脑脊液常规操作规程.docx
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脑脊液常规操作规程
1．检验目的
指导脑脊液（CSF）常规测定。
2．方法原理
脑脊液是存在于脑室及蛛网膜下腔中的无色透明液体。
由于脉络丛上皮细胞对血浆
中各种物质的选择性分泌和超滤作用，血浆中各种成分对血脑屏障的通透性各有不
同。
其中最易通过血脑屏障的是氯、钠、镁离子及乙醇;其次为清蛋白、葡萄糖、钙
离子、乳酸、氨基酸、尿素和肌酐;纤维蛋白原、补体、抗体、某些药物、胆红素、
胆固醇则极难或不能通过。
中枢神经系统任何部位发生器质性病变时，如感染、炎
症、肿瘤、外伤、水肿和阻塞等都可以引起脑脊液成分的改变。
通过对脑脊液理学
检查，显微镜检查、化学和免疫学检查及脑脊液病原学检查，可对疾病的诊断、治
疗和预后判断提供依据。
脑脊液（CSF）常规测定内容包括:
颜色、性状、有核细胞计数、红细胞计数、潘
氏试验、细菌等。
潘氏（pandys）试验：
CSF中的球蛋白与苯酚结合，形成不溶性的蛋白盐而产生白
色混浊或沉淀。
1
颜色（COLOR）
6
中性粒细胞（NE）
2
透明度（clearity）
7
淋巴细胞（LY）
3
凝固性（coagulability）
8
单核细胞（MO）
4
脑脊液有核细胞计数（CSF—NUCL）
9
潘氏试验（pandystest）
5
脑脊液红细胞计数（CSF—RBC）
3．方法性能参数（如线性、检出限、测量区间、不确定度、准确性、精密度、灵敏度和特
4.标本类型
标本类型：
新鲜CSF。
标本拒收条件：
拒收延迟室温2h、冷藏6h未送达标本。
标本保存与稳定性：
一般室温1h内完成检验，久置可致细胞破坏，影响细胞计数
及分类检查。
5.要求的容器、防腐剂或添加物、仪器、试剂或分析系统
标本容器：
BD无促凝成分红头管或洁净干燥带盖玻璃管。
试剂
试剂组分：
生理盐水
%Nacl溶液
白细胞稀释液
1%冰乙酸（1ml分析纯冰醋酸+蒸馏水至100ml）
刘氏快速瑞氏染色液
A液：
曙红、甲醇
B液：
亚甲蓝
潘氏试剂
10%苯酚溶液（纯苯酚10ml+蒸馏水至100ml）
试剂存储和有效期：
试剂名称
存储条件
有效期
开瓶有效期
位置
生理盐水
室温
1年
1年
存货柜/血常规室操作台
冰乙酸
室温
2年
1年
药品柜
1%乙酸
冷藏
1年
1年
试剂冰箱
10%苯酚溶液
室温
1年
1年
药品柜
刘氏快速瑞氏染色液
室温
2年
6个月
药品柜/染色操作台
仪器：
OLYMPUS光学显微镜，血细胞计数板。
6.校准程序（计量学溯源性）
不适用
7.质量控制，控制品使用水平和频率，允许限的纠正措施
不适用
8.程序步骤
一般性状检查：
轻轻混匀CSF，观察量、颜色、有无凝块和透明度（一般细胞数≥300
/μl个时或蛋白增加可产生混浊），并记录。
显微镜检查
细胞计数（无凝块标本）
（1）清或微混标本：
a）混匀后直接冲入计数池，计数四角四大方格内细胞总
数（包括RBC，NUCL）。
b）用白细胞稀释液作1：
1稀释，计数有核细胞数
c）红细胞数＝细胞总数－有核细胞数
（当白细胞数≥30个/μl时，在白细胞计数池中直接分类至少50个白细胞）
（2）混浊及以上标本：
外观
稀释
样本量
稀释液/溶解剂
粉色/轻度混浊
1:
20
20μl
380μl
红色/混浊
1:
50
10μl
490μl
带血量极高/极度混浊
1:
100
10μl
990μl
a）稀释标本：
于清洁试管中按上表进行稀释，用以计数细胞总数；
b）溶解RBC：
于清洁试管中按上表进行稀释，用以计数有核细胞数；
c）冲池；计数
d）红细胞数=细胞总数－有核细胞数
有凝块或粘稠标本：
（1）用吸管旋转并挤压凝块，挤出里面的液体及细胞。
（2）2000rpm×5min离心，分离上清液和沉渣。
（3）混匀沉渣，涂片，用高倍镜观察NUCL、RBC。
（4）报告每高倍镜视野的红细胞和有核细胞数。
离心获取沉渣和上清液：
将完成计数的CSF离心，2000rpm×5min离心,吸出上
清液于另一试管，并在试管上编号。
瑞氏染色：
当NUCL>106/μl时进行操作。
将沉渣混匀涂片，厚薄根据有核细
胞数而定，血性标本可考虑推片。
待干后，瑞氏染色进行分类（分
100个NUCL）；如见有不能分类细胞或怀疑有恶性细胞时，应请示
上级主管，由有经验的上级主管进行分析，并在报告时另行描述报
告，如脑膜白血病或肿瘤细胞等。
潘氏试验
试验操作：
取小试管一支，加入10%的石碳酸水溶液约5ml，用一次性吸管
加一滴CSF上清液立即在黑色背景灯照下观察结果。
结果判定：
阴性：
清晰透明。
弱阳性（±）：
微呈白雾状，在黑色背景下才能看到。
阳性（+）：
灰白色云雾状。
（2+）：
白色浑浊。
（3+）：
白色浓絮状沉淀。
（4+）：
白色凝块。
9.计算结果原理
颜色
红色：
常见于穿刺损伤或出血性病变。
为区别蛛网膜下腔出血和穿刺损伤应注意：
（1）离心沉淀后：
如上层液体呈黄色，隐血试验阳性，多为蛛网膜下腔出
血，且出血时间已经超过4小时。
如上层液体澄清无色，红细胞均沉
管底，多为穿刺出血或因病变所致的新鲜出血。
（2）红细胞皱缩，不仅见于陈旧性出血，在穿刺损伤引起出血时也可看
到，因脑脊液渗透压较血浆高所致。
黄色：
可因陈旧性蛛网膜下腔或脑室出血、椎管梗阻、化脓性脑膜炎、结核性
脑膜炎、重症如核黄疸等引起。
白色或灰白色：
多因白细胞增加所致，常见于化脓性脑膜炎。
褐色或黑色：
常见于脑膜黑色素瘤。
绿色：
可见于绿脓假单胞菌、肺炎链球菌、甲型链球菌引起的脑膜炎、高胆红
素血症和脓性脑脊液。
透明度：
脑脊液混浊程度与细胞数量有关，脑脊液中细胞数超过300×10/L时，可出现
混浊。
蛋白质含量增加或含大量微生物也可产生混浊。
凝固性：
结核性脑膜炎静置12-24小时后，标本表面有纤细的网膜形成。
蛛网膜下腔
梗阻时，可产生黄色胶冻状。
潘氏试验：
有脑组织和脑脊髓膜疾患时常成阳性反应如化脓性脑脊髓膜炎、梅毒性中
枢神经系统疾病、脊髓灰质炎、流行性脑炎等。
脑出血时多呈阳性反应，
如外伤性血液混入脑脊液中，亦呈阳性反应。
细胞分类：
中枢神经系统病变的CSF，细胞可增多，其增多的程度及细胞的种类与病变的
性质有关。
中枢神经系统病毒感染、结核性或霉菌性脑脊髓膜炎时，细胞数可中度增加，
常以淋巴细胞为主。
细菌感染时（化脓性脑脊髓膜炎），细胞数显著增加，以中性粒细胞为主。
寄生虫病时，可见较多的嗜酸性粒细胞。
脑室或蛛网膜下腔出血时，脑脊液内可见多数红细胞。
10.生物参考区间
颜色（COLOR）
无色
透明度（clearity）
透明
凝固性（coagulability）
无凝块
潘氏试验（pandystest）
阴性OR弱阳性
有核细胞计数
（CSF—NUCL）
成人（0-8）×106/L
中性粒细胞（NE）
成人（0-6%）
儿童（0-15）×106/L
新生儿（0-8%）
新生儿（0-30）×106/L
淋巴细胞（LY）
成人（40-80%）
单核细胞（MO）
成人（15-45%）
新生儿（5-35%）
新生儿（50-90%）
红细胞计数（CSF—RBC）
0×10/L
（正常脑脊液中白细胞主要为淋巴细胞、单核细胞，之比约为7:
3，可含极少中性粒细
胞）。
11.警告值、危急值（适用时）
12.检验结果可报告区间
13.对超出可报告范围的结果的处理
如检到细菌时应建议培养确认。
有不能分类细胞，应请示上级主管，并另行描述报告，如脑膜白血病或肿瘤细胞。
14.实验室解释
15.安全防护措施
所有样品按具有潜在传染性的标本处理。
测定完成后，上清液及沉渣试管于2000mg/L有效氯消毒液浸泡4小时以上，倒入
医疗废物下水槽，由医院统一消毒处理；塑料试管或容器等容器等医疗废弃物倒入
黄色医疗垃圾袋，贴上标签并封口，由医院统一销毁处理。
原液保存48小时或以上，倒入黄色医疗垃圾袋，贴上标签并封口，由医院统一销
毁处理，并做记录。
16.最常见的误差源。
手工操作，主观性较强，细胞鉴别需要有经验。
17.方法的局限性（如乳糜血、溶血、高胆红素血等干扰影响、交叉反应等）
18.参考文献
全国临床检验操作规程-第三版
19.有关引用程序与文件
涉及的记录与表格
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