分子生物学实验室常用试剂的配制方法.docx

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分子生物学实验室常用试剂的配制方法分子生物学实验室常用试剂的配制方法一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）:

溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20。

1mol/L精胺（Spermine）：

溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20。

10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）：

将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白（BSA）：

加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：

在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20。

或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：

溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：

溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：

溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/LEDTA:

配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/LHEPES：

将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/LHCl：

加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/mlIPGT：

溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20。

1mol/LMgCl2:

溶解20.3gMgCl26H2O于足量的水中，定容到100ml。

100mmol/LPMSF：

溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。

分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20。

20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）：

将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。

10mg/mlRnase（无DNase）（DNasefreeRNase）：

溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH5.0）。

溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。

用1mol/L的TrisHCl调pH至7.5，于-20贮存。

（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl）：

溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。

10N氢氧化钠（NaOH）：

溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10SDS（十二烷基硫酸钠）：

称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

用水定容至1L。

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：

溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。

100三氯乙酸（TCA）:

在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

（稀释液应在临用前配制）2.5Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：

溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20。

100Denhardt试剂（Denhardtsregent）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll，400型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA（组分V）水2g2g2g加水至总体积为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。

过滤除菌及杂质，分装成小份于-20贮存。

10标准DNA连接酶缓冲液（standardDNAligasebuffer）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/LTris-HCl100mmol/LMgCl2100mmol/LDTT2mmol/LATP5mmol/L盐酸亚精胺（可选）0.5mg/mlBSA（组分V）（可选）水5ml1mol/L贮液1ml1mol/L贮液1ml1mol/L贮液200ul100mmol/L贮液50ul1mmol/L贮液0.5ml10mg/mL贮液2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20。

100mmol/LdNTP溶液（dNTPsolutions）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80可贮存至少6个月。

10mmol/LdNTP混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/LdATP10mmol/LdCTP10mmol/LdGTP10mmol/LdTTP水2ul100mmol/LdATP贮液2ul100mmol/LdCTP贮液2ul100mmol/LdGTP贮液2ul100mmol/LdTTP贮液12ul20PEG8000/2.5MNaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20聚乙二醇2.5mol/L氯化钠水20g50ml5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。

20SSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L柠檬酸三钠（二水）3mol/L氯化钠水88.2g175.3g补足1L溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加100ulDEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1。

在37温浴至少12h，然后在15psi条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。

DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionizedformamide）直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。

经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80贮存（防止氧化）。

磷酸缓冲液（phosphatebuffer）按照下表所给定的体积，混合1mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。

配制1mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液：

溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:

溶解142g于足量水中使终体积为1L。

1mol/L磷酸二氢钠（ml）1mol/L磷酸氢二钠（ml）最终pH值8778508157757356856255655104503903302801231501852252653153754354905506106707206.06.16.26.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE（用于悬浮和贮存DNA）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/LTrisHCl1mmol/LEDTA水1ml1mol/LTris-HCl（pH7.4-8.0，25）200ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）98.8mlTris缓冲液（Tris-HClbuffer）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。

浓盐酸的体积（ml）pH8.6142128.53846566671.3769.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50Tris-乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/LTris碱1mol/L乙酸100mmol/LEDTA水242g57.1ml的冰乙酸（17.4mol/L）200ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）补足1L5Tris-硼酸（TBE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445mmol/LTris碱445mmol/L硼酸盐10mmol/LEDTA水54g27.5g硼酸20ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）补足1L染料1溴酚蓝（bromophenolblue）加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1二甲苯青FF（xylenecyanoleFF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭（ethidiumbromide）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。

用铝箔包裹装液管，于4贮存。

凝胶上样液（gelloadingsolutions）6碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3N氢氧化钠6mmol/LEDTA18聚蔗糖（400型）0.15溴甲酚绿0.25二甲苯青FF水300ul10N氢氧化钠120ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）1.8g15mg25mg补足到10ml6聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青FF5mmol/LEDTA15聚蔗糖（400型）水1.5ml1溴酚蓝1.5ml1二甲苯青FF100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）1.5g补足到10ml6溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25溴酚蓝0.25二甲苯青FF15聚蔗糖（400型）水2.5ml1溴酚蓝2.5ml1二甲苯青FF1.5g补足到10ml6甘油凝胶上样液（4贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青FF5mmol/LEDTA50甘油水1.5ml1溴酚蓝1.5ml1二甲苯青FF100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）3ml3.9ml6蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青FF5mmol/LEDTA40聚蔗糖水1.5ml1溴酚蓝1.5ml1二甲苯青FF100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）4g补足到10ml10十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.2溴酚蓝0.2二甲苯青FF200mmol/LEDTA0.1SDS50甘油水20mg20mg4ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）100ul10SDS5ml补足到10ml三.常用培养基LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1NNaOH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：

琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。

分成100ml的小份，高压灭菌。

培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。

TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。

冷却到60，再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。

高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。

2YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1NNaOH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：

琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水补足体积为1L后，高压灭菌。

建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。

为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

四.常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20贮存。

常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20贮存。

常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20贮存。

常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20贮存。

常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20贮存。

常以12.5ug/ml25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20贮存。

常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

萘啶酮酸（nalidixicacid）（5mg/ml）溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20贮存。

常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

四环素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。

分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20贮存。

常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。