常用pGEX载体图谱.docx

常用pGEX载体图谱.docx

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常用pGEX载体图谱

Rosetta系列的表达菌株可以提供T7RNA聚合酶，它能表达PET系列载体上的外源基因。

。

。

pGEX系列载体上的外源基因不需要T7RNA聚合酶，普通的大肠杆菌经IPTG诱导即可表达

Tac启动子是一组由Lac和trp启动子人工构建的杂合启动子，受Lac阻遏蛋白的负调节，它的启动能力比Lac和trp都强。

其中Tac1是由Trp启动子的－35区加上一个合成的46bpDNA片段（包括Pribnow盒）和Lac操纵基因构成，Tac12是由Trp的启动子-35区和Lac启动子的-10区，加上Lac操纵子中的操纵基因部分和SD序列融合而成

蛋白标签：

Amyctagisapolypeptide proteintag derivedfromthe c-myc geneproductthatcanbeaddedtoaproteinusing recombinantDNA technology.Itcanbeusedfor affinitychromatography,thenusedtoseparaterecombinant,overexpressedproteinfromwildtypeproteinexpressedbythehostorganism.Itcanalsobeusedintheisolationofproteincomplexeswithmultiplesubunits.

Amyctagcanbeusedinmanydifferentassaysthatrequirerecognitionbyan antibody.Ifthereisnoantibodyagainstthestudiedprotein,addingamyc-tagallowsonetofollowtheproteinwithanantibodyagainsttheMycepitope.Examplesarecellularlocalizationstudiesbyimmunofluorescenceordetectionby Westernblotting.

Thepeptidesequenceofthemyc-tagis（in1-and3-lettercodes,respectively）:

N-EQKLISEEDL-C,N-Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu-C,whereNstandsfor Amino-terminus andCstandsfor Carboxyterminus.Thetagisapproximately1202 Daltons inatomicmassandhas10aminoacids.

Itcanbefusedtothe C-terminus andthe N-terminus ofaprotein.Itisadvisablenottofusethetagdirectlybehindthesignalpeptideofasecretoryprotein,sinceitcaninterferewithtranslocationintothe secretorypathway.

Amonoclonalantibodyagainstthemyc epitope,named9E10,isavailablefromthenon-commercial DevelopmentalStudiesHybridomaBank

pGEX4T1载体基本信息

出品公司:

GE

别名:

pGEX-4T-1,pGEX4T1,pGEX4T1

质粒类型:

大肠杆菌蛋白表达载体

表达水平:

高拷贝

启动子:

Tac

克隆方法:

多克隆位点，限制性内切酶

载体大小:

4969bp

5'测序引物及序列:

pGEX5':

 GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG

3'测序引物及序列:

pGEX3':

CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG

载体标签:

N-GST

载体抗性:

Ampicillin氨苄

备注:

复制子是pMB1

产品目录号:

27-4580-01

稳定性:

瞬时表达Transient

组成型:

诱导表达

病毒/非病毒:

非病毒

pGEX4T1载体质粒图谱和多克隆位点信息

原核生物DNA复制起始点，是DNA链上独特的具有起始DNA复制功能的碱基序列。

大肠杆菌的复制起点包括OriC和OriH

Thrombin凝血酶

pGEX4T1载体简介

pGEX4T1载体序列

LOCUSpGEX-4T-14969bpDNAcircularSYN

DEFINITIONpGEX-4T-1

ACCESSION

KEYWORDS

SOURCE

ORGANISMothersequences;artificialsequences;vectors.

COMMENT    ThisfileiscreatedbyVectorNTI

COMMENT    VNTAUTHORNAME||

FEATURESLocation/Qualifiers

source1..4969

/organism="pGEX-4T-1"

/mol_type="otherDNA"

promoter184..212

/label="tac_promoter"

misc_feature224..246

/label="M13_pUC_rev_primer"

gene258..977

/label="GST（variant）"

/gene="GST（variant）"

CDS258..977

/label="ORFframe3"

misc_featurecomplement（1019..1041）

/label="pGEX_3_primer"

promoter1307..1335

/label="AmpR_promoter"

gene1377..2237

/label="Ampicillin"

/gene="Ampicillin"

CDS1377..2237

/label="ORFframe3"

rep_origin2392..3011

/label="pBR322_origin"

misc_feature3309..4400

/label="lacI"

CDS3441..4400

/label="ORFframe3"

promoter4449..4478

/label="lac_promoter"

misc_feature4492..4514

/label="M13_pUC_rev_primer"

promoter4513..4531

/label="M13_reverse_primer"

CDS4523..81

/label="ORFframe2"

misc_feature4540..4695

/label="lacZ_a"

promotercomplement（4543..4559）

/label="M13_forward20_primer"

misc_featurecomplement（4552..4574）

/label="M13_pUC_fwd_primer"

pGEX4T2载体基本信息

出品公司:

GE

别名:

pGEX-4T-2,pGEX4T2,pGEX4T2

质粒类型:

大肠杆菌蛋白表达载体

表达水平:

高拷贝

启动子:

Tac

克隆方法:

多克隆位点，限制性内切酶

载体大小:

4970bp

5'测序引物及序列:

pGEX5':

 GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG

3'测序引物及序列:

pGEX3':

CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG

载体标签:

N-GST

载体抗性:

Ampicillin氨苄

备注:

复制子是pMB1

产品目录号:

27-4581-01

稳定性:

瞬时表达Transient

组成型:

诱导表达

病毒/非病毒:

非病毒

pGEX4T2载体质粒图谱和多克隆位点信息

pGEX4T2载体简介

pGEX4T2载体序列

LOCUSpGEX-4T-24970bpDNAcircularSYN

DEFINITIONpGEX-4T-2

ACCESSION

KEYWORDS

SOURCE

ORGANISMothersequences;artificialsequences;vectors.

COMMENT    ThisfileiscreatedbyVectorNTI

COMMENT    VNTAUTHORNAME||

FEATURESLocation/Qualifiers

source1..4970

/organism="pGEX-4T-2"

/mol_type="otherDNA"

promoter184..212

/label="tac_promoter"

misc_feature224..246

/label="M13_pUC_rev_primer"

gene258..978

/label="GST（variant）"

/gene="GST（variant）"

CDS258..974

/label="ORFframe3"

misc_featurecomplement（1020..1042）

/label="pGEX_3_primer"

promoter1308..1336

/label="AmpR_promoter"

gene1378..2238

/label="Ampicillin"

/gene="Ampicillin"

CDS1378..2238

/label="ORFframe1"

rep_origin2393..3012

/label="pBR322_origin"

misc_feature3310..4401

/label="lacI"

CDS3442..4401

/label="ORFframe1"

promoter4450..4479

/label="lac_promoter"

misc_feature4493..4515

/label="M13_pUC_rev_primer"

promoter4514..4532

/label="M13_reverse_primer"

CDS4524..81

/label="ORFframe3"

misc_feature4541..4696

/label="lacZ_a"