单胞藻规模化培养技术规范.pdf

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ICS65.150CCSB51DB33浙江省地方标准DB33/T23002020单胞藻规模化培养技术规范Technicalspecificationforlarge-scalecultivationofmicroalgae2020-12-30发布2021-01-30实施浙江省市场监督管理局发布DB33/T23002020I前言本标准按照GB/T1.12020标准化工作导则第1部分：

标准化文件的结构和起草规则的规定起草。

本标准由浙江省农业农村厅提出。

本标准由浙江省水产标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：

浙江省海洋水产养殖研究所，浙江永兴水产种业有限公司，宁波大学。

本标准主要起草人：

柯爱英、徐继林、周朝生、肖国强、蔡景波、黄振华、曾国权、胡园、朱洁、吴越、王瑶华。

DB33/T230020201单胞藻规模化培养技术规范1范围本标准规定了单胞藻规模化培养的培养条件和设施、培养方法、日常管理、收获和保存等内容。

本标准适用于水产苗种培育和养殖生产中的单胞藻培养。

2规范性引用文件下列文件中的内容通过规范性文件的引用而构成本标准必不可少的条款。

其中，注日期的引用文件，仅该日期的对应版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。

GB11607渔业水质标准NY5051无公害食品淡水养殖用水水质NY5052无公害食品海水养殖用水水质3术语与定义下列术语和定义适用于本标准。

3.1指数生长期细胞迅速生长繁殖，藻细胞数量随着培养时间的延长呈几何级数递增的时期。

3.2一级培养以0.3L5.0L广口瓶或三角烧瓶作培养容器，严格消毒，用滤纸封口的培养方式。

3.3二级培养用容积为50L100L白塑料桶、尼龙袋、光生物反应器等作为培养容器，严格消毒，连续充气的培养方式。

3.4三级培养采用育苗场现有的水泥培养池、帆布池等作为培养容器，消毒，连续充气的培养方式。

4培养条件和设施4.1培养用水海水应符合GB11607、NY5052规定。

淡水应符合GB11607、NY5051规定。

4.2设施设备DB33/T230020202主要有蓄水池、沉淀池、过滤池、输水管、保种室、培养池、光生物反应器等设施。

场地要求光线明亮，通风条件好，配备显微镜、生物培养箱、空调、冰箱等设备。

配套供水、供气、供电设施。

4.3培养容器一级培养的容器主要有0.3L5.0L的三角烧瓶，二级培养主要采用10L20L玻璃广口瓶、50L100L白色塑料桶、光生物反应器等；三级大面积培养主要采用水泥池、帆布池等。

5培养方法5.1器具消毒5.1.1高温消毒法5.1.1.1培养用的玻璃器皿和金属工具适用于煮沸消毒、烘箱干燥消毒、高压灭菌等高温消毒；5.1.1.2培养用的充气管、散气石适用于煮沸消毒。

消毒的方法见附录A。

5.1.2化学药品消毒法5.1.2.1酒精消毒适用于手、镊子、瓶口的消毒。

5.1.2.2将高锰酸钾、漂白粉或漂白片、盐酸配成溶液适用于玻璃器具、塑料容器、充气管、散气石、玻璃缸、水泥池、管道等消毒。

消毒方法见附录A。

5.2培养用水消毒5.2.1加热消毒法5.2.1.1一级培养用的水经砂滤、脱脂棉过滤，煮沸5分钟10分钟，冷却后使用。

5.2.1.2二级培养用水经砂滤、250目筛绢袋过滤煮沸5分钟10分钟，冷却后使用。

5.2.2漂白粉或漂白片消毒5.2.2.1容积50L100L塑料桶，加水后用漂白片消毒，有效氯浓度为20mg/L50mg/L，中和去除余氯后使用。

5.2.2.2水泥池加水后泼洒80目过滤过的漂白水，有效氯浓度为15mg/L30mg/L，中和去除余氯后使用。

5.2.2.3光生物反应器直接注入有效氯浓度为50mg/L100mg/L漂白水消毒，中和去除余氯后使用。

光生物反应器长期培养藻类后消毒采用盐酸1000mg/L+250mg/L次氯酸钠混合消毒液在缓冲罐里，用水泵循环到管道里，消毒混合液可以重复使用。

5.3接种5.3.1藻种质量藻种应无污染，无杂藻、藻细胞无附壁。

5.3.2接种浓度接种时间宜在早上6：

0010：

00进行，藻种在指数生长后期，一级培养接种浓度为1：

51：

10；二级培养接种浓度1：

101：

50；三级培养根据天气、生产需要来接种，接种浓度1：

151：

30。

5.4培养条件水产养殖常用微藻种类生态条件参数见附录B。

5.5培养液常用培养液配方见附录C、附录D。

6日常管理DB33/T2300202036.1观察与处理6.1.1观察定期显微镜检查，从藻细胞的形态、悬浮、污染情况等了解细胞生长是否正常。

注意观察藻液颜色，有无附壁、沉淀、菌膜和敌害生物，如发现异常应立即舍弃，并及时重新接种培养。

6.1.2一级培养空调控温，光照用日光灯调节，每天摇晃藻种瓶4次6次，培养用的消毒水应在5天7天用完。

6.1.3二级培养二级培养室保持采光良好，自然光照或人工光源，用遮光帘或遮阳布等设施，避免太阳光直射，充气量微沸、封口，定期用漂白水培养场所进行消毒。

6.1.4三级培养控温，用遮光帘或遮阳布等设施，调节光照，充气微沸。

6.2记录和补充培养液根据藻类的生长状态和对藻类的需求量收获一部分浓藻液，并补充等量的新培养液继续培养。

对每次接种、培养液添加进行记录。

7收获和保存7.1收获单胞藻经各培养阶段，最终达到苗种及养殖生产单位所要求的藻种浓度和质量，投喂的单胞藻以处于指数生长期收获。

7.2保存培养的单胞藻利用500目尼龙筛网富集、暗沉淀、加0.5g/L1.0g/L明矾或氢氧化钙收集藻类，冷藏或冷冻保存，以备随时投喂使用。

8技术模式图单胞藻规模化培养技术模式图见附录E。

DB33/T230020204AA附录A（资料性）单胞藻培养常用消毒方法单胞藻培养常用消毒方法见表A.1表A.1单胞藻培养常用消毒方法项目名称项目名称煮沸煮沸烘箱干燥烘箱干燥高压灭菌高压灭菌高锰酸钾高锰酸钾漂白粉或漂白粉或漂白片漂白片盐酸盐酸玻璃容器5分钟10分钟120恒温2小时121，维持20分钟浓度10mg/L20mg/L浸泡5分钟10分钟浓度10mg/L100mg/L浸泡12小时盐酸：

水1：

11：

5金属工具5分钟10分钟120恒温2小时121，维持20分钟/塑料容器/浓度10mg/L20mg/L浸泡5分钟10分钟浓度10mg/L100mg/L浸泡12小时盐酸：

水1：

11：

5充气管散气石5分钟10分钟/浓度10mg/L20mg/L浸泡5分钟10分钟浓度10mg/L100mg/L浸泡12小时/水泥池玻璃缸/浓度10mg/L20mg/L浸泡5分钟10分钟浓度10mg/L100mg/L浸泡12小时盐酸：

水1：

11：

5光生物反应器、管道/浓度10mg/L20mg/L浸泡5分钟10分钟浓度10mg/L100mg/L浸泡12小时盐酸：

水1：

11：

5DB33/T230020205BB附录B（资料性）水产养殖常用微藻种类生态条件参数水产养殖常用微藻种类生态条件参数见表B.1。

表B.1水产养殖常用微藻种类生态条件参数品种隶属PH适温范围（）盐度范围（）光照强度（）三角褐指藻硅藻门7.010.0525153510008000小新月菱形藻7.010.0528203510008000纤细角毛藻6.59.510401030500015000牟氏角毛藻6.59.510401030500015000假微型海连藻7.010.020301535100010000威氏海连藻7.010.020301535300010000中肋骨条藻7.010.01025104030007000等鞭金藻金藻门7.09.51535105030009000球等鞭金藻7.010.010351050300010000叉鞭金藻7.09.59351050300015000绿色巴夫藻7.09.51035580300015000亚心形扁藻绿藻门7.010.07301040100020000青岛大扁藻7.010.010351040100010000塔胞藻7.010.07301040100020000小球藻6.08.51036045100020000微绿球藻7.09.51036436300020000栅藻5.0-7.5103501000-10000DB33/T230020206CC附录C（资料性）常用海洋微藻培养液配方常用海洋微藻培养液配方见表C.1。

表C.1常用海洋微藻培养液配方隶属培养液配方成分一级培养mg二级培养mg三级培养mg金藻门硝酸钠或硝酸钾100.0050.0020.00磷酸二氢钾15.0010.003.00硫酸亚铁或柠檬酸铁2.502.501.5硫酸锰0.250.25/EDTA20.0010.00/尿素/10.0010.00维生素B10.10.05/维生素B20.00050.0005/碳酸氢钠1.00/消毒水1L1L1L硅藻门硝酸钠或硝酸钾90.0050.0020.00磷酸二氢钾20.004.003.00硫酸亚铁或柠檬酸铁2.502.501.5硫酸锰0.250.25/EDTA20.0010.00/尿素/10.0010.00维生素B10.10.001/维生素B20.00050.000008/碳酸氢钠1.00/硅酸钠10.0010.0010.00消毒水1L1L1L绿藻门硝酸钠或硝酸钾100.0020.0020.00磷酸二氢钾20.004.003.00硫酸亚铁或柠檬酸铁2.502.501.0硫酸锰0.250.25/EDTA20.0010.00/尿素/20.0020.00维生素B10.10.001/维生素B20.00050.000008/碳酸氢钠1.00/消毒水1L1L1LDB33/T230020207D附录D（资料性）常用淡水藻类水生4号培养液配方常用淡水藻类水生4号培养液配方见表D.1。

表D.1常用淡水藻类水生4号培养液配方成分硫酸铵mg/L磷酸氢二钾mg/L过磷酸钙mg/L硫酸镁mg/L氯化钾mg/L碳酸氢钠mg/L三氯化铁1%水溶液土壤浸出液ml用量200103080251001滴0.5注：

土壤浸出液配制：

（菜园土1份+2份水）混合摇匀，静止，取上清液。

DB33/T230020201DE附录E（资料性）单胞藻规模化培养技术模式图单胞藻规模化培养技术模式见图E.1。

图E.1单胞藻规模化培养技术模式图一级培养二级培养三级培养将保种室中培养的藻种扩种到0.3L5L的玻璃瓶，用水需经过脱脂棉过滤煮沸，培养液高压灭菌或煮沸。

将经过滤培养水烧开注入桶内密封，冷却后加培养液，接种培养。

充气管、气石煮沸消毒，培养液煮沸。

将经过滤培养水注入桶内，加漂白片有效氯浓度20mg/L50mg/L,充气-停气-密封，12小时24小时后充气加硫代硫酸钠中和，加培养液，接种培养。

充气管、气石煮沸消毒或漂白精消毒，培养液煮沸。

将经过滤水加有效氯浓度50mg/L100mg/L,用水泵注入管道，12小时24小时后充气加硫代硫酸钠中和，加培养液和30mg/L碳酸氢钠接种培养。

将池子冲洗干净，加经过滤的水到水位80cm120cm,充气泼洒经80目过滤的漂白粉使水体有效氯浓度达15mg/L30mg/L，用漂白水将池壁和过道淋洗，充气30小时60小时后停气，12小时24小时后泼洒硫代硫酸钠，充气1小时左右施肥接种。