常用试剂和培养基.docx
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常用试剂和培养基
常用试剂和培养基
Sterilewaterbottles
200ml,500ml,or950mlwater.
Autoclave.
0.05MCaCl2（per200ml）
CaCl2·2H2O1.5g
Add198mlwater.
Autoclave.
0.5MCaCl2（per200ml）
CaCl2·2H2O15.0g
Add188mlwater.
Autoclave.
0.1MMgSO4（per200ml）
MgSO4（anhydrous）2.4g
Add200mlwater.
Autoclave.
10%MSG（for200ml）
Glutamicacid（Na）20.0g
Add188mlwater.
Autoclave.
40%Glucose（per200ml）
Glucose（dextrose）80.0g
Addwaterto200ml
（~145-150ml）.
Autoclave.
10%CAA（per200ml）
CaseinAcidHydrolysate20.0g
Add186mlwater.
Autoclave.
10%Yeast（per200ml）
Yeastextract20.0g
Add150-160mlwater.Autoclave.
Add150ulß-mercaptoethanol
afterautoclaving.
20XTryptone/NaCl（per200ml）
Tryptone40.0g
NaCl20.0g
Add190mlwater.Autoclave.
Add150ulß-mercaptoethanol
afterautoclaving.
10XM9stock（for200ml）
Na2HPO4（anhydr.）12.0g
KH2PO46.0g
NaCl1.0g
NH4Cl2.0g
Add196mlH2O.Autoclave.
Note:
leaveoutNH4Cltoprepare10XM9-N.
10XM9-Nstock（for200ml）
Na2HPO4（anhydr.）12.0g
KH2PO46.0g
NaCl1.0g
Add196mlH2O.Autoclave.
Note:
leaveoutNH4Cl!
100XP（for200ml）
KH2PO418.1g
K2HPO45.0g
pHto6.3with10NKOH!
Add192mlH20.Autoclave.
1XSM（for200ml）
NaCl1.16g
MgSO40.20g
Gelatin（2%）1.00mlor20mg
Add190mlH2O,thenadd:
Tris（1M,pH7.5）10.0ml
Autoclave.
2%Gelatin（per500ml）
Gelatin10g
Add500mlwater.
Autoclave.
20%Succinate（for500ml）
Succinicacid100g
KOH90g
Addto400mlicecoldwater.
MeasurepHto6.4,filtersterilize.
10XTBE（electrophoresisbuffer）
Trisbase108.0g
Na2EDTA9.3g
BoricAcid55.0g
Bringvolumeto1Lwithwater.
Usedoubledistilledwater.
pHshouldbe8.3;ifnotadjustdropwisewithconc.NaOH.
Wateragarstock（for190ml）
Agar3.0g
Add190mlH2O.
Autoclave,storein60Cwaterbath.
Ragarstock
200ml500ml
Tryptone........2.0g5.0g
NaCl............1.0g2.5g
Agar............3.0g7.5g
AddH2O.........194.0ml485.0ml
Autoclave,storein60Cwaterbath.
LBagar200ml1000ml
Tryptone......2g10g
NaCl..........1g5g
Yeastextract.1g5g
Agar..........3g15g
AddH2O......193ml990ml
Autoclave,storein60Cwaterbath.LBagarcanalsobemadeby
adding10ml10%yeastextractand10ml20XTryptone/NaClto
190mlWA.
NZ200ml500ml
NZamine....2.0g5.0g
NaCl........1.0g2.5g
MgSO4（anhydrous）..0.2g0.5g
Add10MNaOH（1drop/100ml）afteraddingwater.
Autoclave.
Foragarmedia:
Agar........2.4g6.0g
Stirbeforeandafterautoclaving.
GYPCtoWAstock:
200ml1000ml
Glucose（40%）.....2.0ml10.0ml
Yeastextract（10%）4.0ml20.0ml
100XP............2.0ml10.0ml
CAA（10%）.........4.0ml20.0ml
Succinate（20%）....1.0ml5.0ml
Addappropriateantibiotics.
Pourplates.
ORSminimal200ml1000ml
10XM9.........10ml50ml
Succinate（20%）.2ml10ml
MSG（10%）......2ml10ml
Glucose（40%）..1ml5ml
MgSO4（0.1M）..1ml5ml
CaCl2（0.5M）..200ul1ml
1000Xvitamins.200ul1ml
Water..........184ml920ml
Omitsuccinateandadd10mlglucoseforstoragemedium.
E.coliminimal200ml1000ml
10XM9..........20ml100ml
MgSO4（0.1M）...2ml10ml
CaCl2（0.5M）...0.2ml1ml
1000Xvitamins..0.2ml1ml
Glucose（40%）...2ml10ml
XCminimal200ml1000ml
10XM9..........5.0ml25ml
MgSO4（0.1M）...1.0ml5ml
CaCl2（0.5M）...0.2ml1ml
200X7aastock..0.2ml1ml
Glucose（40%）...0.5ml2.5ml
Glycerol（50%）..4.0ml20ml
Nifplates
10XNifbuffer100ml
10Xtraceelements100ml
1000Xvitamins1ml
SterileddH2O799ml
Agarose6g
Succinate（20%）20ml
（Succinateisalready0.4%fromthatin10Xnifbuffer）
10XNifbuffer1000ml
K2HPO434.02g
KH2PO457.06g
Succinate（20%）200.00ml
pHshouldbe6.4after10Xdilution.
1000XORSvitamins
Nicotinicacid2.0mg/ml
Pantothenate1.0mg/ml
Biotin0.2mg/ml
Stir,filtersterilize.
Traceelements
MgSO4（0.1M）25ml
CaCl2（0.5M）5ml
Na2MoO4（1mg/ml）5ml
FeCl3（1mg/ml）5ml
Water460ml
YEM（per500ml）
K2HPO40.5g
MgSO47H2O0.2g
NaCl0.1g
Mannitol10.0g
Yeastextract0.4g
Agar15.0g
pHto6.9
YEMsubstitute（per200ml）
To180mlWAstock:
10XM98.0ml
Mannitol（20%）20.0ml
Yeastextract（10%）1.6ml
SM10selectivemedia（forstorage）
10XversatileMg100ml
Thiamine5ml
Threonine5ml
Leucine5ml
Glucose（40%）10ml
Water875ml
Aminoacids
SM10stocks:
Thiamine（0.337%）
Threonine（0.71%）
Leucine（0.79%）
Klebsiella:
Histidine（0.31%）
10XversatileMg（for200ml）
MgSO42.0ml
Thiamine（1mg/ml）2.0ml
CaCl20.2ml
200XPLT（for200ml）
Proline9.20g
Leucine1.60g
Thiamine0.67g
Autoclave.
MgPLT
10XversatileMg100ml
200XPLT5ml
40%glucose10ml
Water885ml
Zbuffer（lacZassays）
200ml1000ml
Na2HPO47H2O....3.22g16.10g
NaH2PO4H2O......1.10g5.50g
KCl..............0.15g0.75g
MgSO4（0.1M）....1.00ml0.20ml
ß-mercaptoethanol.2.70ml0.54ml
Filtersterilize.
ONPGstock
4mg/mlinphosphatebuffer（pH7）
Phosphatebuffer（pH7.0）per100ml:
Na2HPO47H2O1.64g
NaH2PO4H2O1.38g
0.2MNa2CO3（100ml）
Na2CO3（anhydr.）10.6g
Jensen'sMedium（Sesbania）
10XMacronutrients（1000ml）:
K2HPO43H2O2.6g
NaCl2.0g
MgSO40.97g
CaCl210.0g
FeCl36H2O1.4g
KNO33.0g
Jensen'sMedium（Sesbania）
1Xsolution（1000ml）:
K2HPO43H2O0.20g
NaCl0.20g
MgSO47H2O0.20g
CaHPO41.00g
FeCl36H2O0.10g
orFeEDTA0.26g
KNO3.（onlyfor10X）3.00g
Jensen'sMedium（1942）
seeVincent1970p.75.
perLiter:
K2HPO43H2O0.2g
NaCl0.2g
MgSO47H2O0.2g
CaHPO41.0g
FeCl36H2O0.1g
orFe-EDTA0.26g
Dilute1:
5whenused.
15mldilutedmedium/pouch.
1000XMicronutrients（200ml）
H3BO3572mg
MnCl2406mg
ZnSO4H2O44mg
CuSO45H2O16mg
NaMO4BH2O18mg
Co2+20mg
Ni2+20mg
Nodulegrindingbuffer（500ml）
50mMKH2PO4（pH7.6）,0.15MNaCl
K2HPO4（1M）3.25ml
KH2PO4（1M）21.75ml
NaCl4.38gm
Addto450mldistilledwater,pHto7.6,andadjustvolumeto500ml.
Rapidynegermicide
Forworkingsolution:
Diluteconcentratedstockat0.6ml/L.
1MTris-Cl（500ml）
To400ml,add:
Trisbase60.5g
Addconc.HCltopH
bringtovolume.
TrisbuffermixturesforpH
pHTrisHClTrisbase
7.0.923.077
7.1.905.095
7.2.90.10
7.3.865.135
7.4.84.16
7.5.82.18
7.6.78.22
7.7.74.26
7.8.67.33
7.9.63.37
8.0.50.50
SouthernTransfersolutions
I.0.25NHCl:
21.5mlconc.HCl（11.6N）to1litervolume.
II.0.5MNaOH,1.5MNaCl:
87.7gNaCl,20.0gNaOHto1litervolume.
III.1.0MTris,1.5MNaCl:
121.1gTrisbase,87.7gNaCl,pHto8.0withconc.HCl（~50
ml）,adjustto1litervolume.
IV.20XSSC:
175.3gNaCl,88.2gNa3citrate,pHto7.0withconc.HCl（~1
drop）,adjustto1litervolume.
Random-primeroligonucleotidelabelling
Mix:
9.00ulDNA（notmorethan200ng）
1.25ulhexamers
Boil,thenplaceonice,thenadd:
5.0ulHEPESbuffer
5.0ulnucleotides[in250mMTris（pH8）,25mMMgCl2,50mM
ß-mercaptoethanol]
1.0ulBSA（40mg/ml）
0.5ulKlenow
5.0ul-32PCTP
Letreactiongoatroomtemperatureforatleast4hours,orovernight.
MSMEDIUMFORARABIDOPSIS
To990mlH2Oadd:
Sucrose...........10.0g
MOPS..............0.5g
Agar..............8.0g
AdjustpHto5.7with1MKOH.
Autoclave.
Whencooledaddsterilestocksolutionsof:
KNO3...............20.0ml940mM（95.00g/L）
NH4NO3.............20.0ml1000mM（80.04g/L）
KH2PO4.............12.5ml100mM（13.60g/L）
MgSO47H2O.........15.0ml100mM（24.65g/L）
CaCl27H2O.........10.0ml300mM（44.00g/L）
Glycine............2.67ml10mM
Nicotinate.........0.4ml10mM
Thiamin............0.02ml10mM
PyridoxineHCl.....0.24ml10mM
Myoinositol........5.5ml100mM
FeSO47H2O........1.0ml（2.780g/100ml）
Na2EDTA...........1.0ml100mM（3.720g/100ml）
MnSO44H2O.........1.0ml100mM（1.690g/100ml）
ZnSO44H2O.........3.0ml10mM（0.288g/100ml）
H3BO3.............1.0ml100mM（0.618g/100ml）
KI.................0.5ml10mM（0.166g/100ml）
CuSO45H2O........0.01ml10mM（0.170g/100ml）
Na2MoO42H2O......0.1ml10mM（0.242g/100ml）
CoCl26H2O........0.01ml10mM（0.238g/100ml）
B5MEDIUMFORARABIDOPSIS
To990mlH2Oadd:
Sucrose...........20.0g
MOPS..............0.5g
Agar..............8.0g
AdjustpHto5.7with1MKOH.
Autoclave.
Whencooledaddsterilestocksolutionsof:
KNO3...............26.3ml940mM（95.00g/L）
NaH2PO4H2O........11.0ml100mM
MgSO47H2O.........10.0ml100mM（24.65g/L）
（NH4）2SO3..........10.0ml100mM
CaCl27H2O.........3.3ml300mM（44.00g/L）
Myoinositol........5.5ml100mM
Thiamine...........3.0ml10mM
Nicotinate.........0.8ml10mM
PyridoxineHCl.....0.48ml10mM
10XMicronutrients.10.0ml（seebelow）
Sequestrene330Fe.10.0ml（0.28g/100ml）
ForCallusInducingMedium（CIM）add:
2,4-D.....................0.50ml
Kinetin...................0.05ml
ForShootInducingMedium（SIM）add:
IAA.......................0.15ml
6-dimethylaminopurine.....5.00ml
10XMicronutrients（per100ml）
MnSO44H2O.........0.6ml100mM（1.690g/100ml）
ZnSO44H2O.........10.07ml10mM（0.288g/100ml）
H3BO3.............4.9ml100mM（0.618g/100ml）
KI.................4.5ml10mM（0.166g/100ml）
CuSO45H2O........2.3ml10mM（0.170g/100ml）
Na2MoO42H2O......1.0ml10mM（0.242g/100ml）
CoCl26H2O........1.0ml10mM（0.238g/100ml）
LB（Luria-Bertani）Broth
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