肠球菌溶血性链球菌和粪链球菌检验培养基.docx
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肠球菌溶血性链球菌和粪链球菌检验培养基
葡萄糖肉浸液肉汤
DextroseMeatInfusionBroth
用途：
用于溶血性链球菌的增菌培养
配方：
（g/L）
牛肉粉
氯化钠
蛋白胨
磷酸氢二钾
葡萄糖
pH值7.5 ± 0.1
3.0
5.0
10.0
2.0
10.0
25℃
原理：
蛋白胨、牛肉粉提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钾为缓冲剂；葡萄糖提供碳源。
用法：
称取本品 30.0g,煮沸溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压 灭菌 15 分钟,备用。
质量控制：
在36±1℃培养24小时。
质控菌株
ATCC
生长情况
溶血性链球菌
（10-8）+++
单增李斯特氏菌
27853
（10-8）+++
大肠杆菌
25922
+/-
沙门氏菌
14028
+/-
匹克氏肉汤基础A
Pick’sBrothBaseA
用途：
用于溶血性链球菌的增菌培养
配方：
（g/L）
胰蛋白胨
牛心浸粉
叠氮钠
结晶紫
pH值7.3-7.5
10.0
20.0
0.065
0.002
25℃
原理：
胰蛋白胨、牛心浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子；脱纤维兔血（或羊血）为溶血性链球菌提供大量生长因子；结晶紫和叠氮钠为选择性抑菌剂。
用法：
称取本品 30.0g,加热溶于1000ml 蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌 15 分钟,冷至 50℃左右时,加入脱纤维羊血,混匀。
质量控制：
在36±1℃培养18-24小时。
质控菌株
ATCC
生长情况
溶血现象
溶血性链球菌
+++
+（大）
单增李斯特氏菌
27853
++
+（小）
大肠杆菌
25922
-
-
沙门氏菌
14028
-
-
肉浸液肉汤培养基
MeatInfusionBroth
用途：
用于溶血性链球菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的增菌培养（GB标准）
配方：
（g/L）
牛肉粉
氯化钠
蛋白胨
磷酸氢二钾
pH值7.5 ± 0.1
3.0
5.0
12.0
2.0
25℃
原理：
蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；磷酸氢二钾为缓冲剂；氯化钠可维持均衡的渗透压。
用法：
称取本品 20.0g,溶解于 1000ml蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制：
在36±1℃培养18-24小时。
质控菌株
菌株编号
生长情况
其它特征
溶血性链球菌
ATCC32210
+++
浑浊
金黄色葡萄球菌
ATCC25923
+++
浑浊
大肠埃希氏菌
ATCC25922
+++
浑浊
沙门氏菌
ATCC14028
+++
浑浊
叠氮钠葡萄糖肉汤
AzideDextroseBroth
用途：
用于链球菌的增菌培养
配方：
（g/L）
胰蛋白胨
牛肉浸粉
氯化钠
葡萄糖
叠氮钠
pH值7.0 - 7.4
15.0
4.5
7.5
7.5
0.2
25℃
原理：
胰蛋白胨和牛肉浸粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；葡萄糖提供碳源；叠氮化钠可抑制革兰氏阴性菌。
用法：
称取本品 34.7g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装， 121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制：
在36±1℃培养18-24小时。
质控菌株
菌株编号
生长情况
其它特征
肠球菌
+++
/
大肠埃希氏菌
ATCC25922
-
/
粪肠球菌
ATCC29212
+++
/
金黄色葡萄球菌
ATCC25923
-
/
乙基紫叠氮钠肉汤
用途：
用于链球菌的增菌培养
配方：
（g/L）
酪蛋白胨
酵母浸粉
葡萄糖
氯化钠
磷酸氢二钠
磷酸二氢钠
叠氮钠
乙基紫
pH值7.0±0.2
13.5
6.5
5.0
5.0
2.7
2.7
0.4
0.00083
25℃
原理：
酪蛋白胨和酵母浸粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖提供碳源；叠氮化钠可抑制革兰氏阴性菌；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钠和磷酸二氢钠做缓冲剂；乙基紫作为指示剂。
用法：
取本品 35.8g,溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制：
KF链球菌琼脂
KFStreptococcusAgar
用途：
用于链球菌的选择性分离及计数（GB、SN标准）
配方：
（g/L）
月示蛋白胨
酵母粉
甘油磷酸钠
氯化钠
麦芽糖
乳糖
叠氮钠
琼脂
溴甲酚紫
pH值7.2±0.2
10.0
10.0
10.0
5.0
20.0
1.0
0.4
13.0
0.015
25℃
原理：
月示胨和酵母粉提供氮源、维生素和生长因子；麦芽糖和乳糖为可发酵糖类；氯化钠维持均衡的渗透压；叠氮化钠可抑制革兰氏阴性菌；琼脂是培养基的凝固剂；溴甲酚紫为指示剂染料。
用法：
称取本品 69.4g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟,冷却至50-60℃时,加入无菌1%TTC溶液10ml,混匀,倾入无菌平皿,备用。
质量控制：
在36±0.5℃下培养48h。
菌 名
菌 号
生长状况
培养特征
粪性链球菌
CMCC（B）32223
良好
红色或粉红色中心
大肠埃希氏菌
ATCC25922
被抑制
＿＿
肠球菌琼脂（胆盐－七叶苷－叠氮钠琼脂）
EnterococcusAgar（BileEsculinAzideAgar）
用途：
用于食品和水中肠球菌的计数
货号：
HB0133-3
配方：
（g/L）
牛肉浸粉
胰酪蛋白胨
酵母粉
牛胆粉
氯化钠
七叶苷
柠檬酸铁铵
叠氮化钠
柠檬酸钠
琼脂
pH值7.1 ± 0.2
3.0
17.0
5.0
10.0
5.0
1.0
0.5
0.25
1.0
13.5
25℃
原理：
胰酪蛋白胨和牛肉浸粉、酵母粉提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；细菌水解七叶苷与柠檬酸铁铵中铁离子反应形成黑色的6,7-二羟基香豆素；柠檬酸钠、牛胆粉和叠氮化钠为选择性抑菌剂，抑制非链球菌的细菌；琼脂是培养基的凝固剂。
用法：
称取本品 56.3g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,冷至45±1℃，倾入含1ml样品液平皿中约15ml培养基，混匀，凝固。
35±2℃倒置培养基培养24±2h。
注：
从保温开始至做成平板时间不要超过4h。
质量控制：
在36±0.5℃培养24小时。
菌 名
菌 号
生长状况
培养特征
粪链球菌
CMCC（B）32223
良好
棕黑色，具有棕色晕轮
金黄色葡萄球菌
ATCC6538
被抑制
——
大肠埃希氏菌
ATCC25922
被抑制
——
CATC琼脂
CATCAgar
用途：
用于食品和饮料肠球菌的分离培养
配方：
（g/L）
胰酪蛋白胨
酵母浸粉
磷酸二氢钾
柠檬酸钠
吐温80
碳酸钠
叠氮钠
红四氮唑（TTC）
琼脂
pH值7.0± 0.2
15.0
5.0
5.0
15.0
1.0
2.0
0.4
0.1
15.0
25℃
原理：
胰酪蛋白胨、酵母浸粉提供氮源、维生素和矿物质，磷酸二氢钾是缓冲剂。
琼脂是培养基凝固剂。
用法：
称取本品 58.5g ,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,冷至 50~55℃时，倾入无菌平皿，备用。
质量控制：
胆盐七叶苷琼脂
BileEsculinAgar
用途：
用于肠球菌和肠道致病菌的分离培养
配方：
（g/L）
蛋白胨
牛胆盐
柠檬酸铁
七叶苷
琼脂
pH值7.1 ± 0.2
8.0
20.0
0.5
1.0
15.0
25℃
原理：
蛋白胨提供氮源、维生素和生长因子；细菌水解七叶苷与柠檬酸铁中铁离子反应形成黑色的6,7-二羟基香豆素；牛胆盐为选择性抑菌剂，抑制非链球菌的细菌；琼脂是培养基的凝固剂。
用法：
称取本品 44.5g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制：
在36±1℃培养22-24小时。
质控菌株
ATCC
生长情况
黑色
肠球菌
（10-7）+++
+
大肠杆菌
25922
（10-7）+++
-
金黄色葡萄球菌
25923
-
/
哥伦比亚血琼脂基础
ColumbiaBloodAgarBase
用途：
营养非常丰富，用于各种细菌的基础培养基
配方：
（g/L）
酪蛋白胰酶消化物
心胰酶消化物
玉米淀粉
肉胃酶消化物
酵母浸出粉
氯化钠
琼脂
PH值
10.0g
3.0g
1.0g
5.0g
5.0g
5.0g
10.0g
7.3±0.2
原理：
酪蛋白胰酶消化物、肉胃酶消化物、心胰酶消化物和酵母浸出粉提供碳氮源、维生素和氨基酸；淀粉能促进奈瑟氏菌的生长和增强链球菌的溶血特性；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。
用法：
称取本品 39克，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装，121℃高压灭菌15分钟，冷至45-50℃左右时，加入相当于20mg庆大霉素的无菌硫酸庆大霉素，混匀，倾入无菌平皿。
质量控制：
在30-35℃培养18-24小时。
质控菌株
菌株编号
生长情况
其它特征
金黄色葡萄球菌
ATCC25923
良好
有黄色色素
单增李斯特氏菌
ATCC19114
良好
无色透明小菌落
大肠埃希氏菌
ATCC25922
良好
无色透明大菌落
沙门氏菌
ATCC14028
良好
无色大菌落
铜绿假单胞菌
CMCC10104
良好
有绿色色素
LIM培养基
LIMMedium
用途：
用于链球菌的分离培养（Japan方法）
配方：
（g/L）
牛肉粉
胰蛋白胨
葡萄糖
碳酸氢钠
氯化钠
磷酸氢二钠
pH值7.8 ± 0.1
10.0
20.0
2.0
2.0
2.0
0.4
25℃
原理：
胰蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖提供碳源；氯化钠维持均衡的渗透压磷酸氢二钠作为缓冲剂。
用法：
取本品 36.4g,溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,待培养基冷至 45-50℃时，加入多粘素 E10mg 和萘啶酮酸 15mg ,混匀
质量控制：
BETA-SSA琼脂
BETA-SSAAgar
用途：
用于链球菌的选择性分离培养
配方：
（g/L）
蛋白胨
大豆蛋白胨
氯化钠
麦芽糖
琼脂
抑菌剂
pH值7.1 - 7.5
15.0
5.0
5.0
0.25
13.0
0.0262
25℃
原理：
蛋白胨和大豆蛋白胨提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；氯化钠可维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。
用法：
取本品 38.3g,溶解于1000ml蒸馏水中,115℃高压灭菌 20 分钟,冷至 50℃左右时，无菌加入5-10%的脱纤维羊血，混匀，倾入无菌平皿。
质量控制：
粪肠球菌琼脂
EnterococcusfaecalisAgar
用途：
用于粪肠球菌的选择性分离
配方：
（g/L）
月示胨
麦芽糖
酵母浸粉
甘油磷酸钠
氯化钠
乳糖
溴甲酚紫
叠氮钠
TTC
琼脂
pH值7.2 ± 0.2
10.0
20.0
10.0
10.0
5.0
1.0
0.015
0.4
0.1
13.0
25℃
原理：
月示胨和酵母浸粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；乳糖是大肠菌群可发酵的糖类；叠氮化钠可抑制革兰氏阴性菌；溴甲酚紫和TTC作为指示剂；琼脂是培养基的凝固剂。
用法：
取本品 70.0g , 加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,煮沸5 分钟,冷至50℃左右，倾入无菌平皿，备用。
质量控制：
缓冲蛋白胨水
BufferedPeptoneWater
用途：
用于阪崎杆菌前增菌培养（GB2008标准）
配方：
（g/L）
蛋白胨
氯化钠
磷酸氢二钠（含12个结晶水）
磷酸二氢钾
pH值7.2 ± 0.2
10.0
5.0
9.0
1.5
25℃
原理：
白胨提供碳源和氮源满足细菌生长的需求；氯化钠可维持均衡的渗透压；磷酸二氢钾和磷酸氢二钠是缓冲剂
用法：
称取本品 20.0g ,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟备用。
质量控制：
在36±1℃培养18-24小时。
质控菌株
菌株编号
生长情况
其它特征
单增李斯特氏菌
ATCC19114
+++
浑浊
沙门氏菌
ATCC14028
+++
浑浊
胆汁液态培养基
Bilebroth
用途：
用于粪链球菌的胆汁耐受试验。
配方：
（g/L）
猪胆粉
脑心浸液肉汤
pH值 7.4 ± 0.1
20.0
23.1
25℃
原理：
用法：
称取本品 43.1g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,分装试管,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制：
在36±1℃培养18-24小时。
M-肠道菌琼脂
M-EnterococcusAgar
用途：
用于水中或其它物质中肠球菌分离培养和计数（滤膜法或划线法）
配方：
（g/L）
胰酪蛋白胨
大豆蛋白胨
酵母浸粉
葡萄糖
磷酸氢二钾
叠氮化钠
TTC
琼脂
pH值7.2 ± 0.2
15.0
5.0
5.0
2.0
4.0
0.4
0.1
10.0
25℃
原理：
胰酪蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母浸粉提供氮源、维生素和矿物质，葡萄糖提供碳源，磷酸盐是缓冲剂，琼脂是培养基凝固剂。
用法：
称取本品 42g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,煮沸 1 分钟,冷至 45-50℃左右时, 倾入无菌平皿。
无需高压灭菌。
质量控制：
THB培养基
THBMedium
用途：
用于链球菌增菌培养
配方：
（g/L）
牛肉粉
胰蛋白胨
葡萄糖
碳酸氢钠
氯化钠
磷酸氢二钠
pH值7.8 ± 0.1
10.0
20.0
2.0
2.0
2.0
0.4
25℃
原理：
牛肉粉、胰蛋白胨提供氮源、维生素和矿物质，葡萄糖提供碳源，氯化钠维持均衡的渗透压，磷酸盐是缓冲剂。
用法：
称取本品 36.4 g,溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15分钟,待培养基冷至 45-50℃时, 加入多粘素E 10mg 和萘啶酮酸 15mg ,混匀。
PS琼脂
PSAgar
用途：
用于消化球菌的培养
配方：
（g/L）
蛋白胨
牛肉浸粉
酵母浸粉
葡萄糖
半胱氨酸盐酸盐
氯化钙
硫酸镁
磷酸氢二钾
磷酸二氢钾
碳酸氢钠
氯化钠
吐温80
琼脂
10.0
3.0
3.0
2.0
0.5
0.008
0.008
0.04
0.04
0.4
0.08
1.0
13.0
原理：
蛋白胨、牛肉浸粉 、酵母浸粉提供氮源、维生素和矿物质，葡萄糖提供碳源，磷酸氢二钾和磷酸二氢钾是缓冲剂。
氯化钠维持均衡的渗透压，琼脂是培养基凝固剂。
用法：
称取本品 33.1g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中 ,分装 , 121℃高压灭菌 15 分钟，备用。
质量控制：
肠球菌肉汤
EnterococcusBroth
用途：
用于肠球菌增菌培养
配方：
（g/L）
胰蛋白胨
牛肉浸粉
酵母浸粉
牛胆粉
氯化钠
柠檬酸钠
七叶苷
柠檬酸铁铵
叠氮化钠
pH值7.1 ± 0.2
17.0
3.0
5.0
10.0
5.0
1.0
1.0
0.5
0.25
25℃
原理：
胰蛋白胨和酵母浸粉、牛肉浸粉提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；细菌水解七叶苷与柠檬酸铁铵中铁离子反应形成黑色的6,7-二羟基香豆素；柠檬酸钠、牛胆盐和叠氮化钠为选择性抑菌剂，抑制非链球菌的细菌。
用法：
称取本品 42.8g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制：
在36±0.5℃培养24小时。
菌 名
菌 号
生长状况
培养特征
粪链球菌
CMCC（B）32223
良好
棕黑色，具有棕色晕轮
金黄色葡萄球菌
ATCC6538
被抑制
——
大肠埃希氏菌
ATCC25922
被抑制
——
脑心浸液肉汤（BHI）
BrainHeartInfusionBroth
用途：
用于细菌的增菌培养
配方：
（g/L）
蛋白胨
脱水小牛脑浸粉
脱水牛心浸粉
氯化钠
葡萄糖
磷酸氢二钠
pH值7.4 ± 0.2
10.0
12.5
5.0
5.0
2.0
2.5
25℃
原理：
蛋白胨、脱水小牛脑浸粉、脱水牛心浸粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖可为多种细菌提供能源；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钠为缓冲剂。
用法：
称取本品 38.5g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制：
质控菌株接种后于35±0.5℃培养24h，结果如下：
菌 名
菌 号
生长状况
培养特征
粪性链球菌
CMCC（B）32223
良好
肉汤混浊
乙型溶血性链球菌
CMCC（B）32210
良好
肉汤混浊
大肠埃希氏菌
ATCC25922
良好
肉汤混浊
脑心浸萃液肉汤
BrainHeartInfusionBroth
用途：
用于营养苛求细菌的增菌培养
配方：
（g/L）
月示蛋白胨
牛脑浸出粉
牛心浸出粉
氯化钠
葡萄糖
磷酸氢二钠
pH值7.4 ± 0.2
10.0
10.0
9.0
5.0
2.0
2.5
25℃
原理：
月示蛋白胨、牛脑浸出粉、牛心浸出粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖可为多种细菌提供能源；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钠为缓冲剂。
用法：
称取本品 38.5g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中, 121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制：
在35±0.5℃培养24h，
菌 名
菌 号
生长状况
培养特征
粪性链球菌
CMCC（B）32223
良好
肉汤混浊
乙型溶血性链球菌
CMCC（B）32210
良好
肉汤混浊
大肠埃希氏菌
ATCC25922
良好
肉汤混浊
脑心浸液琼脂（BHIA）
BrainHeartinfusionAgar
用途：
用于营养苛求细菌的增菌培养
配方：
（g/L）
牛脑浸粉
牛心浸粉
蛋白胨
酪蛋白胨
氯化钠
葡萄糖
磷酸氢二钠
琼脂
pH值7.4 ± 0.2
4.0
4.0
5.0
16.0
5.0
2.0
2.5
13.5
25℃
原理：
牛脑浸粉、牛心浸粉、蛋白胨、酪蛋白胨提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖可为多种细菌提供能源；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钠为缓冲剂，琼脂为凝固剂。
用法：
称取本品 52.0g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制：
控菌株接种后于35±0.5℃培养24h
菌 名
菌 号
生长状况
粪性链球菌
CMCC（B）32223
良好
乙型溶血性链球菌
CMCC（B）32210
良好
大肠埃希氏菌
ATCC25922
良好
Pfizer肠球菌选择性琼脂（PSE琼脂）
PfizerEnterococcusSelectiveAgar
用途：
用于粪链球菌的选择性分离和计数（SN标准）
配方：
（g/L）
蛋白胨
酵母浸粉
牛胆汁物
氯化钠
柠檬酸钠
柠檬酸铁铵
叠氮化钠
七叶苷
琼脂
pH值
20.0g
5.0g
10.0g
5.0g
1.0g
0.5g
0.25g
1.0g
15.0g
7.1±0.2
原理：
蛋白胨和酵母浸粉提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；细菌水解七叶苷与柠檬酸
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