常有k—ras基因的点突变。
（2）插入启动子：
多见于癌症的起始阶段.某些病毒（ALV）的长末端重复序列（LTR）含有启动子,转染宿主细胞之后，插入到原癌基因周围或内部，启动基因转录，活化。
例如ALV的LTR插入到c—myc周围,可以使其表达水平提高20-76倍。
（3）基因扩增：
见于癌症进展期。
癌基因不断复制,拷贝数增多。
在染色质中有浅染区，均质染色质。
其不断复制扩增，可以脱离染色体，形成双微体。
例如，在小细胞肺癌中，c-myc扩增，胶质瘤中ERBB1扩增，神经纤维瘤中,n—myc扩增。
（4）染色体易位和重排：
染色体易位时,
如果断裂点发生在原癌基因周围，可以改变癌基因的结构和转录调控系统,使之激活。
例如，在Burkitt淋巴瘤中,有t（8;14），（q24；q32）易位.慢性粒细胞白血病中有BCL/ABL融合基因，使络氨酸蛋白激酶激活，不受生长因子/受体的调控,使c-ABL活化,导致CML。
八、简述基因治疗中转移外源基因至体内的非病毒和病毒途径的主要原理
非病毒途径有
（1）直接注射法:
将含有裸DNA的溶液直接对患者肌肉注射，DNA转入肌组织，并向全身表达目的基因的产物。
可以持续几个月到1年多.但是，转入效率很低。
仅限于肌肉组织。
（2）电穿孔法：
在高压电脉冲作用下，使细胞膜打孔,让外源DNA迅速导入宿主细胞。
主要与电压和脉冲时间有关。
（3）脂质体转移法:
用磷脂双分子层包裹目的基因,与细胞膜有类似的结构，通过内吞作用，进入细胞，可以防止细胞内核酸酶的降解目的基因.（4）阳离子多聚体：
阳离子聚胺与阴离子DNA形成复合物,与细胞表面带负电的受体结合，通过内吞作用进入细胞。
没有细胞特异性,没有靶向性，基因转移效率低。
（5）同源重组法:
外源基因专一的整合到受体细胞的特定部位，基因修正。
病毒途径:
病毒载体的要求：
可以有效地进入靶细胞,具有可插入治疗基因的较大空间和筛选标记，具有控制治疗基因表达的顺式作用元件。
（1）逆转录病毒：
反转录病毒虽是RNA病毒，但有反转录酶，可使RNA转录为DNA，再整合到宿主细胞基因组。
具有穿透细胞的能力，可使近100%的受体细胞被感染，转化细胞效率高。
无严格的组织特异性，随机整合的病毒可长期存留，对细胞无害。
这种载体只能把其DNA整合到能旺盛分裂细胞的染色体，而不适合于那些不能正常分裂的细胞，如神经元。
由于病毒自身含有病毒癌基因，就有使宿主细胞感染病毒和致癌的危险性。
人们有目的地将病毒基因及其癌基因除去，仅留它们的外壳蛋白，以保留其穿透细胞的功能，试图避免上述缺点。
这种改造后的病毒称为缺陷型病毒（defectivevirus）。
这样的病毒中的反转录酶可将RNA转化为DNA,有助于该DNA顺利进入宿主细胞的基因组，而该病毒则死亡。
（2）DNA病毒介导载体（DNAviralmediatedvector）：
DNA病毒包括腺病毒、SV40、牛乳头瘤病毒、疱疹病毒等，一般认为这类病毒难于改造成缺陷型病毒。
牛乳头瘤病毒重组后，可不插入宿主染色体中引起插入突变，又可在宿主染色体外独立复制，并表达出基因产物。
美国设计了一个新的腺病症载体，它是用一个化学连接器即赖氨酸链（lysinechain）将DNA栓在病毒外壳上，这样组成的运输器，通过一个表面抗体而进入细胞核，使宿主基因与治疗基因共同表达。
这个新病毒载体称为腺病毒多赖氨酸DNA复合体（adenovirus-polylysineDNA—complex）。
九、请你评价一下人类基因组计划（HGMP）完成的意义
（1）对人类疾病基因研究的贡献：
人类疾病相关的基因是人类基因组中结构和功能完整性至关重要的信息。
对于单基因病，采用“定位克隆”和“定位候选克隆"的全新思路，导致了亨廷顿氏舞蹈症、遗传性结肠癌和乳腺癌等一大批单基因遗传病致病基因的发现，为这些疾病的基因诊断和基因治疗奠定了基础。
对于心血管疾病、肿瘤、糖尿病、神经精神类疾病（老年性痴呆、精神分裂症）、自身免疫性疾病等多基因疾病是目前疾病基因研究的重点。
健康相关研究是HGP的重要组成部分，1997年相继提出：
“肿瘤基因组解剖计划”“环境基因组学计划”。
（2）对医学的贡献:
基因诊断、基因治疗和基于基因组知识的治疗、基于基因组信息的疾病预防、疾病易感基因的识别、风险人群生活方式、环境因子的干预
对生物技术的贡献胚胎细胞克隆羊—-多利
a基因工程药物:
分泌蛋白（多肽激素，生长因子，趋化因子，凝血和抗凝血因子等）及其受体。
b诊断和研究试剂产业：
基因和抗体试剂盒、诊断和研究用生物芯片、疾病和筛药模型。
对细胞、胚胎、组织工程的推动,胚胎和成年期干细胞、克隆技术、器官再造。
c对制药工业的贡献：
筛选药物的靶点：
与组合化学和天然化合物分离技术结合,建立高通量的受体、酶结合试验以知识为基础的药物设计:
基因蛋白产物的高级结构分析、预测、模拟—药物作用“口袋”。
个体化的药物治疗：
药物基因组学。
d对社会经济的重要影响：
生物产业与信息产业是一个国家的两大经济支柱；发现新功能基因的社会和经济效益；转基因食品;转基因药物（如减肥药，增高药）e对生物进化研究的影响:
生物的进化史，都刻写在各基因组的“天书”上；草履虫是人的亲戚—13亿年；人是由300～400万年前的一种猴子进化来的;人类第一次“走出非洲”-200万年的古猿；
f带来的负面作用：
侏罗纪公园不只是科幻故事;种族选择性灭绝性生物武器；基因专利战;基因资源的掠夺战；基因与个人隐私。
十、分子生物学实验中所涉及的引物有哪几种,各有什么用途和特点？
1）纯粹的用于扩增目的基因片段的引物，这种引物一般都是成对出现。
2）用于基因测序用的引物,一般如果所测的片段长度短的话（小于800bp）,可以用一条，当然两条正反通测也可以。
3）用于筛选的引物，比如平时常见的SSP，RFLP等引物，这种引物也是成对出现的，但主要用于基因多态性筛选的，针对单位点多态性来说。
十一、什么是分子克隆技术？
它的主要步骤是什么？
在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法。
常含有目的基因，用体外重组方法将它们插入克隆载体,形成重组克隆载体，通过转化与转导的方式,引入适合的寄主体内得到复制与扩增,然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆载体，可以得到插入DNA的许多拷贝,从而获得目的基因的扩增。
十二、真核细胞和原核细胞基因表达在转录水平上调控的特点.
原核细胞：
1.转录起始调控:
（1）ｏ因子与启动子的作用模式原核细胞的RNA-pol只有一种，组成成分为α2？
?
’σσ因子与启动子结合.在原核生物分化发育过程中，不同基因有序表达也是不同σ因子在不同时间产生并发挥作用引起的。
（2）转录起始的负调控最典型的是乳糖操纵子的调节（3）转录起始的正调控典型例子是阿拉伯糖操纵子，araC基因产物AraC起着关键作用，当环境中有阿拉伯糖时,AraC形成dimer与I1、I2结合，激活BAD基因转录.（4）转录起始的复合调控葡萄糖代谢产物的分解阻遏负调控和CAP-cAMP复合物的正调控。
2。
转录终止调控：
（1）依赖于ρ因子的转录终止，色氨酸操纵子中有衰减子
（2）不依赖于ρ因子的转录终止，识别发夹结构，使转录停止。
真核细胞：
1。
转录前调控:
（1）染色体结构对转录的影响：
疏松的染色质转录活跃
（2）DNA的修饰：
真核基因CpGisland中的C通常被甲基化，阻碍某些基因转录。
2。
顺式作用元件：
真核基因非编码区中调控基因转录的DNA序列,包括启动子、增强子、沉默子.3.反式作用因子：
一类细胞核内的蛋白质因子，可以与RNA—pol和顺式作用元件相互作用,调节基因转录.
（1）基本转录因子：
在真核基因启动子上，参与组装转录起始复合物的蛋白质因子.TFII有6种。
（2）特异性转录因子：
结合在核心转录原件以外的其它上游顺式作用元件的蛋白质因子，通过DNA-蛋白质相互作用，调节基因转录，可以对环境变化迅速作出反应。
与GGGCGGbox结合的激活蛋白称为SP1；与CCAATbox结合的转录因子称为CBF。
SP1和CBF都能够与特异性的DNA序列结合，启动转录。
多种类固醇激素也是特异转录因子，与相应受体结合后，作用于激素应答序列,促进转录。
此外，在真核基因中也存在转录抑制因子，可以覆盖转录活化区，或者覆盖转录起始点,与基础转录因子相互作用，抑制转录。
2。
反式作用因子与DNA相互作用的模式：
helix—turn—helix,Zenicfinger，leucinezipper,helix-loop-helix.
十三、就你所知RNA研究领域中，理论和技术方面的进展有哪些。
RNA具有生物功能多样性，在遗传信息的翻译中起决定作用，mRNA有信使和模板的作用，转运RNA可以转运氨基酸和信息交换，rRNA有装配和催化作用。
1992年Holler等证明转肽反应有核糖体大亚基催化。
核酶的发现-RNA具有催化功能和持家功能.
RNA编辑：
RNA编码序列的改变称为RNA编辑.hnRNAsnRNA戴帽加尾防止降解。
反义RNA：
与mRNA序列互补的一段RNA，可以沉默mRNA的翻译。
（1）RNA剪切是真核生物基因表达过程中一个非常重要的机制，经过RNA的剪切、连接以后即可产生具有编码信息功能的mRNA。
RNA剪切机制在生物的生长发育过程中至关重要。
RNA剪切就是将基因组中转录出来的RNA前体中的内含子剪切出去，然后再在相应酶的作用下将剪切后的RNA重新连接起来.RNA的剪切位臵主要依赖于剪切位点的判定，剪切位点一般都具有其专属特定的序列。
麻省理工学院的研究人员开发出一种新的计算方法来预测遗传材料中的哪些序列转录为RNA时会象电影剪接室中被剪掉的胶片一样被剪切掉，哪些会最终幸运地成为生命的蓝图。
（2）RNA测序分析中的最新进展
使用一种叫做RNA—seq的技术，最新的高通量DNA测序技术现在能够被大规模地应用于捕获一个细胞中整套的mRNA转录本。
尽管RNA-seq才仅仅两岁，但是它已经迅速蔓延到基因组学领域，并且它现在正在被用于分析从细菌到灵长类生物的转录组.测序的深度允许研究者定量基因表达水平，以在真核生物物种中发现选择性异构体，甚至描述细菌基因组的操纵子结构
（3）RNA干扰技术研究新进展：
RNA干扰（RNAinterference，RNAi）是由双链RNA介导的序列特异的基因沉默现象,它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达，具有高效性和高特异性的特点.小干扰RNA（smallinterferingRNA或shortinterferingRNA，siRNA）是RNAi作用中的效应分子，作为引导序列，按照碱基互补原则识别靶基因转录出的信使RNA（mRNA），并引导沉默复合物（RNAinducedsilencingcomplex,RISC）复合体结合mRNA。
随后siRNA与mRNA在复合体中换位，核酸酶Dicer将mRNA切割成21～23核苷酸的片段,从而可以破坏特定目的基因转录产生的mRNA,使其功能沉默.应用于基础医学，肿瘤治疗，白血病治疗,抗病毒。
十四、简述PCR技术中引物设计的要点。
首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应。
（1）原则：
①用于PCR反应的引物需要有两条被扩增目的基因的两端，并分别与模板正负链序列互补；②引物长度一般以18—25个核苷酸为宜；③两条引物之间（尤其在3′端）的序列不能有互补，以免形成引物二聚体；④引物的碱基组成应平衡，避免出现嘌呤、嘧啶碱基堆积。
⑤PCR扩增中得退火温度是根据引物的Tm值决定的,两条引物的Tm值不能差别太大;⑥根据需要,可以在合成引物时于其5′端加修饰成分。
a．长度：
15—30bp，其有效长度[Ln=2（G十C）十（A十T）]一般不大于38，否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度（74度），从而降低产物的特异性。
B．G十c含量：
应在45%一55%之间，PCR扩增中的复性温度一般是较低Tm值引物的Tm值减去5-10度。
引物长度小于20时，其Tm恒等于4×（G十C）十2×（A十T）.
C．碱基分布的随机性：
应避免连续出现4个以上的单一碱基。
尤其是不应在其3’端出现超过3个的连续G或C，否则会使引物在G十C富集序列区错误引发。
D．引物自身:
不能含有自身互补序列，否则会形成发夹样二级结构。
E．引物之间:
两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基,不然会形成引物二聚体,尤应避免3’端的互补重叠。
十五、试述真核基因组结构的基本特点。
（20分）
1.真核生物基因组DNA与蛋白质结合形成染色体，储存于细胞核内,除配子细胞外,体细胞内的基因的基因组是双份的（即双倍体，diploid），即有两份同源的基因组。
2.真核细胞基因转录产物为单顺反子。
一个结构基因经过转录和翻译生成一个mRNA分子和一条多肽链。
3.存在重复序列,重复次数可达百万次以上.4.基因组中不编码的区域多于编码区域。
5。
大部分基因含有内含子，因此,基因是不连续的。
6.基因组远远大于原核生物的基因组，具有许多复制起点,而每个复制子的长度较小.
原核生物基因组特点：
1.基因组多数由环状双链DNA分子组成2。
具有类核结构3。
操纵子结构（operon）:
功能上相关的几个结构基因往往串联排列在一起，受上游共同的调控区和下游转录终止信号所构成的基因表达单位.转录时，几个基因转录在一条mRNA链上，再分别翻译成各自不同的蛋白质.4.结构基因中无内含子,与真核细胞的主要区别。
编码区基因占基因组比例约50％左右,存在间隔区.5。
DNA绝大部分用于编码蛋白质，结构基因多为单拷贝,6。
结构基因中无重叠现象（一段DNA序列编码几种蛋白质多肽链）7。
基因组中存在重复序列8。
基因组中存在可移动的DNA序列，如转座子和质粒等
十六、试述重组DNA的基本过程.（20分）
DNA重组（DNArecombination）指DNA分子内或分子间发生的遗传信息的重新共价组合过程。
包括同源重组、特异位点重组和转座重组等类型，广泛存在于各类生物。
体外通过人工DNA重组可获得重组体DNA，是基因工程中的关键步骤.
十七、试述基因治疗研究的主要内容或策略.（20分）
基因治疗（genetherapy）是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病,以达到治疗目的.也就是将外源基因通过基因转移技术将其插入病人的适当的受体细胞中,使外源基因制造的产物能治疗某种疾病.包括体细胞治疗和生殖细胞治疗.一般程序：
1。
治疗基因的选择：
正常基因代替致病基因，在细胞内产生有正常功能的蛋白质。
2.治疗基因导入宿主细胞内：
非病毒导入和病毒导入3.靶细胞的选择：
一般为体细胞，病变细
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