CYP含量测定公式.docx

1、CYP含量测定公式CYP450含量测定公式万方数据第卷第期中国实验方剂学杂志年月，葛根散对急性酒精性肝损伤小鼠肝微粒体含量及活性的影响田维毅，王庆学，王文佳，杨柱（贵阳中医学院免疫教研室，贵阳；贵阳中医学院中医基础教研室，贵阳）摘要目的：考察经典解酒方葛根散对急性酒精性肝损伤小鼠肝微粒体细胞色素（）含量及细胞色素（）活性的影响。方法：实验小鼠分葛根散高、中、低剂量组、正常对照组和模型对照组，各给药组分别给予葛根散水煎剂（按生药量计，?“），对照组代以等体积蒸馏水，每天次，连续；每天给药后，模型对照组和各给药组以?“白酒，正常对照组代以等体积蒸馏水，以血清丙氨酸转氨酶（）、天冬氨酸转氨酶（）及肝

2、脏系数为参考指标，制备急性酒精性肝损伤小鼠模型；取小鼠肝组织检测葛根散对肝微粒体含量及活性的影响。结果：与正常对照组比较：模型对照组血清、水平及肝脏系数显着升高（），肝微粒体蛋白含量无明显变化，含量及活性显着提高（）。与模型对照组比较：葛根散各剂量组血清，水平及大剂量组肝脏系数呈明显降低（或），肝微粒体蛋白含量无明显变化，含量明显增多（）且有剂量差异性（），活性显着降低（）且有剂量差异性（）。结论：葛根散对急性酒精性肝损伤小鼠肝功能具有良性干预作用，能提高酒精性肝损伤小鼠肝微粒体含量和降低活性。关键词】葛根散；急性酒精性肝损伤；中图分类号文献标识码】文章编号】），收稿日期（）基金项目】贵州省科

3、技厅基金项目（黔科合字）；贵州省省长专向基金项目（黔科合专字白号）第一作者田维毅，教授，硕士生导师，从事中西医结合研究，：通讯作者杨柱，博士，教授，硕士生导师，从事中西医结合研究，：，白霜，金玲护肝片预防小鼠酒精性肝损伤作用的实精所致小鼠急性肝损伤的保护作用时珍国医国验研究中国实验方剂学杂志，（）：药，（）：，金凤影谷氨酰转肽酶的测定对酒精性肝炎的诊断刘建书，蔺小平，朱笛霓葛花饮料解酒作用的药效价值中国实用医药，（）：学实验陕西中医，（）：陈艳，吴铁，陈文双红苓肝宝对小鼠酒精性肝损害王春怡，陈艳芬，李卫民，等黄芪葛根汤对实验性糖的保护作用广东医学，（）：尿病及胰岛素抵抗的影响中国实验方剂学杂邸

4、琳，刘新宇，金向群，等酒肝清胶囊对实验性大鼠志，（）：酒精性脂肪肝的治疗作用中国实验方剂学杂陈东方，李立，王亚东，等解酒口服液对乙醇致急性志，（）：肝损伤的保护作用中国实验方剂学杂志，李海燕，李夏，金向群，等黄芩苷对大鼠慢性酒精性（）：肝损伤的影响中国实验方剂学杂志，张洪，宋娟，谭哗，等枳棋子乙酸乙酯提取物对大鼠（）：肝微粒体细胞色素的影响中国实验方剂黄俊杰，王彩冰，黄丽娟，等对慢性酒精中毒学杂志，（）：大鼠血清、活性的影响中国当代医药，责任编辑聂淑琴，（）：周添浓，刘丹丹，唐立海，等牛大力对四氯化碳及酒?万方数据第卷第期中国实验方剂学杂志年月，（，（），；，）：，（）：，?，?，；：，（尸）

5、，（），（），（），（）（）：，；细胞色素（，）是生特勒托利多上海公司），型超速低物体内参与物质代谢的主要酶系，广泛存在于肝、温离心机（美国贝克曼），型紫外一可见分光脑、肺、肾等多种组织细胞的线粒体、细胞核包膜及光度计（上海元析）。微粒体中。肝微粒体是在肝细胞内最主要药物与试剂实验方剂葛根散系金?张子和的分布场所。肝微粒体是一组混合功能儒门事亲解酒方，由甘草、葛根葛花、缩砂仁、贯氧化酶系，其主要成分之一（）众各等份组成，组方药材购自上海同仁堂大药房，经对乙醇等肝毒性物质具有特异性代谢作用，在酒精鉴定为正品，按原方比例制备水煎剂并调整（生药）性肝病的发病机制中起着至关重要的作用嵋。浓度为?“备用

6、；红星二锅头白酒为北京诱导产生的自由基不但氧化细胞膜的脂质红星股份有限公司产品（批号）丙氨酸转氨和蛋白，导致肝细胞结构与功能的损害旧。；还可以酶（）、天冬氨酸转氨酶（）检测试剂盒购自刺激肝星状细胞分泌胶原，参与肝纤维化过程。南京建成生物工程研究所，牛血清白蛋白购自德国前期研究显示：急性酒精中毒小鼠出现肝组织病变公司（含量），氨基呲啉购自北京化学试明显、肝功能损伤严重、肝细胞大量凋亡；葛根散等剂公司（批号），购自德国公解酒方对上述病理改变具有不同程度改善作用。为司（含量）。了深入探索解酒方葛根散的作用机制，本文以血清方法，谷丙转氨酶（）、谷草转氨酶（）水平及肝脏动物分组与处理实验动物分为正常对照

7、组、系数为参考指标，制备急性酒精性肝损伤小鼠模型，模型对照组、葛根散大、中、小剂量给药组，每组给予葛根散水煎剂干预，探索该方对实验小鼠肝只。根据药理实验动物给药折算方法，按成人（按微粒体含量及活性的影响。计算）每天常规用药折算实验用药量，葛材料根散大高、中、低剂量分别为生药，?动物清洁级昆明种小鼠，雄性，购，不同浓度水煎剂给药体积均为，每天自上海斯莱克实验动物有限责任公司许可证号次。正常对照组和模型对照组代以等量蒸馏水。每（沪）。天给药后，模型对照组和各给药组用红仪器型梅特勒托利多电子天平（梅星二锅头白酒，?，每天次，正常对照?田维毅，等：葛根散对急性酒精性肝损伤小鼠肝微粒体含量及活性的影响组

8、代以等量蒸馏水。所有动物常规饲养，连续末次。乙酸，?。离心后，取上清，后杀鼠取材检测相关指标。后开始禁食（不禁水）；后每只小鼠加入试剂，水浴后，紫外分光光度计波长处扫描。以系列浓度的甲醛为横坐标、值为纵坐标，求得甲醛线性回归方程。分别吸取待测微粒体，缓冲液，小鼠血清，水平及肝脏系数的检测末次经眼眶采血，低温离心制备血清，按试剂盒要求检测，水平；采血后，迅速颈椎脱臼处死，取出肝?“氨基比林，水浴后脏，剪去表面韧带和结缔组织，用蔗糖缓冲液（?加入?，水浴?。蔗糖）（）洗。其余步骤同甲醛标准曲线制备，依据甲醛标准万方数据净表面血污，用滤纸吸去水滴，称肝重以计算肝脏曲线计算酶活性，以，?。蛋白表示酶系

9、数。活性。小鼠肝微粒体的含量检测参照文数据统计所有数据输入计算机用献方法。上述肝脏称重后，剪碎，再用一蔗糖统计软件进行统计，结果以互表示，组间采用检缓冲液洗次，充分去除肝脏血液。按（一验。有统计学意义。蔗糖缓冲液缓）?一（肝脏组织）比例加入缓冲液，结果置冰浴中制备组织匀浆。然后以，离对急性酒精性肝损伤小鼠血清，水平心，再取上清以，离心及肝脏系数的影响与正常对照组比较，模型对照，弃上清，淡红色沉淀物即为肝微粒体。将肝微组血清，水平及肝脏系数明显升高（，粒体沉淀取出后用蔗糖缓冲液（?。）；与模型对照组比较，葛根散各剂量组血清?。蔗糖）（）悬浮，经超声细胞，水平及大剂量组肝脏系数有不同程度降粉碎仪混

10、匀，一保存待测。将待测肝微粒体样低（或）；与葛根散大剂量组比较，本稀释倍，采用牛血清白蛋白制备标准曲线，按葛根散小剂量组血清，水平明显较高（法检测肝微粒体蛋白浓度。吸取一蔗糖或），肝脏系数无差异显着。见表。缓冲液，加入稀释为?。的待测微粒体对急性酒精性肝损伤小鼠肝微粒体悬液及连二亚硫酸钠，立即混含量及活性的影响与正常对照组比较：匀。等量分装到个比色杯中，分别作为对照和样模型对照组肝微粒体含量及活性本，于样本池中比色杯充一氧化碳，紫外分光光显着提高（），但微粒体蛋白含量变化不明度计向扫描并计算含量。显；与模型对照组比较：葛根散各剂量组肝微粒体计算公式如下（?“）。含量显着提高（或），蛋白（一）稀

11、活性显着降低（），但微粒体蛋白含释后蛋白浓度（?。）量变化不明显；与葛根散大剂量组比较：葛根散小剂小鼠肝微粒体活性检测参照文献量组肝微粒体含量显着降低（），方法。以，活性显着提高（），但微粒体蛋白含?。系列浓度甲醛各，加入三氯量变化不明显。见表。表葛根散对酒伤小鼠血清。，水平及肝脏系数的影响（；）注：与模型对照组比较，；与葛根散大剂量组比较，（表同）。?第卷第期年月中国实验方剂学杂志，表葛根散对急性酒精性肝损伤小鼠肝微粒体含量及￥活性的影响（；）万方数据组别剂量肝微粒体蛋白含量?一正常对照一模型对照一葛根散讨论是一种多功能氧化还原酶，因其一氧化碳结合物的吸收光谱高峰在处，故叫。肝微粒体是肝药酶

12、中最重要的酶系，参与各种外源物（如药物、化学毒物、致癌物等）和内源物（如类固醇激素、维生素、胆酸等）在体内的代谢过程。是的一个重要亚型，主要在肝脏表达。一些疏水性的外来物质经转化后形成极性更大的物质排出体外，而有时可能被转化为细胞毒、致癌、致突变作用更强的物质，因此其生物学效应具有双面性。乙醇是典型的诱导剂，对诱导可增加乙醛的产生，同时形成蛋白复合物、产生活性氧、导致修复功能降低、减少氧的利用、耗竭谷胱甘肽、介导自由基生成、脂质过氧化，从而导致毒性发生。体内外研究证实，在酒精性肝病的发病机制中主要参与脂质过氧化反应，与氧自由基和羟自由基的生成有关。越来越多的研究表明，与各种肝病的关系密切。因此

13、，探索解酒方剂对肝微粒体含量及活性的影响，对研究其解酒机制和防治酒精性肝损害具有重要意义。表实验结果显示：白酒导致实验小鼠血清、水平及肝脏系数显着改变，提示本实验中实验小鼠肝损伤明显，作为急性酒精性肝损伤动物模型可靠；葛根散一定剂量下能不同程度地缓解酒伤小鼠血清、水平及肝脏系数的改变幅度，且具有剂量差异性，这可能是该方防治酒精性肝损害的部分机制，这与我们前期研究结果一致。表实验结果显示：急性酒精性肝损伤小鼠肝微粒体含量显着升高（），这可能与乙醇诱导其主要亚型大量表达有关；葛根散各剂量组酒伤小鼠肝微粒体含量较模型对照组有进一步升高（或），这可能是因为该方具有诱导肝微粒体中包括在内的某些酶类表达的

14、作用，也可能与肝微粒体酶系参与葛根散化学物质的转化代谢有关；葛根散各剂量组酒伤小鼠肝微粒体?细胞色素含量氨基比林脱甲基酶?“斗卜?。”）土），”，）活性显着降低（），这可能与葛根散含有抑制物有关，或者是因为该方通过降低血乙醇水平而减弱乙醇对的诱导作用；模型对照组肝细胞微粒体蛋白较正常对照组无明显变化，提示乙醇对肝微粒体蛋白总量的影响不大；葛根散各剂量组小鼠肝微粒体蛋白含量较正常对照组明显增多（或），这可能与肝微粒体含量增多的现象具有同样的机制。总之，本文初步考察到葛根散对急性酒精性肝损伤小鼠肝微粒体含量及活性具有不同程度的干预作用，其具体机制及其对该方解酒防醉的意义尚待进一步探索。参考文献】：，“：，：，：，髓，