实验四酶的特性实验.docx
《实验四酶的特性实验.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《实验四酶的特性实验.docx(6页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
![实验四酶的特性实验.docx](https://file1.bdocx.com/fileroot1/2022-12/18/19eb1f6e-9c3b-4898-84ef-6547d72733cb/19eb1f6e-9c3b-4898-84ef-6547d72733cb1.gif)
实验四酶的特性实验
实验四-酶的特性实验
说明:
本实验由四个小实验组成,其中第一个实验(酶的专一性)必做,其他三个小实验选做(至少做一个)
写实验报告时,可以只写需要做的实验内容!
实验四酶的特性实验
一、实验目的
酶是生物催化剂,生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的。
通过本实验了解酶催化的特异性、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响,对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。
二、实验内容
本实验由酶的专一性实验、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响4个小实验组成。
(一)酶的专一性
1、实验原理
本实验以唾液淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例,来说明酶的专一性。
淀粉和蔗糖无还原性,唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性二糖的麦芽糖,但不能催化蔗糖的水解。
用班氏试剂检查糖的还原性。
班氏试剂为碱性硫酸铜,能氧化具还原性的糖,生成砖红色沉淀氧化亚铜。
2、材料、仪器与试剂
(1)材料:
新鲜配制的唾液及其稀释液
(2)仪器:
恒温水浴;沸水浴;试管及试管架;
(3)试剂:
2%蔗糖溶液;溶于0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液;班氏试剂。
3、实验操作
(1)稀释唾液的制备
①唾液的获取
用一次性杯取一定量的饮用水,漱口以清洁口腔,然后在嘴中含10-20ml饮用水,轻漱2min左右时间,即可获得唾液的原液,内含唾液淀粉酶。
②不同稀释度唾液的制备(用大试管)
本实验需制备1:
1、1:
5、1:
20、1:
50、1:
200等五个不同浓度的稀释唾液。
举例说明:
1:
5指的是稀释了5倍的唾液,制备方法为1份原液+4份蒸馏水。
1:
20指的是稀释了20倍的唾液,制备方法为1份1:
5的稀释液+3分蒸馏水。
(2)唾液淀粉酶最佳稀释度的确定(严格按表1添加顺序做实验,用小试管做实验)
表1唾液淀粉酶稀释度的确定
管号
1(1:
1)
2(1:
5)
3(1:
20)
4(1:
50)
5(1:
200)
0.5%淀粉溶液(滴)
4
4
4
4
4
稀释唾液(ml)
1
1
1
1
1
37℃恒温水浴中保温5分钟
班氏试剂(ml)
1
1
1
1
1
沸水浴2~3分钟
实验结果
(2)淀粉酶的专一性
表2淀粉酶专一性实验
管号
1
2
3
4
5
6
0.5%淀粉溶液(滴)
4
-
4
-
4
-
2%蔗糖溶液(滴)
-
4
-
4
-
4
最佳稀释度唾液(ml)
-
-
1
1
――
煮沸过的最佳稀释度唾液(ml)
-
-
-
-
1
1
蒸馏水(ml)
1
1
-
-
-
-
37℃恒温水浴中保温5分钟
班氏试剂(ml)
1
1
1
1
1
1
沸水浴2~3分钟
实验结果
(二)温度对酶活力的影响
1、实验原理
酶的催化作用受温度的影响。
在最适温度下,酶的反应速度最高。
淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色,糊精按其分子的大小,遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。
最简单的糊精遇碘不呈颜色,麦芽糖遇碘也不呈色,在不同温度下,淀粉被唾液淀粉酶水的程度可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。
2、材料、仪器与试剂
(1)材料:
新鲜配制的唾液及其稀释液
(2)仪器:
试管及试管架;恒温水浴;冰浴;沸水浴;
(3)试剂:
溶于0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液;KI-I2碘溶液;
3、实验操作
取4支干燥的试管,编号后按下表加入试剂:
表3温度对酶活力影响实验加样顺序
管号
1
2
3
0.5%淀粉溶液(ml)
1.5
1.5
1.5
最佳稀释度唾液(ml)
1
1
煮沸过的稀释唾液(ml)
1
实验结果
摇匀后,将1、3号试管放入37℃恒温水浴中,2号试管放入冰水中。
10分钟后1、2、3管均取出(将2号内液体分两半),用KI-I2溶液来检验1、2、3号管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。
记录并解释结果。
将2号管剩下的一半溶液放入37℃水浴中继续保温10分钟后,再用KI-I2液实验,记录实验结果。
(三)PH对酶活力的影响
1、实验原理
酶的活力受环境PH值的影响极为显著。
不同酶的最适PH不同。
本实验观察PH对唾液淀粉酶活性的影响。
唾液淀粉酶的最适PH约为6.8。
2、材料、仪器与试剂
(1)材料:
新配制的溶于0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液
(2)仪器:
试管及试管架;吸管;滴管;恒温水浴
(3)试剂:
PH为5.0、5.8、6.8、8.0的缓冲溶液;KI-I2碘溶液;PH试纸
3、实验操作
表4PH对酶活性的影响实验
PH
5
5.8
6.8
8.0
缓冲液(ml)
3
3
3
3
0.5%淀粉溶液(ml)
1
1
1
1
向第一个试管加入稀释唾液后,置于37℃的恒温水浴;等待1min后
向第二个试管加入稀释唾液,置于37℃的恒温水浴;依次类推!
最佳稀释度的唾液(ml)
1
1
1
1
检查淀粉水解程度
待向第四只试管加入唾液2min后,每隔1分钟从第3管中取出1滴反应液于白瓷板上,加碘液检查反应进行情况,直至反应液变为淡棕黄色(颜色有点淡即可)。
即可从第一只试管依次添加碘液,时间间隔也为1min。
碘液(滴)
1~2
1~2
1~2
1~2
现象
为了更好的理解表格内容,下面对实验过程进行说明:
各取缓冲液3ml,分别注入4支带有号码的试管,随后于各个试管中添加0.5%淀粉溶液1ml和最佳稀释度的唾液1ml。
向各试管中加入稀释唾液的时间间隔为1分钟。
将各试管中物质混匀,,并依次置于37℃恒温水浴中保温。
待向第4管加入唾液2ml后,每隔1分钟由第3管取出一滴混合液,置于白瓷板上,加1小滴KI-I2溶液。
添加KI-I2溶液,检验淀粉的水解程度。
待混合变为淡棕黄色(颜色有点淡即可)后,向所有试管依次添加1-2滴KI-I2溶液。
添加滴KI-I2溶液的时间间隔,从第1管起,亦均为1分钟。
观察各试管中物质呈现的颜色,分析pH对唾液淀粉酶活性的影响。
(四)唾液淀粉酶的活化及抑制
1、实验原理
酶的活性受活化剂或抑制剂的影响,氯离子为唾液淀粉酶的活化剂,铜离子为其抑制剂。
2、材料、仪器与试剂
(1)材料:
0.5%淀粉溶液;最佳稀释度的唾液
(2)仪器:
试管及试管架;恒温水浴
(3)试剂:
1%NaCl溶液;1%CuSO4溶液;KI-I2碘溶液;1%Na2SO4溶液
3、实验操作(注意本实验的淀粉溶液为无NaCl的淀粉溶液)
表4唾液淀粉酶活化及抑制实验
管号
1
2
3
4
0.5%淀粉溶液(ml)
1.5
1.5
1.5
1.5
最佳稀释度唾液(ml)
0.5
0.5
0.5
0.5
1%NaCl溶液(ml)
0.5
-
-
-
1%CuSO4溶液(ml)
-
0.5
-
-
1%Na2SO4溶液(ml)
-
-
0.5
-
蒸馏水(ml)
-
-
-
0.5
37℃恒温水浴中保温10分钟
KI-I2溶液(滴)
2~3
2~3
2~3
2~3
现象
三、注意事项
各人唾液中淀粉酶活力不同,故本实验需要先做一个唾液淀粉酶稀释度的确定实验,以确定最佳稀释度。
四、思考题
1、何谓酶的最适pH和最适温度?
2、说明底物浓度、酶浓度、温度和pH对酶反应速度的影响。
3、作为一种生物催化剂,酶有哪些催化特点?