CYP含量测定公式.docx

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CYP含量测定公式

CYP450含量测定公式

　　万方数据

　　第１８卷第４期中国实验方剂学杂志

　　Ｖ０１．１８．Ｎｏ．４２０１２年２月

　　ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃａｌＦｏｒｍｕｌａｅ

　　Ｆｅｂ．，２０１２

　　葛根散对急性酒精性肝损伤小鼠肝微粒体

　　ＣＹＰ４５０含量及ＣＹＰ２Ｅ１活性的影响

　　田维毅１，王庆学２，王文佳１，杨柱２

　　４

　　（１．贵阳中医学院免疫教研室，贵阳

　　５５０００２；２．贵阳中医学院中医基础教研室，贵阳

　　５５０００２）

　　［摘要］

　　目的：

考察经典解酒方葛根散对急性酒精性肝损伤小鼠肝微粒体细胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰ４５０）含量及细胞色素

　　Ｐ４５０—２Ｅｌ（ＣＹＰ２Ｅ１）活性的影响。

方法：

实验小鼠分葛根散高、中、低剂量组、正常对照组和模型对照组，各给药组分别给予葛根散水煎剂（按生药量计，２０，１０，５ｇ?

ｋｇ“）ｉｇ，对照组代以等体积蒸馏水，每天１次，连续１０ｄ；每天给药３０ｒａｉｎ后，模型对照组和各给药组以１５ｍＬ?

ｋｇ“５６％白酒ｉｇ，正常对照组代以等体积蒸馏水，以血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）、天冬氨酸转氨酶（ＡＳＴ）及肝脏系数为参考指标，制备急性酒精性肝损伤小鼠模型；取小鼠肝组织检测葛根散对肝微粒体ＣＹＰ４５０含量及ＣＹＰ２Ｅ１活性的影响。

结果：

与正常对照组比较：

模型对照组血清ＡＬＴ、ＡＳＴ水平及肝脏系数显着升高（Ｐ＜０．０１），肝微粒体蛋白含量无明显变化，ＣＹＰ４５０含量及ＣＹＰ２Ｅ１活性显着提高（Ｐ＜０．０１）。

与模型对照组比较：

葛根散各剂量组血清ＡＬＴ，ＡＳＴ水平及大剂量组肝脏系数呈明显降低（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），肝微粒体蛋白含量无明显变化，ＣＹＰ４５０含量明显增多（Ｐ＜０．０１）且有剂量差异性（Ｐ＜０．０５），ＣＹＰ２Ｅ１活性显着降低（Ｐ＜０．０１）且有剂量差异性（Ｐ＜０．０１）。

结论：

葛根散对急性酒精性肝损伤小鼠肝功能具有良性干预作用，能提高酒精性肝损伤小鼠肝微粒体ＣＹＰ４５０含量和降低ＣＹＰ２Ｅ１活性。

　　［关键词】

　　葛根散；急性酒精性肝损伤；ＣＹＰ４５０；ＣＹＰ２Ｅ１

　　［中图分类号］Ｒ２８５．５

　　［文献标识码】

　　Ａ

　　［文章编号】

　　１００５－９９０３ｌ２０１２）０４－０１８３－０４

　　ＥｆｆｅｃｔｏｆＧｅｇｅｎＰｏｗｄｅｒ

　　ｏｎ

　　ＣＹＰ４５０ＣｏｎｔｅｎｔｏｆＬｉｖｅｒ

　　Ｍｉｃｒｏｓｏｍａｌ

　　ａｎｄ

　　ＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＣＹＰ２Ｅｌｉｎ

　　Ｍｉｃｅ

　　ＡｃｕｔｅＡｌｃｏｈｏｌ－ｉｎｄｕｃｅｄＬｉｖｅｒ

　　Ｉｎｊｕｒｙ

　　ＴＩＡＮＷｅｉ—ｙｉｌ，ＷＡＮＧ

　　Ｑｉｎｇ．ｘ，ｕｅ２，ＷＡＮＧＷｅｎ－ｊｉａｌ，ＹＡＮＧ

　　Ｚｈｕ２＋

　　［收稿日期］２０１１０８１７（００４）

　　［基金项目】

　　贵州省科技厅基金项目（黔科合Ｊ字［２００８１２２９０）；贵州省省长专向基金项目（黔科合专字［２００８］白号）

　　７

　　［第一作者］

　　田维毅，教授，硕士生导师，从事中西医结合研究，Ｅ－ｍａｉｌ：

ｔｉａｎｗｅｉｙｉｌ９７２＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ［通讯作者］

　　’杨柱，博士，教授，硕士生导师，从事中西医结合研究，Ｅ－ｍａｉｌ：

ｙａｎｇｚｈｕ６４０２＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ

　　，

　　５

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　　?

１８３?

　　万方数据

　　第１８卷第４期中国实验方剂学杂志

　　Ｖ０１．１８．Ｎｏ．４２０１２年２月

　　ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃａｌＦｏｒｍｕｌａｅ

　　Ｆｅｂ．，２０１２

　　（１．ＬａｂｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ

　　Ｃｏｌｌｅｇｅ

　　ｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌ

　　Ｃｈｉｎｅｓｅ

　　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（ＴＣＭ），Ｇｕｉｙａｎｇ

　　５５０００２，＂Ｃｈｉｎａ；

　　２．Ｌａｂ

　　ｏｆＢａｓｉｃ，Ｇｕｉｙａｎｇ

　　Ｃｏｌｌｅｇｅ

　　ｏｆＴＣＭ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００２，Ｃｈｉｎａ）

　　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ：

Ｔｏ

　　ｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆ

　　ＪｉｅｊｉｕｒｅｃｉｐｅｓｏｆＧｅｇｅｎｐｏｗｄｅｒ

　　ｏｎ

　　ｔｈｅ，ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０

　　（ＣＹＰ４５０）ｃｏｎｔｅｎｔ

　　ｏｆｌｉｖｅｒｍｉｃｒｏｓｏｍａｌａｎｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙＣＹＰ２Ｅ１ｉｎｍｉｃｅ

　　ａｃｕｔｅ

　　ａｌｃｏｈｏｌ—ｉｎｄｕｃｅｄｌｉｖｅｒ

　　ｉｎｊｕｒｙｍｏｄｅｌ．

　　Ｍｅｔｈｏｄ：

Ｍｏｕｓｅ

　　ｗｅｒｅ

　　ｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄＧｅｇｅｎｐｏｗｄｅｒｈｉｇｈ，ｍｅｄｉｕｍｎａｄｌｏｗ

　　ｄｏｓｅｇｒｏｕｐｓ．Ｇｅｇｅｎｐｏｗｄｅｒｏｆ２０，１０，５ｇ?

ｋｇ～，ｗａｓｇｉｖｅｎｏｎｃｅａ

　　ｄａｙａｎｄｃｏｎｔｉｎｕｉｎｇ

　　ｔｅｎ

　　ｄａｙｓ．Ａｆｔｅｒ３０ｍｉｎｕｔｅｓｏｆ

　　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｅｖｅｒｙｄａｙ，ｔｈｅｍｏｕｓｅｏｆｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ

　　ａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅ

　　ｏｒａｌｌｙｇｉｖｅｎ５６％ａｌｃｏｈｏｌｏｆ

　　１５ｍＬ?

ｋｇ～ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｃｕｔｅａｌｃｏｈｏｌ—ｉｎｄｕｃｅｄｌｉｖｅｒ

　　ｉｎｊｕｒｙｍｏｄｅｌ，ａｎｄ

　　ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＡＬＴ，ＡＳＴｉｎｓｅｒｕｍａｎｄｌｉｖｅｒｉｎｄｅｘｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄ；ＣｏｎｔｅｎｔｏｆＣＹＰ４５０ａｎｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＣＹＰ２Ｅ１

　　ｗｅｒｅ．ｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：

Ｃｏｍｐａｒｅｄ

　　ｗｉｔｈｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＡＬＴ，ＡＳＴａｎｄｌｉｖｅｒｉｎｄｅｘｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｈａｄｏｂｖｉｏｕｓ

　　ｅｎｈａｎｃｅ（尸＜０．０１），ｔｈｅ

　　ｃｏｎｔｅｎｔ

　　ｏｆｍｉｃｒｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎｈａｄ

　　ｎｏ

　　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｃｈａｎｇｅ，ｔｈｅ

　　ｃｏｎｔｅｎｔ

　　ｏｆＣＹＰ４５０ａｎｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＣＹＰ２Ｅ１ｗｅｒｅ

　　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ

　　ｒａｉｓｅｄ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｍｐａｒｅｄ

　　ｗｉｔｈｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＡＬＴ，ＡＳＴａｎｄｌｉｖｅｒｉｎｄｅｘｉｎＧｅｇｅｎ

　　ｐｏｗｄｅｒｇｒｏｕｐｓｈａｄｏｂｖｉｏｕｓ

　　ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ（Ｐ＜０．０５ｏｒ

　　Ｐ＜０．０１），ｔｈｅ

　　ｃｏｎｔｅｎｔ

　　ｏｆｍｉｃｒｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎｈａｄ

　　ｎｏ

　　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ

　　ｃｈａｎｇｅ，ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＣＹＰ４５０ｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０１），ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆ‘ＣＹＰ２Ｅ１ｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ

　　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０１）ａｎｄ

　　ｔｈｅｒｅｗａｓ

　　ａ

　　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｏｓａｇｅ

　　ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜０．０５）．

　　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：

Ｇｅｇｅｎｐｏｗｄｅｒｉｎｄｉｃａｔｅｓｔｈｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｎ

　　ａｃｕｔｅ

　　ａｌｃｏｈｏｌ－ｉｎｄｕｃｅｄｌｉｖｅｒ

　　ｉｎｊｕｒｙ，ｉｔ

　　ｃａｎ

　　ｂｅ

　　ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ

　　ｔｏｉｎｃｒｅａｓｅｉｎｇ

　　ｔｈｅ

　　ｃｏｎｔｅｎｔ

　　ｏｆＣＹＰ４５０ａｎｄｒｅｄｕｃｅｉｎｇｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＣＹＰ２Ｅ１

　　［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］

　　Ｇｅｇｅｎｐｏｗｄｅｒ；ａｃｕｔｅａｌｃｏｈｏｌ－ｉｎｄｕｃｅｄｌｉｖｅｒ

　　ｉｎｊｕｒｙ；ＣＹＰ４５０；ＣＹＰ２Ｅ１

　　细胞色素Ｐ４５０（ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０，ＣＹＰ４５０）是生特勒托利多上海公司），ＯｐｔｉｍａＭＡＸ．ＸＰ型超速低

　　物体内参与物质代谢的主要酶系，广泛存在于肝、

　　温离心机（美国贝克曼），ｕＶ．５５００型紫外一可见分光

　　脑、肺、肾等多种组织细胞的线粒体、细胞核包膜及光度计（上海元析）。

７

　　微粒体中。

肝微粒体是ＣＹＰ４５０在肝细胞内最主要１．３药物与试剂

　　实验方剂葛根散系金?

张子和

　　的分布场所。

１１。

肝微粒体ＣＹＰ４５０是一组混合功能《儒门事亲》解酒方，由甘草、葛根§葛花、缩砂仁、贯

　　氧化酶系，其主要成分之一ＣＹＰ４５０—２Ｅｌ（ＣＹＰ２Ｅ１）众各等份组成，组方药材购自上海同仁堂大药房，经对乙醇等肝毒性物质具有特异性代谢作用，在酒精鉴定为正品，按原方比例制备水煎剂并调整（生药）

　　性肝病的发病机制中起着至关重要的作用嵋１。

浓度为１ｇ?

ｍＬ“备用；５６％红星二锅头白酒为北京

　　ＣＹＰ２Ｅ１诱导产生的自由基不但氧化细胞膜的脂质

　　红星股份有限公司产品（批号０８１２１５）丙氨酸转氨

　　和蛋白，导致肝细胞结构与功能的损害旧。

；还可以

　　酶（ＡＬＴ）、天冬氨酸转氨酶（ＡＳＴ）检测试剂盒购自刺激肝星状细胞分泌胶原，参与肝纤维化过程Ｈ１。

　　南京建成生物工程研究所，牛血清白蛋白购自德国前期研究显示：

急性酒精中毒小鼠出现肝组织病变

　　Ｓｉｇｍａ公司（含量９９％），氨基呲啉购自北京化学试明显、肝功能损伤严重、肝细胞大量凋亡；葛根散等

　　剂公司（批号０９１０２２），ＮＡＤＰＨ购自德国Ｓｉｇｍａ公

　　解酒方对上述病理改变具有不同程度改善作用。

为

　　司（含量９５％）。

　　了深入探索解酒方葛根散的作用机制，本文以血清２方法

　　，

　　谷丙转氨酶（ＡＬＴ）、谷草转氨酶（ＡＳＴ）水平及肝脏２．１

　　动物分组与处理实验动物分为正常对照组、

　　系数为参考指标，制备急性酒精性肝损伤小鼠模型，模型对照组、葛根散大、中、小剂量给药组，每组１５给予葛根散水煎剂ｉｇ干预，探索该方对实验小鼠肝只。

根据药理实验动物给药折算方法，按成人（按

　　微粒体ＣＹＰ４５０含量及ＣＹＰ２Ｅ１活性的影响。

　　６０

　　ｋｇ计算）每天常规用药６０ｇ折算实验用药量，葛

　　１材料

　　根散大高、中、低剂量分别为生药２０，１０，５

　　ｇ?

ｋｇ—

　　１．１动物清洁级昆明种小鼠，雄性，２０～２２ｇ，购

　　ｉｇ，不同浓度水煎剂给药体积均为０．２ｍＬ，每天１自上海斯莱克实验动物有限责任公司［许可证号

　　次。

正常对照组和模型对照组代以等量蒸馏水。

每

　　ＳＣＸＫ（沪）２００７－０００５］。

　　天给药３０ｍｉｎ后，模型对照组和各给药组用５６％５红

　　１．２仪器ＡＢｌ３５－Ｓ型梅特勒托利多电子天平（梅

　　星二锅头白酒ｉｇ，１５ｍＬ?

ｋｇ～，每天１次，正常对照

　　?

１８４－

　　田维毅，等：

葛根散对急性酒精性肝损伤小鼠肝微粒体ＣＹＰ４５０含量及ＣＹＰ２Ｅ１活性的影响

　　组代以等量蒸馏水。

所有动物常规饲养，连续１０

　　末次ｉｇ

　　２４

　　ｄ。

　　乙酸１．５

　　ｍＬ，７０００

　　ｒ?

ｒａｉｎ。

离心１０ｒａｉｎ后，取上清，

　　ｈ后杀鼠取材检测相关指标。

　　ｈ后开始禁食（不禁水）；２４ｈ后每只小鼠

　　加入Ｎａｓｈ试剂１ｍＬ，６０℃水浴１０ｍｉｎ后，紫外分光光度计４１２ｎｍ波长处扫描。

以系列浓度的甲醛为横坐标、Ａ值为纵坐标，求得甲醛线性回归方程。

分别吸取待测微粒体０．５ｍＬ，Ｈｅｐｅｓ缓冲液０．４

　　ｍＬ，２０

　　２．２小鼠血清ＡＬＴ，ＡＳＴ水平及肝脏系数的检测

　　末次ｉｇ

　　１２

　　经眼眶采血，低温离心制备血清，按试剂盒要求检测

　　ＡＬＴ，ＡＳＴ水平；采血后，迅速颈椎脱臼处死，取出肝

　　ｇ?

Ｌ“氨基比林０．１

　　ｍＬ，３７

　　ｏＣ水浴３ｒａｉｎ后

　　脏，剪去表面韧带和结缔组织，用ＫＣｌ－蔗糖缓冲液

　　（０．１５

　　ｔｏｏｌ?

Ｌ～ＫＣＩ－Ｏ．２

　　加入１００

　　ｍｍｏｌ?

Ｌ～ＮＡＤＰＨ０．０１

　　ｍＬ，３７℃水浴３０

　　ｔｏｏｌ?

Ｌ。

１蔗糖）（ｐＨ７．５）洗

　　ｒａｉｎ。

其余步骤同甲醛标准曲线制备，依据甲醛标准

　　万方数据

　　净表面血污，用滤纸吸去水滴，称肝重以计算肝脏曲线计算酶活性，以ｐ，ｍｏｌ?

ｒａｉｎ～?

ｍｇ。

蛋白表示酶

　　系数。

　　活性。

　　２．３小鼠肝微粒体ＣＹＰ４５０的含量检测

　　参照文

　　２．５数据统计所有数据输入计算机用ＳＰＳＳ１３．０

　　献方法¨。

。

上述肝脏称重后，剪碎，再用ＫＣＬ一蔗糖

　　统计软件进行统计，结果以互±ｓ表示，组间采用ｔ检

　　缓冲液洗２次，充分去除肝脏血液。

按３ｍＬ（ＫＣＬ一

　　验。

Ｐ＜０．０５有统计学意义。

　　蔗糖缓冲液缓）?

ｇ一（肝脏组织）比例加入缓冲液，３

　　结果

　　置冰浴中制备组织匀浆。

然后以１０

　　０００

　　Ｘｇ，４℃离

　　３．１对急性酒精性肝损伤小鼠血清ＡＬＴ，ＡＳＴ水平

　　心２０ｒａｉｎ，再取上清以１０５０００×ｇ，４ｏＣ离心６０

　　及肝脏系数的影响

　　与正常对照组比较，模型对照

　　ｒａｉｎ，弃上清，淡红色沉淀物即为肝微粒体。

将肝微组血清ＡＬＴ，ＡＳＴ水平及肝脏系数明显升高（Ｐ，＜

　　粒体沉淀取出后用Ｔｒｉｓ．蔗糖缓冲液（０．０５

　　ｔｏｏｌ?

Ｌ。

１

　　０．０１）；与模型对照组比较，葛根散各剂量组血清

　　Ｔｒｉｓ－Ｏ．２５

　　ｔｏｏｌ?

Ｌ。

蔗糖）（ｐＨ７．５）悬浮，经超声细胞

　　ＡＬＴ，ＡＳＴ水平及大剂量组肝脏系数有不同程度降粉碎仪混匀，一８０℃保存待测。

将待测肝微粒体样低（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）；与葛根散大剂量组比较，

　　本稀释５０倍，采用牛血清白蛋白制备标准曲线，按

　　葛根散小剂量组血清ＡＬＴ，ＡＳＴ水平明显较高（Ｐ＜

　　Ｌｏｗｅｒｙ法检测肝微粒体蛋白浓度。

吸取Ｔｒｉｓ一蔗糖

　　０．０５或Ｐ＜０．０１），肝脏系数无差异显着。

见表１。

缓冲液５．５ｍＬ，加入稀释为５ｇ?

Ｌ。

的待测微粒体

　　３．２对急性酒精性肝损伤小鼠肝微粒体ＣＹＰ４５０

　　悬液０．５ｍＬ及１０％连二亚硫酸钠０．０４ｍＬ，立即混

　　含量及ＣＹＰ２Ｅ１活性的影响

　　与正常对照组比较：

　　匀。

等量分装到２个比色杯中，分别作为对照和样模型对照组肝微粒体ＣＹＰ４５０含量及ＣＹＰ２Ｅ１活性本，于样本池中比色杯充一氧化碳３０ｓ，紫外分光光显着提高（Ｐ＜０．０１），但微粒体蛋白含量变化不明度计４５０ｎｍ向４９０ｎｍ扫描并计算ＣＹＰ４５０含量。

显；与模型对照组比较：

葛根散各剂量组肝微粒体

　　计算公式如下（ｎｍｏｌ?

ｍｇ“）。

　　ＣＹＰ４５０含量显着提高（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），

　　蛋白＝ＡＡ（４５０

　　ｎｍ一４９０

　　ｎｍ）×１

　　０００÷９１

　　Ｘ稀

　　ＣＹＰ２Ｅ１活性显着降低（Ｐ＜０．Ｏｌ’），但微粒体蛋白含释后蛋白浓度（ｇ?

Ｌ。

１）

　　量变化不明显；与葛根散大剂量组比较：

葛根散小剂２．４小鼠肝微粒体ＣＹＰ２Ｅ１活性检测参照文献

　　量组肝微粒体ＣＹＰ４５０含量显着降低（Ｐ＜０．０５），方法∞１。

以０，０．０５，０．１，０．２，０．４，０．３，０．４，０．５ＣＹＰ２Ｅ１活性显着提高（Ｐ＜０．ｃｆｌ），但微粒体蛋白含

　　ｍｍｏ］?

Ｌ。

１系列浓度甲醛各１ｍＬ，加入１２．５％三氯

　　量变化不明显。

见表２。

　　表１葛根散对酒伤小鼠血清ＡＬＴ。

ｋ，ＳＴ水平及肝脏系数的影响（；±ｓ）

　　注：

与模型对照组比较１’Ｐ＜Ｏ．０５，２’Ｐ＜０．０ｌ；与葛根散大剂量组比较３’Ｐ＜Ｏ．０５，４’Ｐ＜０．０１（表２同）。

　　?

１８５?

　　第１８卷第４期２０１２年２月

　　中国实验方剂学杂志

　　ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃａｌＦｏｒｍｕｌａｅ

　　Ｖ０１．１８，Ｎｏ．４

　　Ｆｅｂ．，２０１２

　　’

　　表２葛根散对急性酒精性肝损伤小鼠肝微粒体Ｐ４５０含量及Ｐ４￥０－２Ｅ１活性的影响（；±ｓ）

　　万方数据

　　组别

　　．…

　　剂量

　　肝微粒体蛋白含量

　　ｎ

　　．

　　．

　　／ｇ‘ｋｇ～／ｍｇ?

ｇ一

　　正常对照一１４９．３１２４±１．１７１３

　　模型对照一

　　１３１ｏ．９３５１±１．０３２２葛根散

　　２０

　　１３１２．２８９６±１．１３０８１０

　　１５１２．１６２４±１．２６０１

　　５

　　１３

　　１１．２９６８±１．０１１３

　　４讨论

　　ＣＹＰ４５０是一种多功能氧化还原酶，因其一氧

　　化碳结合物的吸收光谱高峰在４５０ｎｍ处，故叫

　　Ｐ４５０。

肝微粒体ＣＹＰ４５０是肝药酶中最重要的酶系，参与各种外源物（如药物、化学毒物、致癌物等）

　　和内源物（如类固醇激素、维生素Ｄ、胆酸等）在体内的代谢过程。

ＣＹＰ２Ｅ１是ＣＹＰ４５０的一个重要亚

　　型，主要在肝脏表达。

一些疏水性的外来物质经

　　ＣＹＰ２Ｅ１转化后形成极性更大的物质排出体外，而

　　有时可能被转化为细胞毒、致癌、致突变作用更强的

　　物质，因此其生物学效应具有双面性。

乙醇是典型的ＣＹＰ２Ｅ１诱导剂，对ＣＹＰ２Ｅ１诱导可增加乙醛的产生，同时形成蛋白复合物、产生活性氧、导致ＤＮＡ修复功能降低、减少氧的利用、耗竭谷胱甘肽、介导自由基生成、脂质过氧化，从而导致毒性发生。

体内外研究证实，ＣＹＰ２Ｅ１在酒精性肝病的发病机制中主要参与脂质过氧化反应，与氧自由基和羟自由基的生成有关∞ｏ。

越来越多的研究表明，ＣＹＰ２Ｅ１与各种肝病的关系密切。

因此，探索解酒方剂对肝微粒体ＣＹＰ４５０含量及ＣＹＰ２Ｅ１活性的影响，对研究其解酒机制和防治酒精性肝损害具有重要意义。

表１实验结果显示：

①白酒ｉｇ导致实验小鼠血清ＡＬＴ、ＡＳＴ水平及肝脏系数显着改变，提示本实验中实验小鼠肝损伤明显，作为急性酒精性肝损伤动物模型可靠；②葛根散一定剂量下能不同程度地缓解酒伤

　　小鼠血清ＡＬＴ、ＡＳＴ水平及肝脏系数的改变幅度，且

　　具有剂量差异性，这可能是该方防治酒精性肝损害的部分机制，这与我们前期研究结果一致。

７｜。

表２实验结果显示：

①急性酒精性肝损伤小鼠肝微粒体ＣＹＰ４５０含量显着升高（Ｐ＜０．０１），这可能与乙醇诱导其主要亚型ＣＹＰ２Ｅ１大量表达有关；②葛根散各剂量组酒伤小鼠肝微粒体ＣＹＰ４５０含量较模型对照

　　组有进一步升高（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），这可能是

　　因为该方具有诱导肝微粒体中包括ＣＹＰ２Ｅ１在内的某些ＣＹＰ４５０酶类表达的作用，也可能与肝微粒体ＣＹＰ４５０酶系参与葛根散化学物质的转化代谢有关；③葛根散各剂量组酒伤小鼠肝微粒体ＣＹＰ２Ｅ１

　　?

１８６?

　　细胞色素Ｐ４５０含量

　　氨基比林Ｎ．脱甲基酶

　　．

　　．

　　．

　　／ｎｍｏｌ?

ｍｇ“

　　／斗ｍｏ卜ｍｉｎ～?

ｍｇ。

　　０．５１２７±０．０７１０”０．２０７８±０．０１０７２’０．７０１２±０．１１０４

　　０．３２１５±０．０１１２

　　１．１８３２±０．１１１７２’０．２３１９±０．０１４７２）１．００９７土０．１１０３２）０．２４０６±０．０１６２２）

　　０．８９９１±０．１０１１１，”０．２５８７４－０．０１０３２，４）

　　活性显着降低（Ｐ＜０．０１），这可能与葛根散含有ＣＹＰ２Ｅ１抑制物有关，或者是因为该方通过降低血乙醇水平而减弱乙醇对ＣＹＰ２Ｅ１的诱导作用；④模型对照组肝细胞微粒体蛋白较正常对照组无明显变化，提示乙醇对肝微粒体蛋白总量的影响不大；⑤葛根散各剂量组小鼠肝微粒体蛋白含量较正常对照组明显增多（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），这可能与肝微粒体ＣＹＰ４５０含量增多的现象具有同样的机制。

总之，本文初步考察到葛根散对急性酒精性肝损伤小鼠肝微粒体Ｐ４５０含量及ＣＹＰ２Ｅ１活性具有不同程度的干预作用，其具体机制及其对该方解酒防醉的意义尚待进一步探索。

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