最新基因工程习题.docx

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最新基因工程习题

基因工程习题

第二章习题

一、       单选题

1. 在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（   B   ）

A ． I 类限制酶    B. II 类限制酶    C. III 类限制酶    D. 核酸内切酶  

    E.  RNAase

2. 下列关于同裂酶的叙述错误的是 （   B  ）

A.  是从不同菌种分离到的不同的酶 , 也称异源同工酶。

B.  它们的识别序列完全相同。

C.  它们的切割方式可以相同，也可以不同。

D.  有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。

E.  两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。

3.  多数限制酶消化 DNA 的最佳温度是（   A   ）

   A. 37 ℃     B.30 ℃    C.25 ℃    D.16 ℃     E.33 ℃

4.  下列关于限制酶的叙述错误的是 （   B   ）

A.     I 类限制酶反应需要  Mg2+ 、 ATP 和 S- 腺苷蛋氨酸。

B.     II 类限制酶反应需要 Mg2+ 、 ATP 。

C.     III 类限制酶反应需要 Mg2+ 、 ATP ， S- 腺苷蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。

D.     I 、 III 类限制酶对 DNA 有切割和甲基化活性， II 类限制酶对 DNA 只有切割活性而无甲基化活性。

E.      II 类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。

5.  如果一个限制酶识别长度为 6bp , 则其在 DNA 上识别 6bp 的切割概率为 （  D  ）

  A. 1/44   B. 1/66    C. 1/64    D.1/46   E. 1/106

6.  多数 II 类限制酶反应最适 PH 是  （   C  ）

  A. PH:

2-4   B. PH:

4-6  C. PH:

6-8  D. PH:

8-10  E. PH:

4-10

7.  下列关于限制酶反应的说法错误的是  （  D   ）

A.      限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。

B.      许多限制酶对线性 DNA 和超螺旋 DNA 底物的切割活性是有明显差异的。

C.      有些限制酶对同一 DNA 底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。

D.      限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。

E.      BSA 对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的 BSA 。

8.  II 类限制酶反应中必须的阳离子是（   C   ）

  A. Na +   B. Ca2+   C. Mg2+   D. Zn2+   E. Mn2+

9.  RFLP 形成的原因是    （    A    ）

A.      由于遗传变异造成同源染色体中碱基的随机变化。

B.      使用不同的限制性内切酶进行切割。

C.      杂交时使用不同的探针。

D.      每种染色体存在两条。

E.       提取不同的染色体 DNA 酶切。

10.   下列关于限制酶命名的表示方法，正确的是（    E   ）

  A. Sau.3A I   B. B.amH I   C. pst I   D.  Ecor I   E. Hind III

11.   需进行 DNA 部分酶切时，控制下列哪种条件最合适（    D    ）

  A.  反应时间    B.  反应体积   C. PH   D.  限制酶量    E. 反应温度

12.   下列酶在反应中不需要 ATP 的是 （   D   ）

  A. E coK    B. T4DNA 连接酶   C.  BamH I   D. EcoB   E.  DNA pol I

13.   限制性内切酶可特异性识别   （   B  ）

  A.  双链 DNA 的特定碱基对          B.  双链 DNA 的特定碱基序列

  C.  单链 RNA 的特定碱基序列        D.  单链 DNA 的特定碱基序列

E   双链 RNA 的特定碱基对

14.   下列与 RFLP 相关的一条是 （   D   ）

A.      不同限制酶在单个染色体 DNA 上的限制性图谱。

B.      两种物种个体间的限制性图谱。

C.      同一个体等位基因的限制性图谱。

D.      同一物种不同个体的限制性图谱。

E.       非同源染色体用同种限制酶切形成的限制酶图谱。

15 ．   限制酶的星号活性是指在非正常条件下，限制酶（   A    ）

A.      识别和切割序列发生变化。

 B.      切割活性大大提高。

 C.      识别和切割序列与原来完全不同。

 D.     可以任意切割 DNA 。

 E.       只能部分切割 DNA 。

二、多选题

1.   下列因素中影响限制酶切割的有 （ A,B,C,D,E）

  A. EDTA 浓度      B.  甘油浓度     C. DNA 纯度       D.  酶的自身活性    E.  盐浓度

2.   限制酶反应中出现星活性的可能原因是（ A  B  D  E ）

  A ．酶浓度太高   B  低盐   C  盐浓度过高   D  高 PH  E  甘油浓度 >5% （ V/V ）

3 ．   限制酶切割后的 DNA 电泳得到的电泳条带有些扩散，可能原因是（ B ， C ， D ， E ）

  A ．酶失活    B   有蛋白质与 DNA 结合    C   酶切条件不合适

  D   有外切核酸酶污染     E   星号活性

4 ．   下列有关回文序列的描述正确的是（ A ， B ， C ）

  A ．   是 II 类限制酶的识别序列    B   是某些蛋白的识别序列   C   是基因的旁侧序列    D   是高度重复序列    E   是卫星序列

5 ．   下列有关回文序列的一般特征正确的是（ B ， C ， D ， E ）

  A ．   可增强基因表达    B   有对称轴    C   是自我互补的序列

  D ．   两条链从 5 ‘     3 ‘方向的序列一致    E   是 II 类限制酶的识别序列

6 ．   关于 II 类限制酶说法正确的是（ B ， D ）

  A ．   具内切核酸酶和甲基化酶活性

  B ．   仅有内切核酸酶活性

  C ．   只识别非甲基化的 DNA 序列

  D ．  II 类限制酶反应条件只需要 Mg2+

  E ．  II 类限制酶反应需要 Mg2+,ATP

7 ．通过限制性片段分析，可对等位基因进行精确比较是因为（ B ， C ）

  A ．   限制酶只切割两个变异等位基因中的一个

  B ．   限制酶位点可作为遗传标记

  C ．   它不依赖变异的等位基因的产物的功能

  D ．   不同组织等位基因的核苷酸序列存在差异

  E ．   同一组织等位基因核苷酸序列不会完全相同

8.  下列关于 II 类限制酶的叙述正确的是（ B ， C ， D ， E ）

  A ．   它既有内切酶的活性，也有外切酶活性

  B ．   在特异位点对 DNA 进行切割

  C ．   同一限制酶切割双链 DNA 时产生相同的末端序列

  D ．   有些限制酶切割双链 DNA 产生粘末端

  E ．   有些限制酶切割双链 DNA 产生平末端

9 ．   限制酶反应结果若显示没有切割，可能原因是（ A ， B ， C ， D ， E ）

  A ．   限制酶无活性    B   存在抑制剂如 SDS ， EDTA   C  DNA 不纯

  D ．   缓冲液组成不合适     E  DNA 甲基化

10 ．下列关于限制酶的叙述正确的是（ B ， C ， D ）

  A ．   在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他限制酶就不能切割了。

  B ．   限制酶在 DNA 中的识别 / 切割位点的二、三级结构影响酶切效率。

  C ．   如果限制酶的识别位点位于 DNA 分子末端，那么接近末端的程度也影响切割。

  D ．   已知某限制酶在一环状 DNA 上有 3 个切点，因此该酶切割这一环状 DNA ，可得到 3 个片段。

  E ．   能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中没有该酶识别的序列。

11 ．酶在储存过程中迅速失活，可能原因是（ A ， B ， C ， E ）

  A ．   储存温度不合适    B   稀释后储存    C   储存缓冲液不合适

  D ．   分装后储存     E   储存缓冲液中蛋白浓度低

12 ．限制酶切反应结果显示为部分切割，可能原因是（ A ， B ， C ， D ， E ）

  A ．   限制酶失活   B   有抑制剂如 SDS ， EDTA 等存在    C   反应条件不合适

  D  DNA 不纯     E  DNA 结构（线形或超螺旋）的影响

13 ．如果用限制酶切割 DNA 后得到的片段比预期的多，可能原因是（ B ， C ， E ）

  A ．   限制酶失活    B   限制酶的星号活性    C   有其他限制酶污染

  D   有抑制剂存在      E   测试 DNA 中有其他 DNA 污染

14 ．限制酶切割后的产物连接反应效果差，可能原因是（ A ， B ， C ， E ）

  A ．限制酶去除不完全    B   平端连接    C   核酸外切酶污染

  D ．连接反应温度低于 16 ℃

  E ．从限制酶消化中带来太高浓度的磷酸盐或其他盐类

15 ．下列限制酶属同裂酶的是（ A ， B ， D ， E ）

  A ． BamHI  G ↓ GATCC                Sau3AI   ↓ GATC

             CCTAG ↑ G                         CTAG ↑

B ．  Sal I     G ↓ TCGAC              Xho I   C ↓ TCGAG

             CAGCT ↓ G                     GAGCT ↓ C

C ．  BamH I  G ↓ GATCC              EcoR I  G ↓ AATTC

             CCTAG ↓ G                     CTTAA ↓ G

D.   Hpa II   G ↓ CGC                Msp I   C ↓ CGG

             CGC ↓ G                        GGC ↓ C

E.    Xba I   T ↓ CTAGA              Nhe I   G ↓ CTAGC

             AGATC ↓ T                      CGATC ↓ G

三．填空题

1 ．限制酶是一类专门切割  DNA  的酶，它能特异性识别切割   双   链（单、双） DNA 。

2 ． II 型限制酶识别位点一般长度为  4~6  个核苷酸对。

3 ．个体之间 DNA 限制酶片段长度存在差异称   限制性片段长度多态性（ RFLP ）。

4 ．限制酶命名采用 Smith 和 A thens 提议的方案，第一个字母大写取自来源细菌的   属名   ；第二、三个字母取自来源细菌的   种名；第四个字母（如果有）取自来源菌的   株系。

5 ．需要部分酶切时可采取的方法有（ 1 ）减少酶的用量   （ 2 ）缩短反应时间   （ 3 ）增大反应体积。

6 ．限制酶识别序列为 n 个碱基，则其切割频率的理论值应是  4n 。

7 ．限制性内切酶通常保存在  50%  浓度的甘油溶液中。

8 ．甘油浓度是导致一些酶的星活性的原因之一，在酶切时反应体系中的甘油浓度应控制在  5%  以下。

9 ．限制与修饰是宿主的一种保护体系，它是通过对外源 DNA 的   限制   和对自身 DNA 的   修饰   来实现的。

10 ． II 型限制酶既具有   识别位点   的专一性，也具有   切割位点   的专一性。

它作用时需要  Mg2+  离子作辅助因子。

四．简答题

1 ．在酶切缓冲液中加入牛血清白蛋白（ BSA ）的目的与机理是什么？

答：

目的是保护酶的活性；机理是通过提高反应体系中蛋白质的浓度，防止内切酶失活。

2 ．如果用 EcoR I 酶切 DNA 时出现星活性，试分析原因？

答：

主要原因有：

酶浓度太高；高 PH ；低盐；含 Mn2+ 、 Cu2+ 等非 Mg2+ 金属离子；甘油浓度高于 5% ；存在某些有机溶剂。

3 ．下列序列中哪些可能是 II 类限制酶的识别序列？

 ATATCG   CCCGGG  GATATC   AGCCGA    GAGTC

答：

 CCCGGG   GATATC   GAGTC

4 ．用 Klenow 酶可将 5 ‘粘末端填补成平末端，而导致某些限制位点消失，下列酶切后用 klenow 处理再连接不会丢失识别位点的是哪些？

XmaI  C ↓ CCGGG        BssH II   G ↓ CGCGC    PstI    CTGCA ↓ G

HhaI  GCG ↓ C                      HpaII   G ↓ CGC

答：

 BssH II,  HpaII

5 ．当两种限制酶反应条件不同时，若要用双酶切，应采取什么措施？

为什么？

答：

要避免星活性及部分酶切。

（ 1 ）先用低盐缓冲液中活性最高的酶切，再补盐和第二种酶；（ 2 ）用一种酶消化后，以酚：

氯仿：

异戊醇抽提，再经乙醇沉淀，将 DNA 重新溶解与适合第二种酶的缓冲液，加第二种酶消化；（ 3 ）先低温酶，后高温酶；（ 4 ）使用通用缓冲液。

6 ．试计算下列三种限制酶各自在某染色体 DNA 序列上的切割概率

Sau3A I  GATC         Pst I  CTGCAG    Hinf I  GANTC

Acy I   GPuCGPyC

答：

  1/44 ； 1/46 ； 1/44 ；（ 1/44 ） x（1/22）

7 ．一长为 4.2kb 的 DNA 片段，分别用 EcoRI 、 PstI 及 EcoRI+PstI 消化，电泳结果如下图所示，请根据结果绘出该片段限制性图谱

                                        0.7kb

0.7kb                               0.8kb

1.5kb          1.4kb                2.0kb

2.0kb          2.8kb               

      EcoRI          Pst I              EcoRI + Pst I

答：

        EcoRI     PstI     EcoRI

       0.7kb          0.7kb           0.8kb             2.0kb

回收与连接

一．单选题

1 ．用 DEAE 膜片法回收电泳分离的 DNA 片段时，在紧靠目的 DNA 片段前方的凝胶切一裂缝，以插入 DEAE 纤维素膜，该裂缝长度与 DNA 条带相比应（ C ）

A ．   略短     B.  等长    C.  略长    D. A 或 B 都可    E . A 、 B 、 C 都可

2 ．用透析膜插片凝胶电泳法回收 DNA 片段时，再区带前挖一小槽，将透析膜置于槽中，这时应注意（ B ）

A ．透析膜要接触 DNA 区带一侧的胶缘   。

B ．透析膜不能接触 DNA 区带一侧的胶缘   。

C ．透析膜要接触 DNA 区带相对一侧的胶缘   。

D ．透析膜不能接触 DNA 区带相对一侧的胶缘   。

E ．随意插入槽中即可。

3 ．在回收 DNA 片段时，观察电泳结果为尽量减少对 DNA 的照射损伤应使用（ A ）

A ．长波长紫外   B.  短波长紫外   C .  长波长红外   D.  短波长红外            E.  ABCD 都不可

4 ． DNA 回收时，如要除去 EB （溴化乙锭）可用下列那种试剂（  A  ）

A ．正丁醇    B.  苯酚    C.  氯仿     D.  异戊醇     E.   乙醇

5 ．在 DNA 分子克隆时，常用到部分填补法，填补时应注意（  E  ）

A ．控制反应温度   B.  控制酶的反应时间    C.   控制 DNA 聚合酶的用量

D.  控制反应 PH    E.  限制 dNTP 的种类

6 ．下列关于平末端连接的说法正确的是（  B ）

A ．   同等条件下连接效率高于粘末端连接的连接效率。

B ．   加入凝聚剂 PEG8000 可促进平末端连接。

C ．   平末端连接时反应温度要比粘末端连接温度高。

D ．   平末端连接方法的使用仅限于酶切后产生的两个平末端之间的连接。

E ．   平末端连接比粘末端连接更易产生自身环化。

7 ．用同一种酶切割载体和目的基因后进行连接，连接产物会含大量自身环化载体，采用下列哪种酶处理，可防止自身环化（  E  ）

A ．核酸内切酶     B.  核苷酸激酶     C.  核酸外切酶     D.  末端转移酶      E.   碱性磷酸酶

8 ．分子克隆中用 T 载体主要是与下列哪种产物连接（  D  ）

A ．单酶切产物       B.  双酶切产物       C.  同裂酶产物      D. PCR 产物    E.  酶切后形成的平末端产物

9 ．采用 BamH I 单切载体和目的基因后，进行重组连接前要（  D  ）

A ．  65 ℃处理 10 分钟使 BamH I 灭活。

B ．   用碱性磷酸酶处理载体防止其自身环化。

C ．   电泳检测酶切结果。

D ．  A 、 B 、 C 都正确。

E ．   只有 A 、 C  正确。

10 ．粘末端连接的优点是操作简便且（  C  ）

A ．可产生新的酶切位点     B.  载体易自身环化   C.  易于回收片段

D ．具有方向性    E.  选时更简便

二．多选题

1 ．重组连接时，反应体系必须的组分有（  A 、 C ）

A ． Mg2+   B. BSA   C. ATP   D. PO43-  E . EDTA

2 ． DNA 片段重组连接可用下列哪些方法（ A 、 B 、 C 、 D 、 E ）

A ．平末端连接     B.  粘末端连接   C.  加接头连接     D.   同聚尾连接

E . T 载体连接

3 ．酚抽提法回收 DNA 片段后残余的哪些物质可能会影响连接反应（ A 、 C ）

A ．酚   B. 微量的 EB  C. 琼脂糖    D.  少量的乙酸钠    E . 少量的乙醇

4 ．产生平末端的方法主要有（ A 、 B 、 E ）

A ．用产生平末端的限制酶切   。

B ．用 klenow 片段补齐 5 ‘粘末端。

C ．用末端转移酶补齐粘末端。

D ．用 Taq 聚合酶补齐粘末端。

E ．用 S1 核酸酶降解粘末端。

5 ．在 DNA 重组连接时，常采用连接头连接（ linker ligation ），其作用是（ A 、 B 、 C 、 E ）

A ．引入某些限制酶切位点。

         B.   人工构建载体。

C ．增加调控元件。

                 D.   调整阅读框。

E ．通过接头引入与目的基因相同的限制酶位点，并对目的基因相应酶切点进行甲基化修饰保护，可保护目的基因不受限制酶破坏。

6 ．构建载体时，使用双酶切相对于单酶切的优点在于（ A 、 B 、 C 、 D ）

A ．避免载体自身环化    B.   提高连接效率    C.   控制外源基因的插入方向

D.   便于转化后的筛选      E .  便于修改阅读框

7 ．下列关于同聚物加尾法的说法正确的是（ A 、 B 、 C 、 D 、 E ）

A ．其核心是利用末端转移酶的功能，将载体和外源 DNA 的 3 ‘端再加上一端寡核苷酸。

B ．不易自身环化。

   C.   连接效率高        D.   适用于 CDNA 克隆

E ．可能会产生某种限制酶切位点。

8 ．下列与 DNA 重组连接相关的说法正确的是   （ A 、 D 、 E ）

A ．不匹配的粘末端可通过部分填补后连接。

B ．   同聚尾法连接不仅连接效率高，也易回收插入的片段。

C ．限制酶切割 DNA 后加入 EDTA-SDS 终止液抑制限制酶活性，将有利于重组连接。

D ． Mg2+-ATP 是 T4DNA 连接酶反应时的必须因素。

E ．平末端连接时，在反应体系中加入适量凝聚剂可提高连接效率。

9 ．下列哪些因素对保证较高连接效率是有利的（ A 、 C 、 D ）

A ．高纯度 DNA 。

B ．载体与目的基因摩尔数之比为 1 ：

 1 。

C ．载体与目的基因摩尔数之比为 1 ：

 3~5 。

D ．连接反应体系中 DNA 浓度较高。

E ．连接反应体系中 DNA 浓度较低。

10 ．如果 DNA 分子重组时，需要用平端连接，下列哪些方法可形成平末端（ B 、 C 、 D 、 E ）。

A ． 3 ‘突出的粘末端用 DNA 聚合酶加 dNTPs 填平。

B ． 3 ‘突出的粘末端用核酸酶切平。

C ． 5 ‘突出的粘末端用 DNA 聚合酶   加 dNTPs 填平。

D ． 5 ‘突出的粘末端用核酸酶切平。

E ．利用切口为平末端的限制酶。

三、填空题

1 ．形成平末端的方法有   用产生平末端的限制酶切，用 S1 核酸酶切除粘末端    ，用 DNA 聚合酶填平粘末端。

2 ．载体与 CDNA 连接重组可用的方法有   同聚尾连接酶，加人工接头连接法。

3 ． DNA 片段重组连接时，如要克隆 PCR 产物， PCR 产物可直接用  T 载体连接，而无须用限制酶处理。

4 ．回收 DNA 片段时，在确定 DNA 条带位置时，应使用   长   波长紫外灯，以最大限度减少对 DNA 的照射损伤。

5 ．回收 DNA 片段时，常用   正丁醇   处理以除去 EB 。

6 ．在用单一限制酶切载体和目的基因并进行连接时，为防止载体自身环化，常用   碱性磷酸酶   处理载体，或用   α - 互补   进行筛选。

7 ． DNA 片段重组连接的方法主要有   平端连接、粘端连接、同聚尾连接、加接头连接   。

四．简答题

1 ．如何将一平末端的 DNA 片段与 BamH I 形成的粘末端连接？

答：

使用加接头连接法。

人工合成一段含 BamH I 酶切位点的 DNA 短片段，然后与该平末端片段两端连起来，用 BamH I 切割连接