Waters使用注意.docx
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Waters使用注意
Waters使用注意
流动相及溶剂瓶
使用HPLC试剂或溶剂，含缓冲盐的流动相需过0.45um的滤膜除去微粒物质。
更换流动相时应彻底清洗，防止交叉污染。
定期清洗溶剂瓶和附件，防止长微生物。
输液泵
密封垫易于损坏，每天实验结束后一定要认真清洗泵，减少密封垫的损耗，防止密封垫堵塞。
使用缓冲盐流动相应更加小心。
使用HPLC试剂时要注意不要使泵的压力过高及时调整泵的压力，上限为3500-4000PSI，下限是50PSI。
防止泵堵塞引起压力过高而损坏柱塞杆或烧坏电机。
正确使用色谱泵：
使用高品质流动相
溶剂过滤
溶剂脱气
柱塞杆清洗
注意调节流量时的变化速度
进样器
停机前一定要清洗进样器内的样品和无机盐，防止样品和无机盐的沉积造成样品的交叉污染。
硬件磨损或管路堵塞。
注射器和样品瓶最好使用仪器自带的不要使用其他仪器的。
防止柱性能下降
溶剂的化学腐蚀性不能太强
避免颗粒物在柱头沉积
柱压不能太高，防止冲击太大
流动相PH小于7时，最好使用粒度同种填料的预柱
滤头加滤片（烧结不锈钢）需要时加保护柱。
长时间不用时要保护好，一定要洗去缓冲盐。
加入大于10%的有机溶
剂，将柱两端拧紧，保持柱填料湿润。
检测器
保持清洁，每天使用后和色谱柱一起清洗。
使用脱过气的流动相，防止气泡滞留。
检测灯有一定的使用寿命，超过4小时不用时可以不开。
WastersHPLC的仪器常见故障及处理方法
●脱气不充分（噪声大、出毛刺）用He脱气（600，2695），真空脱气（Degasser,2695,1595）,超生脱气（超声波清洗器）
●流动相供给不畅，泵压力不稳，流动相接近用完。
溶剂滤头堵塞（有颗粒，长霉）
●溶剂瓶或流动相被污染或产生有规则的噪声；基线上升；梯度洗脱出鬼峰。
原因：
溶剂质量差（含杂质多）；配流动相的玻璃器皿不合格，微生物影响；配流动相的操作不当（过滤，脱气，搅拌）
●单向阀
球和阀座黏在一起，堵塞，打不出溶剂。
（缓冲盐流动相）用高质量的流动相冲洗。
不同溶剂冲洗，如水，甲醇，异丙醇，二氯甲烷，或更换新单向阀。
球和阀座密封不严，压力不稳，气泡进入阀中，紧贴在阀体内，使球难以返回阀座，引起倒流。
压力和流速变化大，可能有小晶体颗粒。
清除气泡的办法：
打开排夜阀，大流量冲洗，用脱过气的甲醇冲洗，一般可解决问题。
●泵垫圈磨损或破碎：
高压下压力不稳，从泵头往外渗漏流动相，色谱峰的保留时间会改变。
解决方法：
更换新垫圈，按操作说明书方法一步一步操作。
输液泵
输液泵垫圈要和流动相匹配协调。
多数垫圈是协调的，但有的垫圈适用于甲醇，水，乙腈，但在四氢呋喃中溶解、变粘、变软,需换垫圈时,应向Waters咨询垫圈的规格型号。
色谱工作者一般应学会换密封垫圈。
柱塞杆故障
磨损、漏液（正常损耗）使用不当被折断（多为安装不合适导致）柱塞杆被卡住，不能运动。
■更换新柱塞杆
初次请维修工程师帮助解决。
。
常见故障：
LostPrime
单向阀的清洗:
如果使用过缓冲盐溶液
请使用40℃~50℃的温水超声20min,
如果使用过纯乙腈请使用异丙醇超声20min
如果使用过其他流动相或上述两种溶液超声后请使用纯甲醇超声20min
自动进样系统
b.注意样品瓶隔垫，防止污染。
c.进样器针头堵塞（样品、缓冲盐、隔垫碎片、针头本身），可用溶剂清洗，或换新针头。
d.样品滞留：
空白溶剂出色谱峰.加倍清洗，或调整样品瓶顺序，（从低浓度开始，高浓度放后面）或在样品瓶前放清洗液瓶
进样系统正确使用步骤:
•选择适当的洗针溶剂（绿管溶剂）和SealWash溶剂
•清洗进样针（NeedleWash）
•清洗柱塞杆密封（SealWash）
•平衡系统
•Purge进样器
•实验操作
•清洗系统
•Purge进样器
•清洗进样针（NeedleWash）
•清洗柱塞杆密封（SealWash）
注意:
每次进样前仪器会洗针（Needleswash）进样之后不洗针
推荐:
每次批量进完样后手动清洗，或最后进一针50ul流动相，如果流动相中有盐的话则用纯净水替代缓冲盐那部分比例。
其它注意事项:
•打开样品仓盖后，等待样品盘停止转动后再取出
•关机前取出所有样品瓶，或将样品盘全部取出
•注意保持样品仓内和样品盘清洁
•使用微量进样瓶请设定正确的针尖高度值
•进样瓶垫损环后，请勿使用其它替代品
其它注意事项:
•仪器右侧的Syringe要注意不能有气泡，一旦出现请使用面板上的PurgeInjector功能
色谱柱：
1）塔板数下降
a.样品处理不合适，选择适当的样净化方法，选择合适流动相。
b.柱头塌陷,考虑重新购买。
2）峰形变坏
a.出现拖尾峰，分叉峰，非高斯峰。
b.与塔板数下降有关，峰形坏保留时间不变，可能是柱堵塞（不锈钢烧结片），或
柱头有死体积（常见于使用Peek接头）。
3）柱压突然增大
a.样品沉积在柱内,用能溶解样品的溶剂冲洗（断开柱和检测器）可正向冲，反向冲（慎用）。
b.柱内硬件有问题：
滤片堵塞，换新片;塌陷：
考虑买新柱。
4）保留时间改变
不同柱保留时间的变化,主要是填料差异造成的,不同牌号柱出峰顺序不变，保留时间有小的变化。
故障
现象
解决办法
过滤片堵塞
压力增高、柱效下降、峰形差
倒柱冲洗或换过滤片
柱头塌陷
峰分叉、柱效下降
考虑购买新柱
键合相流失
保留值改变、峰形差、柱效下降
考虑购买新柱
样品堵塞
压力高
用能溶解样品的溶剂冲洗
强吸收样品
柱效下降、保留值小
强溶剂反冲
检测器：
温度影响：
环境温度变化引起基线漂移。
流动相温度变化引起折射率改变，紫外光传导变化柱温变化引起基线漂移。
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•不要挡住检测器散热风扇和通风孔
•不要随意更改检测器进、出口管路
•示差折光检测器使用前、后均应充分清洗参比池（Purge）
•长时间停用检测器时，应在检测池中充满醇或乙腈，必要时密封检测器进、出口管路
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