安捷伦1260确认方案.docx

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安捷伦1260确认方案

检验仪器确认方案

仪器名称：

高效液相色谱仪

仪器型号：

Agilent1260

仪器编号：

方案编号：

QF/YA-FA-2011-312

江西青峰药业有限公司编制

确认方案审批…………………………………………………………………2

确认小组成员与确认计划…………………………………………………3

确认方案……………………………………………………………………4

1．概述………………………………………………………………………4

2．目的……………………………………………………………………4

3、确认依据……………………………………………………………………4

4、确认使用的主要文件与资料……………………………………………4

5、安装确认（IQ）……………………………………………………………4

6、运行确认（OQ）……………………………………………………………8

7、性能确认（PQ）……………………………………………………………8

8、偏差及其处理……………………………………………………………12

9、风险管理…………………………………………………………………12

10、确认批准、结果评价与建议…………………………………………13

确认方案审批

文件编号

QF/YA-FA-2011-312

起草人

日期：

审核人

质量管理部：

日期：

批准人

质量负责人：

日期：

确认小组成员与确认实施计划

1、确认小组成员

姓名

职务/职称

部门

职责

刘友文

档案管理员

设备部

负责设备开箱检查与技术资料的收集

韩梅

QC

中心化验室

起草仪器操作规程，参与仪器安装、负责运行与性能确认，

陈玲

主管

中心化验室

负责确认方案的起草与培训、确认组织实施，确认过程偏差的处理、确认记录的收集与审核，确认结果的评价与确认报告的起草

朱家佑

电工

设备部

参与安装确认，负责仪器安装环境的检查

安装工程师

安捷伦科技有限公司

负责仪器安装，并按厂方标准对操作员进行仪器操作、维护的培训

曾发林

部长

质量管理部

确认方案、报告的审核

2、确认实施计划

2.1确认方案的培训：

2011年10月16日前完成

2.2安装确认及仪器的操作培训：

2011年10月16日至2011年10月22日。

2.3运行确认与性能确认；2011年10月24日至2011年10月30日。

运行确认可在性能确认时一并进行确认。

确认方案

1、概述

Agilent1260液相色谱仪是江西青峰药业有限公司用于检测成品、原料、中间产品的检测设备。

该仪器主要由四元梯度泵（内置脱气机）、自动进样器、柱温箱、紫外可变波长检测器、色谱工作站及计算机组成。

由高压输液泵将规定的流动相泵入色谱柱，自动进样器注入供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在色谱柱内被分离，并依次进入检测器，由色谱工作站软件记录和处理色谱信号，从而达到分析目的。

该仪器安装于中心化验室的液相分析室东北角。

为市售非定制的分析仪器，故只进行安装确认、运行确认及性能确认。

并且由于运行确认为仪器安装确认完成后，测试仪器功能是否满足设计要求和用户需求的过程，性能确认考察仪器运行的可靠性，主要运行参数的稳定和结果的重现性，两者较多重复，故运行确认与性能确认一并进行。

2、目的

确认安捷伦1260高效液相色谱仪能满足公司产品检验的需求及符合GMP要求；

3、确认依据

《药品生产质量管理规范》（2010版）、《中国药典》2010年版。

4、确认所需使用的主要文件与资料

名称

存放地点

采购合同

高效液相色谱法操作规程

高效液相色谱仪维护保养规程

中国药典2010年版

检查人：

年月日

5、安装确认

5.1开箱检查

检查外包装应完好无损，仪器各部件、配件与供货合同一致，仪器出厂合格证书及使用说明书等技术资料齐全（参照合同清单）

检查情况如下：

表1开箱检查结果

确认项目

可接受标准

确认结果

开箱检查

仪器包装完好，仪器各部件与供货合同、装箱单一致，技术资料齐全。

外观

各部件完好，外观整洁、无污迹，内外表面光亮、平整、无擦痕。

检查人：

年月日审核人：

年月日

表2仪器技术资料

资料名称

数量

存放地点

检查人：

年月日

表3设备型号确认

部件

设备部件号

序列号

确认结果

输液泵

自动进样器

柱温箱

紫外可变波长检测器

工作站

检查人：

年月日

5.2安装环境确认

表4安装环境确认

确认项目

可接受标准

确认结果

温度

15～30℃

日温差±3℃

相对湿度

20%～85%

地面

平滑、不易起尘

安装场所

无震动、周围无腐蚀性介质、无电磁场干扰，操作台纵深尺寸60cm以上，避免空调直吹风，避免直射阳光。

检查人：

年月日

5.3公用设施确认

表5公用设施确认

项目

可接受标准

确认结果

电压

电源：

AC220V±10%，50Hz。

电源适配

三孔插座

断电续电能力

断电情形，设备能持续运行1小时以上。

接地

安装场所应有可靠接地线装置

检查人：

年月日

5.4计算机配置的确认

表6计算机配置的确认

项目

可接受标准

确认结果

操作系统

WindowsXP操作系统

硬件要求

内存不低于2G；硬盘不低于160G；配有网络适配器（2个网卡）；带光区驱动

安全性要求

可设置用户权限，用户需要凭密码登录。

检查人：

年月日

5.5仪器组装的确认

仪器由厂方技术工程师进行安装，并按厂方标准验收。

安装完后，对安装情况进行检查，操作人员起草仪器操作规程草案。

表7仪器组装的检查

测试项目

可接受标准

确认结果

仪器主体安装

仪器安装于液相色谱分析室东北角操作台，与相仪器间距大于60cm，仪器后面板应留有不小于50cm的空间，前面板至操作台边缘距离不小10cm；仪器安装平稳牢固，接入了UPS电源，仪器外壳与地线连接。

电源电缆连接

检测器、输液泵、自动进样器、色谱柱、柱温箱与计算机、打印机的电源连接正常，并接入UPS电源。

计算机与仪器、计算机与打印机的网线连接正常，IP地址设置正确。

管路

溶剂瓶、输液泵、自动进样器、柱温箱、检测器与废液瓶之间溶剂管路连接正确，各管路均有标识，溶剂瓶上有标示盛装溶剂名称或代码。

计算机安装检查

打开电源开关，计算机应能顺利启动WINDOWSXP。

仪器控制软件连接

启动Instrument1Online程序，仪器应能与控制软件顺利连接，在控制软件中可对泵、柱温箱、自动进样器、检测器等各模块进行参数设置，各模块依据设置的指令作相应的动作，可顺利完成进样、采集数据

仪器操作培训

安装工程师完成仪器的操作、维护保养的培训，受训人员考核合格

检查人：

年月日

6、运行确认

6.1运行确认项目与可接受标准

项目

测试方法与可接受标准

确认结果

泵运行测试

在工作站各泵模块中，开启泵，泵应自动完成自检并启动；设置流速与各溶剂的比例，泵可按运行参数运行；点击关闭泵，泵停止动作，恢复至初始状态。

柱温箱

在工作站中可实现对柱温箱的开、关控制，并可按设置柱温运行，柱温未到达设定值之前，工作站中的柱温箱模块应显示为未就绪（呈红色）

自动进样器

在工作站中可实现对进样器的开、关控制，开启后，自动进样器应能完成自检与复位，能按设置参数进行单次进样与系列进样操作

检测器

在工作站中可实现对检测器的开、关控制，开启后，氘灯应可点亮并自检通过，可实现对检测波长设置的功能。

样品测试

通过工作站编辑一个分析方法并运行。

仪器能顺利执行进样、分析与数据采集任务，在仪器脱机工作程序中，可对采集的图谱进行处理、并可打印出分析报告。

泵报警测试

溶剂瓶的流动相体积低于0.1L时，泵停止动作，工作站中显示红色报警信号

压力报警

测试

设置最高压力为100bar，逐步增加流速，当压力超过100bar时，泵停止运行，在工作站运行窗口中，显示红色报警信号

泄漏报警

测试

用以纯化水湿润的脱脂棉球轻轻压在漏液传感器上，仪器应显示红色报警信号，且仪器自动停止运行。

6.2运行确认不单独进行测试，在性能确认时一并进行确认。

7、性能确认

7.1测试项目与可接受标准

测试项目

可接受标准

输液泵

流量设定值（ml/min）

0.5

1.0

2.0

泵流量设定值误差（%）

±2%

±2%

±2%

流量稳定性误差（%）

2%

2%

2%

梯度误差

柱温箱

柱温箱设定值误差（℃）

≤±1.0℃

柱温箱稳定性（℃）

≤0.5℃

紫外可变波长检测器

波长准确度（nm）≤±2nm

基线漂移：

＜0.005AU/60min

基线噪音：

＜0.0005AU

整机性能

进样残留

残留量小于≤0.01%

线性

相关系数R2＞0.999

保留时间重复性（RSD）

≤1.0%

峰面积重复性（RSD）

≤1.5%

7.2输液泵的确认

7.2.1输液系统泄漏检查

将仪器各部分连接好，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，启动仪器，压力平稳后保持10分钟，用干燥的滤纸在各管路连接处检查，应无漏液，泵排液阀出口应无液体漏出。

7.2.2泵流量设定值误差（SS）与稳定性误差（SR）

以水为流动相，将流量分别设定为0.5ml/min（最小流量）、1.0ml/min、2.0ml/min（最大流量），待流量稳定后，用一干燥的已精密称定重量的具塞锥形瓶，在液体出口处接收流出液，同是以秒表（分度值不大于0.1S）计时，至规定时间（接收时间分别为10分钟、5分钟、5分钟），立即停止接收，加塞，精密称定，每一流量重复测试三次，按以下公式计算流量的设定值误差，流量的稳定性误差。

注：

测试完后，色谱柱与色谱系统立即用甲醇冲洗、替换。

7.2.3梯度误差（Gci）

将泵和检测器连接，不连接色谱柱，以水为流动相A，0.5%（ml/ml）丙酮溶液为流动相B，按下表设置梯度洗脱程序，检测器波长设为265nm，流量1.0ml/min，以水作为样品，进样20ul，执行梯度，记录色谱图。

（表15）

Time

（min）

%流动相A

（水）

%流动相B

（0.5%丙酮）

0.0

100

0

10.0

100

0

15

80

20

25

80

20

30

60

40

40

60

40

45

40

60

55

40

60

60

20

80

70

20

80

75

0

100

85

0

100

按下式计算：

Gci=（Ci-G）÷G

Gi为单元B的梯度；Hi为每步梯度的响应值；

为100%流动相B时的响应值；Gci为梯度误差；G为设置的流动相B的比例

7.3柱温箱的确认

选择35℃，45℃进行检定，启动柱温箱，设置柱温为规定值，通电升温，将已校正过的数字温度计或温度巡检仪探头放在柱温箱内，待温度恒定后，读取温度读数，每隔10分钟记录一次温度，共计7次，7次读数的平均值与设定值之差即为温度设定值误差（∆T），7次读数中最大值与最小值之差即为控温稳定性（Tc）

7.4紫外可变波长检测器

7.4.1波长示值误差

取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，置1000ml量瓶中，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至刻度。

将色谱柱与检测器连接管路断开，用注射器吸取水注射检测池，反复冲洗数次，开启仪器，设定检测波长为检定波长低10nm，加用注射器吸取上述重铬酸钾溶液，注入检测池反复冲洗数，使充满检测池，记录检测器响应值，每10s改变一次波长，每次增加1nm，直至检测波长比检定波长高10nm，记录每次改变波长后的检测器响应值，以响应值最大所对应的波长为仪器波长测定值，以波长设定值为横座标，响应值为纵座标绘制曲线图。

需要检定的波长为：

235nm，257nm，313nm与350nm。

例：

检定235nm波长，则设置检测器波长为225nm，再以每增加1nm改变波长，记录响应值，至至245nm。

7.4.2基线噪音和基线漂移

选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，检测波长254nm，检测器参数为默认值，启动仪器，待仪器稳定后，记录基线60分钟，以1分钟内基线波动幅度作为基线噪音，60分钟内基丝偏离原点的值作为基线漂移

7.5整机性能测试

7.5.1线性：

将仪器各部件连接好，选用C18柱，设定检测波长为254nm，以乙腈-水（65：

35）为流动相，流速：

1.0ml/min，柱温：

30℃。

精密吸取测试用标准溶液（含有0.15%邻苯二甲酸二甲酯、0.15%邻苯二甲酸二乙酯、0.01%联苯和0.03%三联苯的甲醇溶液）1μl、5μl、10μl、20μl、30μl、50μl，分别注入色谱仪记录色谱图，以进样量为横座标，峰面积为纵座标，绘制曲线图，计算4个成分峰的回归方程，其相关系数（r2）均应不小于0.9999。

7.5.2重复性

将仪器各部件连接好，选用C18柱，设定检测波长为254nm，以乙腈-水（65：

35）为流动相，流速：

1.0ml/min，柱温：

30℃。

精密吸取测试用标准溶液（含有0.15%邻苯二甲酸二甲酯、0.15%邻苯二甲酸二乙酯、0.01%联苯和0.03%三联苯的甲醇溶液）10μl，连续进样6次，分别计算4个成分的保留时间与峰面积的平均值、相对标准偏差（RSD）。

Xi为第i次测得的保留时间或峰面积；

为6次测量结果的算术平均值；i为测量序号。

7.5.2进样残留测试

按重复性项下测试条件测试，进样前用流动相充分平衡，精密吸取甲醇、测试用标准溶液、甲醇各10μl，依次注入色谱仪，分别记录色谱图。

计算后一次注入甲醇所得色谱图中的邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、联苯和三联苯峰的峰面积，与标准溶液色谱相应峰的峰面积比较，均不得超过对应峰面积的0.01%。

8、偏差及其处理

确认如出现偏差或漏项，应按偏差管理程序处理，由质量管理部部长批准。

9、风险管理

9.1风险分析与评估

9.1.1严重性的定义和排列

风险等级

低

中

高

数字等级

1

2

3

仪器

确认失败对仪器的影响

不会对仪器造成不良的影响

会仪器有潜在的影响，且其损伤不影响性能

会造成永久性的损伤、或对仪器性能有影响

GMP/质量控制

确认失败对检测结果的影响

不会检测结果的准确性产生影响

对检测结果会产生潜在影响，但可通过已建立的其它措施消除其影响

对检测结果产生影响，且未建立消除其影响的措施

效率与成本

确认失败对检测时间、成本的影响

不会造成检验失败、时间延长及检验成本增加

会造成检验时间少许延长，检验成本少量增加

会造成检验失败重试、检验时间与成本的显著增加

9.1.2可能性（发生频率）的定义和排列

风险等级

低

中

高

数字等级

1

2

3

历史（该设备以往确认情况）

未发生过

两年内发生一次

无历史记录

其它液相色谱发生情况

1年内未发生

1年内发生1次

1年内发生超过1次或无历史记录

9.1.3对安装、运行、性能确认逐项进行评估，如确认项目符合预定的接受标准，则其可能性、严重性评分为1。

确认结果不符合可接受标准或有漏项、偏差及其它风险，按“9.1.1”、“9.1.2”的定义，进行评价打分（风险得分=严重性×可能性），如果风险得分为1~4分为低风险，可以不制定下一步措施，如果两者的乘积为6~9分为中、高风险，必须制下一步措施消除或者降低风险后，再进行确认。

9.2风险管理结论

10、确认批准、结果评价与建议

批准人：

日期：

运行确认测试记录

项目

测试方法与可接受标准

确认结果

泵运行测试

在工作站各泵模块中，开启泵，泵应自动完成自检并启动

设置流速与各溶剂的比例，泵可按运行参数运行

点击关闭泵，泵停止动作，恢复至初始状态

柱温箱

在工作站中可实现对柱温箱的开、关控制

可在工作站中设置柱温，且可在30分钟内达到设定值

柱温未到达设定值之前，工作站中的柱温箱模块应显示为未就绪（呈红色）

自动进样器

在工作站中可实现对进样器的开、关控制能

开启后，自动进样器应能完成自检与复位

按设置参数进行单次进样与系列进样操作

检测器

在工作站中可实现对检测器的开、关控制

开启后，氘灯应可点亮并自检通过

可实现对检测波长设置的功能

样品测试

通过工作站编辑一个分析方法并运行。

仪器能顺利执行进样、分析与数据采集任务，在仪器脱机工作程序中，可对采集的图谱进行处理、并可打印出分析报告。

泵报警测试

溶剂瓶的流动相体积低于0.1L时，泵停止动作，工作站中显示红色报警信号

压力报警测试

设置最高压力为100bar，逐步增加流速，当压力超过100bar时，泵停止运行，在工作站运行窗口中，显示红色报警信号

泄漏报警测试

用以纯化水湿润的脱脂棉球轻轻压在漏液传感器上，仪器应显示红色报警信号，且仪器自动停止运行。

评价：

测试人：

年月日审核人：

年月日

江西青峰药业有限公司

液相色谱仪测试记录

文件编码：

R-QC-7007-00

仪器型号

仪器编号

使用岗位

仪器室温度

相对湿度

测试周期

测试日期

测试结论

测试记录

1、外观检查：

2、泵流量设定值误差及流量稳定性误差测试

Fs

Fs1=0.5ml/mint1=10min

Fs2=1ml/mint2=5min

Fs3=2ml/mint3=5min

容量瓶W1（g）

瓶+液W2（g）

W1-W2（g）

（W1-W2）/p（ml）

Fm（ml/min）

设定值误差（Ss）

稳定性误差（SR）

3、梯度准确度（Gci）的测试

B溶液变化范围

0%

20%

60%

80%

100%

读数

Hi

梯度误差Gci

4、柱温箱温度设定值误差（∆T）及控温稳称定性误差（Tc）的测试∆T≤2℃Tc≤1℃

设定温度

测试结果

∆Ts

Tc

1

2

3

4

5

6

7

平均

5、紫外检测器波长示值误差

测试波长

235nm

257nm

313nm

350nm

示值误差限度

实测值

示值误差

±2nm

6、基线噪音与基线漂移

基线噪音：

基线漂移：

7、定性定量测量重复性的检定

样品名称

浓度（μg/ml）

进样量（μl）

流动相

检测波长（nm）

流速（ml/min）

进样次数

1

2

3

4

5

6

平均值

RSD

保留时间

峰面积

测试者：

复核者：

风险评估表

项目

确认结果

风险评估结果

可能性

严重性

RPN值

风险得分

安装确认

开箱检查

安装环境

公用设施

计算机配置

仪器组装

运行确认

泵运行测试

柱温箱运行测试

自动进样器运行测试

检测器运行测试

样品测试

泵报警测试

压力报警测试

泄漏报警测试

性能确认

输液系统泄漏检查

泵流量设定值误差（SS）

稳定性误差（SR）

梯度误差（Gci）

柱温箱设定值误差（℃）

柱温箱稳定性（℃）

波长准确度

基线漂移

基线噪音

进样残留

线性

保留时间重复性

峰面积重复性

评估结论：

评估人：

年月日审核人：

年月日

Agilent1260高效液相色谱仪操作规程（草案）

1、仪器系统组成

本仪器包括高压输液泵（G1311C）、柱温箱（G1316A）、紫外可变波长检测器（G1314B）、自动进样器（G1329B）及色谱工作站（G2028A）、计算机、打印机组成。

仪器配备有4个溶剂单元，100位样品盘，进样瓶规格为2ml，柱温箱为升温式，柱温设置温度应高于室温。

2、准备

2.1准备所需流动相，用合适的0.45um水膜或者有机膜过滤，超声脱气至无气泡产生。

2.2根据待检样品的需要更换合适的色谱柱、预柱。

（注意色谱柱方向）

2.3配制标准品溶液和样品，用合适的0.45um水膜或者有机膜过滤。

2.4检查各仪器部件的电源线、数据线和输液管道连接是否正确。

3、开机

3.1接通电源，一次开启不间断电源、从上往下打开液相色谱仪各模块前左下方的电源开关，LC各模块进入自检，右上角的指示灯会有不同颜色闪烁几下，最后变成橘黄色显示启动完成；

3.2打开计算机电源，点击<开始>图标，选择<所有程序>\<仪器2连机>\点击或直击双击\<仪器2连机>桌面工作站图标，启动工作站。

4、方法设定及确认

4.1方法编辑：

在<方法>下拉菜单中选择“编辑完整的方法”，按提示设置检测波长、柱温、进样量、各管路溶剂的比例、流速等一系列参数，确认无误后确认，保存方法。

一般每次分析均应建立不