黄曲霉限量测定方法验证方案HPLC资料.docx

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黄曲霉限量测定方法验证方案HPLC资料

含量测定方法验证

文件编码：

MSTM600110

广东和翔制药有限公司

2017年3月

含量测定方法验证目录

验证方案

验证报告

验证证书

黄曲霉毒素含量测定方法验证方案起草、审核、批准表

起草部门

起草人

签名

日期

质管部

年月日

审核部门

审核人

签名

日期

质管部

年月日

批准部门

批准人

签名

日期

质管部

年月日

验

证

方

案

验证方案目录

1验证原则和目的

2范围

3验证依据

4验证组织及职责

5验证时间

6验证前确认

6.1实施人员确认

6.2验证所需文件确认

6.3仪器设备确认

6.4色谱条件确认

6.5试剂试药确认

6.6溶液制备方法

7验证内容及过程

7.1准确度

7.2重复性

8验证中偏差/变更处理

9培训

10验证报告的书写

1验证原则和目的

建立黄曲霉毒素含量限量测定的检验方法验证，在实验过程中严格按照标准操作，确保新开发的检验方法、转移应用的检验方法有效实施，以验证该检验方法是否适用于药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素含量测定。

2范围

本验证方案适用于采用高效液相色谱仪应用光化学衍生法对黄曲霉毒素标样进行测定的检验方法验证。

3验证依据

《中国药典》2015版四部通则中黄曲霉毒素测定法，中药质量标准分析方法验证指导原则。

《药品生产质量管理规范（2010年修订）》

4验证组织及职责

4.1验证小组人员

姓　名

部　门

职务

验证分工

质管部

组长

负责验证各项工作的安排。

负责监督验证的实施过程。

负责验证方案及验证报告的批准。

质管部

组员

负责验证方案及验证报告的审核。

负责对验证中出现的问题提出指导意见。

质管部

组员

负责检验方法的验证方案起草与实施，对所测数据准确性负责，负责起草验证报告。

质管部

组员

负责汇总数据、整理验证报告。

4.2验证小组职责

4.2.1验证方案和报告的起草、审核、批准

该验证方案由检验人员负责起草验证方案，验证方案经质管部等部门主管领导进行审核，最终由质量经理批准。

验证过程实施完成后，验证报告由验证方案起草人负责汇总，并经质管部等部门主管领导进行审核，最终由质量经理批准。

4.2.2验证方案的培训

验证方案起草人在验证方案经质量经理批准后及验证方案实施前，对本次验证相关人员组织培训工作，由质管部主管领导负责该次验证方案的培训工作，并将该次的培训记录交至人力资源部归档。

4.2.3确认的组织实施和确认过程中的变更和偏差

该次验证工作组织实施由质管部主管领导负责，质管部负责对验证过程中的变更和偏差进行确认。

5验证时间

2012年7月

6验证前确认

6.1实施人员确认

姓　名

部　门

要求

确认结果

质管部

需经过相关内容的培训。

是□否□

质管部

需经过相关内容的培训。

是□否□

质管部

经过充分的培训，熟悉高效液相色谱仪的使用方法及分析方法的操作步骤。

是□否□

质管部

经过充分的培训，熟悉高效液相色谱仪的使用方法及分析方法的操作步骤。

是□否□

6.2验证所需文件资料、应齐全。

相关的文件草案应具备。

文件名称

文件编码

存放地点

确认结果

高效液相色谱仪、柱后衍生仪操作及养护规程

TSOP206300

质管中心

有□无□

6.3仪器设备确认

仪器名称

型号

要求

确认结果

高效液相色谱仪

LC1260

已经过校验并在有效期内

是□否□

电子分析天平

已经过校验并在有效期内

是□否□

超声波清洗机

已经过校验并在有效期内

是□否□

普瑞邦柱后衍生器

已经过校验并在有效期内

是□否□

玻璃仪器

需彻底清洗并经检定，一般玻璃仪器要保证洁净。

是□否□

TGL-15B高速台式离心机

已经过校验并在有效期内

是□否□

泵流操作架、双孔超静音气泵、宁波新芝高速分散器

已经过校验并在有效期内

是□否□

6.4色谱条件确认

项目

要求

确认结果

色谱柱

4.6×150mmsymmetry®C18柱，5μm

是□否□

PriboFast®黄曲霉素总量免疫亲合柱

是否在有效期内

是□否□

检测器

荧光检测器

是□否□

检测波长

激发波长=360nm（或365nm），发射波长λex=450nm。

是□否□

进样量

5ul、l0ul、l5ul、20ul、25ul

是□否□

流速

0.8ml/min

是□否□

柱温

30℃

是□否□

流动相

甲醇-乙腈-水（60：

:

30：

10）

是□否□

6.5试剂试药确认

内容

要求

确认结果

试剂试药

乙腈：

色谱纯

甲醇：

色谱纯

水：

1级纯化水

是□否□

对照品

黄曲霉毒素（G1、G2、B1、B2）（中国药品生物制品检定所）

是□否□

供试品

根据药典制备的黄曲霉毒素标样

是□否□

6.5溶液制备方法

6.5.1对照品溶液制备方法

精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.Oμg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为贮备溶液。

精密量取贮备溶液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。

7验证内容及过程

7.1准确度

7.1.1验证合格标准

校正曲线线性方程至少达到0.999%

7.1.2操作步骤

7.1.2.1进对照品溶液五次，记录色谱图，计算相关系数。

表1黄曲霉毒素G1进样情况

进样次数

1

2

3

4

5

保留时间

进样体积

进样量

峰面积

表2黄曲霉毒素G2进样情况

进样次数

1

2

3

4

5

保留时间

进样体积

进样量

峰面积

表3黄曲霉毒素B1进样情况

进样次数

1

2

3

4

5

保留时间

进样体积

进样量

峰面积

表4黄曲霉毒素B2进样情况

进样次数

1

2

3

4

5

保留时间

进样体积

进样量

峰面积

7.1.3验证结果与评价

黄曲霉毒素G2的线性方程为，相关系数为，截距为，黄曲霉毒素G1的线性方程为，相关系数为，截距为，黄曲霉毒素B2的线性方程为，相关系数为，截距为，黄曲霉毒素B1的线性方程为，相关系数为，截距为，表明它的进样量与峰面积均呈线性关系。

方法的线性和范围符合验证标准。

7.2重复性

7.2.1验证合格标准

7.2.1.1以主峰计算色谱柱理论塔板数不低于1500。

7.2.1.2主峰rsd不大于2.0%。

7.2.1.3主峰与最近杂质峰分离度不低于1.5。

7.2.2操作步骤

由同一个分析人员，在相同的条件下，对同一样品进行多次试验，按照规定的色谱条件进行测定，用5个测定结果进行评价。

7.2.3验证结果及评价

供试品峰拖尾因子，理论塔板数，各个组分峰之间的分离度均大于1.5，重复进样的保留时间RSD为。

方法的系统适用性试验符合标准。

黄曲霉毒素G2

测定次数

1

2

3

4

5

保留时间

平均值

RSD%

理论塔板数

平均值

RSD%

分离度

平均值

RSD%

黄曲霉毒素G1

测定次数

1

2

3

4

5

保留时间

平均值

RSD%

理论塔板数

平均值

RSD%

分离度

平均值

RSD%

黄曲霉毒素B2

测定次数

1

2

3

4

5

保留时间

平均值

RSD%

理论塔板数

平均值

RSD%

分离度

平均值

RSD%

黄曲霉毒素B1

测定次数

1

2

3

4

5

保留时间

平均值

RSD%

理论塔板数

平均值

RSD%

分离度

平均值

RSD%

8验证中偏差/变更处理

验证过程中如果出现偏差和变更，应立即通知验证小组并对偏差和变更进行详细记录，分析偏差产生的根本原因、进行影响分析并提出解决方法。

所有偏差和变更得到有效处理后，并且已被质管部批准，验证方可进入下一步骤。

原始的偏差处理处理单和变更处理单经过批准后必须附在最终的验证报告中。

9培训

验证方案起草人有责任在验证方案批准后对本次验证相关人员进行培训。

该培训记录连同在验证中完成的其他相关培训记录一起交给人力资源部归档。

10验证过程及验证报告的书写

验证结束后，根据试验数据资料进行综合分析，对检验方法作出正确的评价、说明及结论，并写出验证报告，确定合理的验证周期。