《花卉学》实验指导书汇编.docx
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《花卉学》实验指导书汇编
《花卉学》实验指导书
实验一花卉播种育苗实验
一、目的要求
花卉繁殖是繁衍后代，保存种质资源的手段，只有将种质资源保存下来且繁殖一定的数量，才能为园林所应用，并为花卉选种、育种提供条件。
因此掌握不同花卉的繁殖方法很有必要。
通过几种花卉的播种实验，掌握花卉有性繁殖的基本环境条件、播种技术和播种苗管理等环节。
二、原理
种子是由胚珠发育而成的器官，有种皮和胚两个组成部分，胚是幼植物体，由胚根、胚芽、胚轴、子叶组成。
给予适宜的种了水分、温度、氧气（少数种子还需一定的光照）等条件，种子就可萌发形成幼苗。
三、材料与用具
1.植物材料：
三色堇、雏菊（Bellisperennis）、二月兰、一串红（Salviasplendens）、凤仙花（直播）等
2.用具：
播种盆、沙、土、锄头、耙子、网眼筛、铁锹、烧水壶等。
四、方法与步骤
播种方法分为地播和盆播。
（一）盆播
1、播种用土准备：
采用混合土，配合比例如下：
细小种子腐叶土5、河沙3、园土2
中粒种子腐叶土4、河沙2、园土4
大粒种子腐叶土5、河沙1、园土4
在使用前消毒（蒸汽或药剂）并筛过，细粒种子用网眼2-3mm细筛筛土，中、大粒种子用4-5mm网眼筛子筛土。
土壤含水量适当。
2、用碎盆片把盆底排水孔盖上，填入1/3碎盆或粗沙砾，其上填入筛出的粗粒混合土，厚约1/3，最上层为播种用土，厚约1/3。
3、盆土填入后，用木条将土面压实刮平，使土面距盆沿约2-3cm。
4、用“浸盆法”将浅盆下部浸入较大的水盆或水池中，使土面位于盆外水面以上，待土壤浸湿后，将盆提出，过多的水分渗出后，即可播种。
5、细小种子宜采用撒播法。
为防止播种太密，可掺入细沙与种子一起播入，用细筛筛过的土覆盖，以不见种子为度。
中、大粒种子用点播或条播法，播后覆土。
6、覆土后在盆面上盖玻璃或报纸等，以减少水分蒸分，并置于室内阴处。
7、播后管理：
应注意维持盆土湿润，干燥时仍然用浸盆法给水，幼苗出土后逐渐移于光照充足处。
（二）地播
1、播种前将土翻挖一下，除去草根。
最好消毒、除虫、除草。
2、土壤整平。
中间稍有点坡度，以利利水。
这种坡度让人不易察觉。
3、将土壤施些基肥，有机肥的话要完全腐熟。
也可施复合肥等一些缓释肥。
不要用化肥，化肥一般做追肥。
４、将土壤浇透水。
５、将种子均匀的酒在土壤上。
用干燥洁净的沙子和种子混合后易于撒播，混合比例为：
沙子：
种子=2：
1 。
６、可以盖一层土，将种子盖住。
覆土厚度不得超过种粒直径的2-3倍。
７、以后每天保持湿度。
在20度左右的气温下，需要5-10天左右出芽。
８、种子出芽，显绿后，追一下肥（尿素肥或者磷酸二氢钾）。
９、以后有杂草生出，还需要人工除草．有虫害，和病害的话也应及时发现防治。
五、注意事项
1、混合土主要是保证良好的土壤性能。
所用的壤土应为中性，砂则为不含碳、淤泥、贝壳等夹杂物的清洁河沙。
2、播种时期依不同种类和市场需要而定，但必须保证良好的萌发条件。
如：
温度20-30℃，水分70%左右，喜光种子最好用玻璃覆盖。
3、种子播种应精选。
若用15%甲醛消毒，应用清水冲洗干净。
有些种子需要浸种催芽。
4、地播技术相对简单，但要注意播种床床面平整，表土细粒，利于排水。
播种前土壤湿度适中；注意播后覆盖，防冻（秋播）、防雨（南方）、防旱（北方）等。
六、思考作业
1、比较地播与盆播花卉技术要领及适用对象。
2、种子繁殖适用于哪些花卉？
有何优缺点？
3、观察种子出苗情况。
按播种期、出苗期、第一片真叶出现期、分苗期等时期记载。
附：
土壤消毒常用且效果较好的方法
五氯硝基苯消毒每平方米苗圃地用７５％五氯硝基苯４克、代森锌５克，混合后再与１２千克细土拌匀，播种时下垫上盖，对防治由土壤传播的炭疽并立枯并猝倒并菌核病等有特效。
福尔马林消毒每平方米苗圃用福尔马林５０毫升加水１０千克均匀喷洒在地表，然后用草袋或塑料薄膜覆盖，闷１０天左右揭掉覆盖物，使气体挥发，两天后可播种或扦插。
此法对防治立枯并褐斑并角斑并炭疽病效果良好。
波尔多液消毒每平方米苗圃地用等量式（硫酸铜∶石灰∶水为１∶１∶１００）波尔多液２．５千克，加赛力散１０克喷洒土壤，待土壤稍干即可播种或扦插。
对防治黑斑并斑点并灰霉并锈并褐斑并炭疽病效果明显。
多菌灵消毒多菌灵能防治多种真菌病害，对子囊菌和半知菌引起的病害防治效果很好。
土壤消毒用５０％的可湿性粉剂，每平方米拌１．５克，可防治根腐并茎腐并叶枯并灰斑病等，也可按１∶２０的比例配制咸毒土撒在苗床上，能有效防治苗期病害。
硫酸亚铁消毒用３％硫酸亚铁溶液处理土壤，每平方米用药液０．５千克，可防治针叶花木的苗枯病，桃、梅的缩叶病，兼治花卉缺铁引起的黄化玻代森铵消毒代森铵杀菌力强，能渗入植物体内，在植物体内分解后还有一定的肥效。
用５０％的水溶代森铵３５０倍液，每平方米苗圃土壤浇灌３千克稀释液，可防治花卉的黑斑并霜霉并白粉并立枯病和球根类种球的多种病害。
实验二园林植物的扦插技术
一、实验目的掌握园林植物的扦插繁殖技术的基本方法。
二、实验原理
植物营养器官具有再生能力，根可以形成不定芽，枝可以形成不定根，叶可以形成不定根和不定芽。
再生不定根或不定芽的能力与不同园林花卉在系统发育过程中形成的遗传特性有关。
生产中常选用再生能力强的园林花卉，提供适于其生根或产生不定芽的生态环境条件进行扦插育苗。
三、实验材料
植物材料：
彩叶草、鸭趾草、八仙花、四季秋海棠、鹅掌柴、橡皮树、常春藤、吊兰、杜鹃等。
实验耗材：
NAA、IBA，塑料薄膜，腐殖土、珍珠岩，竹片等。
工具：
育苗盘，枝剪
四、实验内容
1．枝插
利用温室现有的花卉材料在扦插盘中进行扦插。
取彩叶草、鸭跖草、八仙花等材料为试材。
2．叶插
利用温室现有的花卉材料在扦插盘中进行扦插。
取四季秋海棠、鹅掌柴、橡皮树、常春藤等材料为试材。
五、实验方法与步骤
（一）实验方法
1．嫩枝扦插
在扦插盘的底部铺一层报纸，再添入沙子等排水透气性好的基质，浇透水。
既可用于扦插。
嫩枝扦插以夏季扦插成活率较高。
选生长健壮、无病虫害植株采集插穗，最好“随采集、随扦插，随浇水，随遮荫“。
所采插穗时半木质化的新梢，剪成7-10左右的茎段，每段只保留上端2片叶，其余叶片剪掉。
选排水透气良好的沙壤土做扦插基质。
扦插深度为插条长度的2/3，株行距10cm左右。
扦插后随即用细眼喷壶浇透水，并用薄膜搭遮荫棚。
每天通风透气30分钟。
扦插期间注意保持扦插基质和空气中的湿度，发现叶片下垂时应及时向叶片上喷水。
待插穗愈伤组织长好后，应控制浇水量，见干再浇，以促进根系的生长。
当苗根系长到5厘米左右时，炼苗后选阴天或早晚移栽，移栽前天浇透水，使床面松软，以免起苗时根系损伤。
小苗用手或细物挖出，把沙子抖落后或水洗净，可直接移栽在大一号的花盆中，栽后及时浇水、施肥，并注意病虫害防治。
2．叶插
主要用于能从叶上发生不定芽及不定根的种类。
凡能进行叶插的花卉，大多具有粗壮的叶柄、叶脉或肥厚的叶片。
叶插需选取发育充实的叶片，再设备良好的繁殖床内进行，以维持适宜的温度及湿度，才能获得良好的效果。
根据选取叶片面积的大小，分为全叶插和片叶插。
1）全叶插以完整的叶片为插穗。
根据扦插方式又分为平置法和直插法。
切去叶柄，将叶片平铺与沙面上，以铁针或竹针固定于基质上，下面与基质紧贴，这种扦插方法称为平置法。
如将落地生根的叶片平铺在基质上，几天以后从叶缘处就会产生小植株；再如将铁十字秋海棠用此法繁殖时，从叶片基部或叶脉处产生小植株，然后将这些小植株切割后另行栽植即可。
直插法也称叶柄插法，是指将叶柄插入沙中，叶片立于基质上部，在叶柄基部就会产生不定芽。
如大岩桐进行叶插时，首先在叶柄基部发生小块茎，之后产生根和芽。
用此法繁殖的花卉还有非洲紫罗兰、豆瓣绿、虎尾兰等。
以后的操作如同上述。
2）片叶插：
是指将一个叶片分切成数块，分别进行扦插，使每块叶片上形成不定芽。
用此法繁殖的花卉有蟆叶秋海棠、大岩桐、豆瓣绿、虎尾兰等。
将蟆叶秋海棠叶片的叶柄去掉，按主脉分布情况，分切成数块，使每块上都有一条主脉，再剪取叶脉较薄的部分，以减少水分的蒸发，然后将其下端插入沙中，不久就从叶脉基部产生幼小植株。
扦插时注意切不可上下颠倒。
然后将这些小植株切割后另行栽植即可。
以后的操作如同上述。
（二）实验步骤
选择彩叶草等未完全木质化的当年生枝条，剪成长度为6～8cm的插穗，上端在芽上2cm处剪成平口，下端剪成45°斜切口。
每根插穗留半叶，至少留两个芽，扦插基质为50%腐殖土+50%珍珠岩。
实验选用NAA、IBA两种生根剂，每种设3个水平（mg/L：
100、300、500）。
扦插之前，先把插穗基部分别在6种不同的生根剂溶液中浸蘸5s后，迅速插入湿润的苗床，深度为插穗长度的2/3。
每处理10株，成一行，株行距10cm。
所有插穗采集、处理、扦插过程，在1d内完成，扦插后用塑料薄膜覆盖进行保湿，每3d～4d浇水一次．20d后第一次观察，以后每隔10d观察1次生根情况，并拍照记录，统计实验结果。
六、实验结果与分析
1.生根剂对插穗的影响
处理号
Tretment
生根剂
种类
Rootingreagent
浓度（mg/L）
Concentration
生根率（%）
Rootingrate
平均根数（条）
Averagerootnumber
平均根长（cm）
Averagerootlength
株高
（cm）
Plantheight
1
NAA
100
2
NAA
300
3
NAA
500
4
IBA
100
5
IBA
300
6
IBA
500
对照
无
无
2．不同植物扦插成活率的比较
花卉种类
彩叶草
四季秋海棠
常春藤
鹅掌柴
鸭跖草
吊兰
八仙花
扦插株数
成活株数
成活率
3．试分析不同扦插方法中影响成活率的主要因素。
实验三、花卉种苗的移栽定植
一、实验目的与原理
通过花卉移苗、定植的操作，掌握不同花卉不同苗龄期的移苗、定植技术。
移植断根，可促进须根发达，植株强健，生长充实，植株高度降低，株形紧凑，并保证植株足够的营养空间。
二、实验材料及用具
花卉幼苗，锹、铲、喷壶等。
三、实验内容及方法
1.定植前苗的准备：
（1）定植前对定植苗进行控温（最好使温度比发芽温度低3℃左右）处理。
（2）起苗前半天，苗床浇一次水，使幼苗吸足水分更适移栽。
（3）移栽露地时，整地深度根据幼苗根系而定（一般20cm左右），同时施入一定量的有机肥（厩肥、堆肥等）作基肥。
2.定植方法的选择：
大型苗采用穴植，小型苗采用沟植。
3.根据定植物苗的大小挖穴：
一般穴的深度以稍大于苗钵为宜。
4.起苗：
将小苗从钵中起出，保护好根系尽，量保持土坨的完整。
5.定植：
把苗放入穴中用铁铲培土，使培的土低于土壤表面，做水盘。
5.浇透水（1～2遍）。
6.封垵：
待水渗透时，将水盘表面用干土封好，以免夏季蒸发迅速。
7.移植后管理：
幼苗适当遮荫，之后进行常规浇水施肥，中耕除草等原理。
四、作业
两人一组，移栽一塑料平盘。
五、注意要点：
1.移栽定植后要浇透水。
2.移栽时期可考虑天气情况。
如阴天或雨后空气湿度高时移栽，成活率高；清晨或停晚移苗最好，忌晴天中午栽苗。
实验四：
花卉市场的参观与调查
一、实验目的
让学生了解目前花卉市场具体情况，了解市场畅销花卉种类、价格情况、市场流通情况
二、实验材料、仪器设备
宿迁市常见的花卉种类。
相机、实验记录本等。
三、实验内容：
参观市内某一综合性的花卉市场，对其市场环境、花卉种类（品种）、数量、来源、价格等进行调查。
注意观察花色和花卉品质，并对花卉的经营和销售情况进行评价分析。
四、实验结果分析
种类
球根花卉
观叶植物
观果植物
木本花卉
肉质植物
一、二年生花卉
盆景植物
五、作业
1.分析宿迁市花卉市场的经营现状及发展前景
实验五：
露地花卉的分类和识别
一、实验目的
在园林植物造景中，应用最多最为频繁的当数一二年生花卉。
这类花卉种类繁多，品种多样，生长快，花色丰富，花期长，具有很高的观赏价值，并且每种花卉的生物学特性各不相同，既有观花的，也有观叶的，如羽衣甘蓝等，还有蔓性可攀援的，如牵牛花、茑萝等。
本实验的目的是使学生通过对常见的一二年生花卉基本特征的学习，掌握一二年花卉常用分类方法、播种适期及最佳观赏期，正确识别园林栽培种常见一二年生花卉的形态特征、科属及主要习性，并了解其在园林中的作用，为以后花卉应用和配植提供一定的理论和实践基础。
二、实验原理
在花卉栽培中，为了更好地分析掌握每一种花卉的生长规律和栽培习性，常常把花卉依据不同的分类标准划分为不同的种类，如依据花卉原产地可将花卉划分为不同的气候型花卉，依据花卉的生活周期和地下形态特征分为一年生花卉，二年生花卉，宿根花卉，球根花卉等四类。
三、实验材料、仪器设备
宿迁市常见的一二年生花卉种类。
相机、测量尺、实验记录本等。
四、实验内容
观察一二年生花卉植物植株的叶型（叶片类型、大小、裂刻）、叶色（正反两面）、株型、分枝状况和枝条类型等。
识别并描述不同种一二年生花卉的花型、瓣型、花瓣数、色泽、花器官的着生状态、花径大小、是否重瓣及重瓣数、花茎长度、花器官的完整性、花萼的描述等内容，观察并记录所识别的花卉花序类别、花序轴的长度等内容。
五、实验结果分析
一二年生花卉植株外观特征的识别：
花卉种类
测定项目
叶型
叶色
叶片裂刻
株高
紧凑度
株型
分枝状况
应用
一串红
藿香蓟
花器官观察
花卉种类
测定项目
花型
花径
大小
瓣型
花瓣数
花器官
完整性
花序
类别
花序轴
长度
花色
观赏
部位
一串红
藿香蓟
六作业
1.根据形态特征，结合分类特点，总结其生物学特性及其基本应用。
2.根据观察内容，总结每种花卉的形态特征。
实验六培养基的配制与灭菌
一、实验目的
以MS培养基为例，通过动手操作，掌握基本培养基母液的配制方法，了解培养基配制及配制过程中可能出现的问题及相应的对策。
二、实验材料与用具
1000ml烧杯2个、500ml烧杯3个、1000ml容量瓶2个、500ml容量瓶3个、MS培养基药品、6-BA、NAA、1N的NaOH和HCL、无菌水等。
三、实验内容与方法
1、MS培养基配方：
此表为每升培养基中工作浓度（单位：
mg/L）
A:
大量元素单位：
mg/LB：
钙盐
KNO31900CaCl2•2H2O440
NH4NO31650
MgSO4•7H2O370
KH2PO4170
C:
微量元素D:
铁盐
MnSO4•4H2O22.3Na2-EDTA37.7
ZnSO4•7H2O8.6FeSO4•7H2O27.8
H3BO36.2
KI0.83
Na2MoO4•2H2O0.25
CuSO4•5H2O0.025
CoCl2•6H2O0.025
E:
有机物质
甘氨酸2
盐酸硫胺素B10.5
盐酸吡哆醇B60.5
烟酸0.5
肌醇100
2、MS培养基母液的配制
以上表为准，分别配制×100的A、B各1000ml；×200C、D、E各500ml；1mg/ml6-BA、1mg/mlNAA各100ml。
操作步骤如下：
①往干净的烧杯中加入蒸馏水约3/5左右，按照上表顺序依次加入药品
②倒入容量瓶中用蒸馏水定容。
③装入广口瓶放冰箱保鲜层贮存。
3、激素配制
①称取所需重量的6-BA，用1mol/L的HCL溶解，之后用蒸馏水定容。
②称取所需重量的NAA，用1mol/L的NaOH溶解，之后用蒸馏水定容。
4、培养基的配制（500ml）
操作步骤如下：
①往干净的500ml烧杯中准确加入储备液A（）ml、B（）ml、C（）、D（）ml、E（）ml。
各种物质分别用带刻度的移液枪（或移液管）移取，不能混用。
（若需添加植物生长物质，在该步骤进行。
添加NAA（）ml、6-BA（）ml）
②先将称好的琼脂按照6g/L的量称取（）g放入干净的烧杯中，然后注入200～300ml的蒸馏水。
③将称量好的蔗糖按照30g/L的量称取（）g放入琼脂溶液中，搅拌均匀。
同时加入其他营养元素。
④调整PH值，根据不同植物对酸碱要求的不同，用1mol的HCl、NaOH对培养基的pH进行调整。
可以用pH试纸或酸度计进行测量，PH值为5.8，调整后的PH值应高于目标PH值0.5个单位。
⑤用蒸馏水定容。
将烧杯置于带有石棉网的电炉上，接通电源，使琼脂充分溶化，并不断搅拌，防止烧焦或沸腾溢出。
（有条件放在电磁炉或微波炉中加热，请解释原因）
5、分装入瓶
已经配好的培养基应该尽快分装，在培养基没有冷却的情况下，应立即将其分装到培养容器中。
在分装时应该注意：
A.培养基的用量。
一般来说，分装到培养容器中的培养基应该占该容器的1／3～1／4为宜，例如，一个100mL的锥形瓶可分装25mL的培养基。
B.在操作时，应该尽量避免将培养基粘到容器口上，以免染菌。
C.加了琼脂的培养基会在40℃左右时凝固，因此必须掌握好分装时间。
D.已经分装的培养基应该做好标记，以免在操作时出现混淆。
6、封口在培养基分装后，应立刻将容器口部包好，以免培养基变干，防止菌类污染。
最常采用的方法是，用纱布包上棉花做成的塞子，外面再包一层牛皮纸；也可使用覆纸铝箔、硫酸纸、耐高温塑料薄膜等。
其中覆纸铝箔本身在定型后不易变形，无需再使用线绳等进行固定；耐高温塑料薄膜由于透光，对于培养材料很有好处。
如果使用的是覆纸铝箔，则只需将其在容器顶部攥紧即可；要是用塑料薄膜等材料进行封口，则要对其进行绑扎。
封闭容器所用的覆纸铝箔或塑料薄膜的尺寸应为被覆盖容器上口直径的3～4倍见方。
7、培养基的灭菌
已经封装好的培养基需要放在专用的灭菌容器，例如高压锅中进行高温灭菌，在操作时首先要检查一下锅中是否放了足量的水，以免造成空烧或干锅现象。
然后要将培养基保持直立状态，依次码入锅中，注意容器与容器不要靠得太近，这样灭菌的效果更好。
关闭锅盖，加热。
使锅内压力上升到0．5kg／cm2，然后打开气阀，排出冷空气，关闭放气阀后，待上升到0．5kg／cm2时，再次开启放气阀一次。
使冷空气彻底放掉，关闭放气阀，使压力稳定在1．1kg／cm2，即温度为121℃的条件下，维持15～20分钟。
切断热源（煤气炉或电炉）。
自然下压后，再开启放气阀。
取出，灭菌物放在干净的柜中。
在操作时，应该注意容器的体积对灭菌的效果是有影响的。
根据Biondi等人在1981年的研究结果，盛在大小不同容器的培养基所需的灭菌时间亦不相同，详见下表。
培养基进行蒸气灭菌所需大致最短时间*指在121℃下所需的最短灭菌时间。
实际体积（mL）
灭菌时间*（分钟）
20—50
15
75
20
250—500
25
1000
30
1500
35
2000
40
四、作业
1、完成实验报告
2、请写出实验中应该注意的事项
实验七、外植体的选取、灭菌与接种
一、实验的目的和意义
通过动手操作，掌握组织培养材料的选取、表面消毒、灭菌、及无菌操作的技术，并掌握各种不良现象出现的可能原因和改进方法。
二、实验材料
三色堇、花毛茛、八仙花等。
烧杯、量筒、玻璃棒、培养皿、镊子、解剖刀、剪刀、酒精灯；无菌水、乙醇、0.1%升汞；超净工作台等。
三、实验步骤与操作
（一）培养材料的灭菌
未受病害、虫害侵袭的植物组织块内部被看作是无菌的。
因此，只要用化学灭菌剂对植物材料进行表面灭菌，便成为无菌材料。
常规灭菌方法按如下步骤进行：
1、材料的选取与清洗
（1）选择无病斑，虫害植株作为取材母株。
（2）剪取所需叶片（整片）。
（3）除去老叶，把上述材料先置于烧杯中，然后放在自来水下，用流水冲洗20-60分钟，而后用无菌水冲洗1-3次。
2、表面灭菌
（1）将植物材料放在有盖容器中，倒入75%酒精使之没过外植体，并轻晃以除去气泡，经过10-20秒，将乙醇倾去，用无菌水冲洗外植体。
因为酒精的渗透力很强，不宜灭菌时间过长。
（2）接着用0．1％的升汞溶液浸泡外植体5～10分钟，处理过程中要轻摇2-3次，将外植体表面的气泡除去。
（3）灭菌结束后，倒出消毒液，用无菌水冲洗3-6次。
沥干水分备用。
如果材料本身带菌，则可在培养基内加入少量抗生素，如橄榄霉素20ppm，氨苄青霉素50-500PPm与适量制霉菌素。
以便控制细菌与霉菌的生长，在抗菌素培养基上经多次继代培养，可使植物组织无菌化。
常用的灭菌剂及其效果详见下表（2—1）。
消毒剂
使用浓度（％）
去除难易
消毒所需时间（分）
效果
次氯酸钙
9--10
易
5--30
很好
次氯酸钠
2
易
5--30
很好
过氧化氢
10--12
最易
5--15
好
溴水
1--2
易
2--10
很好
硝酸银
1
较难
5--30
好
氯化汞
0．1--1
较难
2--10
最好
抗菌素
4--50mg／L
中
30--60
较好
（二）无菌操作
1、花卉组织培养常用的接种工具和试剂有镊子、剪刀、解剖刀、解剖针、酒精灯、酒精棉、消毒剂、无菌水等。
这些工具在使用前必须严格消毒。
2、接种前，无菌室要用紫外灯或化学杀菌剂（如甲醛、来苏水等）消毒，紫外灯照射要在30min以上。
在进行室内消毒时，要注意人身安全和过敏反应，比如，要防止紫外灯长时间照射和甲醛等化学试剂对人体的毒害作用。
3、接种工作在超净工作台上进行，接种前超净工作台应预先工作15min以上。
操作人员要在缓冲室内换好经过消毒的卫生服，戴上口罩。
接种时用酒精棉认真擦洗台面和手指（尤其是指缝和指甲），盛外植体的烧杯和培养皿也要用酒精消毒。
4、经过高温高压灭菌的接种工具先用75%的酒精棉擦洗，再用酒精灯火焰灼烧，然后使其自然冷却。
5、接种时培养瓶瓶口要在酒精灯火焰附近（无菌区），并在接种前后灼烧瓶口。
夹取外植体时用力要适当，用力过大时外植体易受伤害；用力过小时外植体易脱落。
用镊子夹取外植体时，角度要便于外植体放入瓶内和不碰瓶口。
外植体和手指切勿碰到瓶口。
6、接种过程中要将用过的镊子、解剖刀经常在酒精灯上灼烧灭菌；解剖台面也要经常用燃烧的酒精棉球擦拭灭菌。
接种过程中尽量不要说话，以防细菌夹带在气流中进入培养容器中。
7、接种后要在酒精灯上灼烧瓶口和封口纸，并迅速封口。
操作要规范、准确、迅速。
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