发热伴血小板减少综合征专题调查实施方案.docx

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发热伴血小板减少综合征专题调查实施方案

近年来，我国部分地区相继发现一些以发热伴血小板减少为主要表现的感染性疾病病例，主要临床表现为发热、血小板减少、白细胞减少和胃肠、肝肾功能异常等，部分病例发病前有蜱叮咬史，其中少数重症患者可因多脏器损害、救治无效死亡。

此类疾病被称为发热伴血小板减少综合征（Severefeverwiththrombocytopeniasyndrome，SFTS）。

2009年底，中国疾病预防控制中心研究小组对患者血样中分离到的病毒进行病原学和血清学研究，发现了一种属于布尼亚病毒科白蛉病毒属的新型病毒，并命名为发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（SFTSV），简称新型布尼亚病毒，初步确认该病毒是发热伴血小板减少综合征的致病因子。

自2011年以来，我市每年均有SFTS病例报告，其中金寨县桃岭乡相继发生两起聚集性疫情，该疾病已成为严重威胁我市群众身体健康和公共卫生的新发传染病。

2013年9-10月，原市卫生局组织在金寨县、霍山县和霍邱县开展健康人群和宿主动物的SFTSV血清流行病学调查，已得出六安市部分地区可能构成SFTS的自然疫源地。

2014-2015年，在金寨县、霍山县和寿县相继开展感染危险因素研究、感染状况调查、死亡危险因素等专题调查，目前已初步了解我市高发病地区的感染危险因素，并首次提出了该疾病感染谱表现出以隐性感染为主的“冰山现象”。

但目前对于人群自然感染后SFTSV-IgG抗体水平维持时间情况，是否能被重复感染，蜱虫的消长规律、密度、优势种群及带毒率，SFTSV基因序列是否同源以及当地主要危险因素等尚不明确，本次主要是在前期调查的基础上进一步调查研究，为今后SFTS防控提供技术支撑。

   一、研究目的

（一）评价人群自然感染后SFTSV-IgG抗体水平维持时间情况，探讨其是否有重复感染的可能。

（二）了解我市高发病地区外环境中蜱虫的消长规律、密度、优势种群和带毒情况，分析毒株基因序列与全国其他地区的差异。

   （三）掌握现症病例的流行病学和临床特征，分析我市毒株基因序列与全国其他地区的差异，探索该病的疾病谱。

   二、研究对象

（一）病例定义

发热伴血小板减少综合征：

具有相关流行病学史、发热等临床表现且外周血血小板和白细胞降低者，并具备下列之一者：

（1）病例标本新型布尼亚病毒核酸检测阳性;

（2）病例标本检测新型布尼亚病毒IgG抗体阳转或恢复期滴度较急性期4倍以上增高者；（3）病例标本分离到新型布尼亚病毒。

（二）研究地点

   1、地区：

六安市各县区。

   2、高发病地区：

从中国疾病预防控制信息系统中，选择2011年1月1日至2014年7月31日期间所有报告现住址为六安市的病例建立数据库，以报告病例数多少进行排序，按照六安市高发县区、高发乡镇和高发行政村三级逐级排序，确定金寨县桃岭乡（金桥村、桐岗村）、汤家汇镇（四道河村、瓦屋基村）、古碑镇（余岭村、官池村）以及霍山县太平畈乡（蔡家畈村、太平村）、衡山镇（东石门村、迎驾厂村）、与儿街镇（大沙埂村、百福庵村）为本次研究高发地区，涉及两个县6个乡镇12个行政村。

   三、研究内容和研究方法

（一）研究一（抗体水平调查）

   1、调查对象：

选择在上述高发病地区的12个行政村中，2014年调查SFTSV-IgG抗体检测为阳性的99名人员及6个高发病地区的乡镇中2011-2015年期间曾确诊为SFTS病例人群。

   2、调查内容和方法：

采集标本前要详细询问其基本情况和暴露情况，完成调查问卷（附件2）。

各监测点要尽量避免失访，失访率控制在5%以内。

   3、标本采集、保存、运输及检测相关要求：

标本采集前，先填写知情同意书（附件3）。

标本采集用无菌真空管，对一般人群，每人采集非抗凝血5ml，用于血清抗体检测。

标本采集同时，要规范填写好登记表（附表1）并填写好编号（编码规则见附件4，每个人的编号除首个数字与2014年的不一样外其余均相同）。

采集后，及时分离血清，将血清、血球分别保存。

标本采集及血清分离应无菌操作。

所有标本应置入大小适合、带螺旋盖、内有垫圈的冻存管内，拧紧管口并及时分离血清，标记清楚后将血清保存于-70℃冰箱（一周内可保存在-20℃冰箱），一周内运送至市疾控中心。

市疾控中心收到标本后应于一个月内完成间接ELISA（酶联免疫吸附法）检测。

   4、时间进度：

每年的10月上旬-11月下旬。

其中，每年10月份完成自然感染人群问卷调查和血清标本采集工作；每年11月份完成实验室检测工作，并将结果逐级反馈至当地村卫生室。

（二）研究二（蜱虫调查）

   1、调查对象：

在高发病地区的12个行政村居住区附近的游离蜱虫以及当地居民家畜的寄生蜱虫。

2、调查内容和方法：

对于游离蜱，采用人工布旗法用约1平方米大小的白绒布旗，在调查地段内定时进行拖蜱。

拖蜱时，手持旗杆伸向一侧，使布旗平铺于草丛上，以等速缓步向前行走，每步行2米观察一次，将附着于旗上的蜱和拖蜱者身上的蜱用镊子捡入一定湿度的玻璃瓶中保存并编号（编码规则见附件4）。

每小时检获蜱数即为蜱密度，单位为只／人工小时，每人每次捕蜱时间不少于0.5小时。

凡拖过蜱的地方，当次调查不应在原地重复。

如是较平整的草地，可拖拉布旗在草地上行走；如是灌木丛则手持木杆在灌木丛和杂草上来回挥动布旗。

每个行政村每个月调查不少于1个人工小时（每个行政村每个月可采取由2个人完成，每人每次0.5个人工小时的方式；也可采取1个人直接完成1个人工小时的方式），12个村全年总计不少于96个人工小时。

调查地段可选择村庄附近的内草地和灌木丛（可为羊、牛等走过的路径两侧），且每次调查的地点相对固定。

对于寄生蜱虫，采用宿主体表捡拾法，在家畜（如牛、羊、狗等）身上进行体表捡拾（主要检查腋下、腹股沟、耳廓等皮肤柔软处），将每只（头）家畜身上的蜱放入同一管内并编号。

将全部采集的蜱带回实验室进行分类鉴定，计数计算密度[只／布旗人工小时或只／每只（头）动物体]。

调查后填写好附表2和附表3。

根据既往监测数据表明，各监测点每年采集游离蜱虫应不少于10只，采集的寄生蜱虫应不少于15只。

   3、蜱种鉴定及实验室检测：

每次采集过的蜱虫由当地疾控中心统一收集于每月下旬统一送至市疾控中心进行种类鉴定后，交由专业机构进行种类鉴定。

注意低温保存、运输。

   市疾控中心收到样本后置于－70℃保存，统一进行种类鉴定后，按照蜱虫的地区（即行政村）以及种类进行分组研磨，研磨液用于提取RNA，进行PCR核酸检测，对SFTSV阳性的毒株进行病毒分离及序列扩增、同源性分析，同时填写好附表3。

具体操作详见图1。

   4、时间进度：

每年3月-10月的每个月中旬在12个行政村各组织一次游离蜱的专项调查。

每年10月下旬-11月下旬完成蜱虫种类鉴定、PCR检测和基因测序。

   （三）研究三（病例调查）

   1、调查对象：

2016年1月1日至2018年12月31日期间，选择现住址为六安市且在六安市辖区内医疗机构被诊断为发热伴血小板减少综合征的病例。

   2、调查方法：

对符合条件的病例，按照属地管理的原则，由当地县区疾控中心开展流行病学调查和标本采集工作，填写好调查问卷（附件5），完成后一周内送至市疾控中心。

   市疾控中心收集符合条件病例的病历，组织专家和相关人员集中对其临床特征和流行病学史进行整理、归纳和总结，重点总结其暴露史、病程、临床表现和转归等特征，并对ELISA检测阳性的标本进行病毒分离和基因测序。

   3、标本采集、保存、运输及检测相关要求：

标本采集前，先填写调查问卷（附件5）。

标本采集用无菌真空管，每个健康人群采集非抗凝血5ml，用于血清抗体检测。

采集后，应及时分离血清，将血清、血球分别保存。

标本采集及血清分离应无菌操作。

所有标本应置入大小适合、带螺旋盖、内有垫圈的冻存管内，拧紧管口，并及时分离血清，标记清楚后将血清保存于-70℃冰箱（一周内可保存在-20℃冰箱），一周内运送至市疾控中心。

市疾控中心收到标本后置于－70℃保存，于10天内完成ELISA检测。

并于次年的元月份对ELISA检测阳性的样本，进行病毒分离及序列扩增、同源性分析。

具体操作详见图2。

   4、时间进度：

2016年1月1日-2019年元月。

2016-2018年发现病例，开展流行病学调查和采样工作；2019年元月份整理病历，完成对ELISA检测阳性标本的病毒分离和核酸扩增测序。

   四、组织机构

   组织机构由市卫计委、市直有关卫生单位、各县区卫计委、疾控中心、乡镇卫生院和村卫生室组成。

市卫计委负责本次项目的综合协调和督导管理；市疾控中心负责经费保障和技术指导，具体负责样本的实验室检测，以及对整个调查结果进行分析研究，并对整个调查工作进行质量控制；市直有关医疗机构负责符合现症病例的标本采集、报告及流行病调查的配合；各县区卫计委、疾控中心负责辖区内调查点的综合协调管理和物资保障，负责具体技术保障、质量控制和标本采集、运输工作；乡镇卫生院和村卫生室具体负责人群和蜱虫标本采集工作。

   五、有关要求

（一）个人防护和生物安全。

所有参与标本采集的现场工作人员均要做好个人防护，包括穿戴防护服和手套、胶靴等，实验室检测人员要严格实验室检测程序（附件6）和生物安全有关规定进行实验室检测工作。

（二）质量控制。

所有参与单位均要加强领导、认真组织，并指派专门的人员负责具体实施和质量控制，确保按时、保质、保量完成任务。

各项目单位要确保本次项目经费专款专用，严禁挤占挪用。

   （三）知情同意。

要先进行知情同意确认后开展后续工作。

本次研究的目的是为了更好的开展我市发热伴血小板减少综合征的研究和防控工作，研究的所有内容，包括了解的个人信息和标本的采集，均不会对调查对象构成伤害，且所得信息会严格保密。

每次对健康人员和随访调查前，要进行知情同意，调查员均向调查对象详细解释本次调查的目的和意义。

（四）资料收集、整理、分析及反馈。

现场调查结束后，应及时进行编号（编码规则见附件4）填写好相关附表，并将专题调查的原始记录、汇总整理资料、分析数据及调查报告等及时整理、归档。

实验室检测工作结束后，应及时将检测结果反馈给当地疾控中心，并逐级反馈给相关单位及被调查者。