整理生物化学习题1.docx

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整理生物化学习题1

生物化学习题

第一章蛋白质化学

1、向1升1mol/L的处于等电点的甘氨酸溶液加入0.3molHCl，问所得溶液的Ph是多少？

如果加入0.3molNaOH以代替HCl时，pH值将是多少？

[pH:

2.71；9.23]

2、将丙氨酸溶液（400毫升）调节到pH8.0，然后向该溶液加入过量的甲醛。

当所得溶液用碱反滴定至pH8.0时，消耗0.2mol/LNaOH溶液250毫升。

问起始溶液中丙氨酸的含量为多少克？

[4.45g]

3、将含有天冬酸（pI=2.98），甘氨酸（pI=5.97），苏氨酸（pI=6.53），亮氨酸（pI=5.98）和赖氨酸（pI=9.74）的pH3.0柠檬酸缓冲液，加到预先用同样缓冲液平衡过的Dowex-50阳离子交换树脂中，随后用该缓冲液洗脱此柱，并分部地收集洗出液，这5种氨基酸将按什么次序洗脱下来？

[Asp，Thr，Gly,Leu,Lys]

4、指出在正丁醇：

醋酸：

水的系统中进行纸层析时，下列混合物中氨基酸的相对迁移率（假定水相的pH为4.5）：

（1）Ile,Lys;

（2）Phe,Ser;（3）Ala,Val,Leu;（4）Pro,Val;（5）Glu,Asp;（6）Tyr,Ala,Ser,His。

[Ile>Lys;Phe>Ser;Leu>Val>Ala;Val>Pro;Glu>Asp;Tyr>Ala>Ser≈His]

5、

（1）当Ala、Ser、Phe、Leu、Arg、Asp和His的混合物在pH3.9进行纸电泳时，哪些氨基酸移向正极（+）？

哪些氨基酸移向负极（-）？

（2）纸电泳时，带有相同电荷的氨基酸常有少许分开，例如Gly可与Leu分开。

试说明为什么？

（3）设Ala、Val、Glu、Lys和Thr的混合物pH为6.0，试指出纸电泳后氨基酸的分离情况。

[

（1）Ala,Ser,Phe和Leu以及Arg和His移向负极；Asp移向正极。

（2）电泳时，具有相同电荷的较大分子移动得慢，因为电荷/质量之比较小，因而引起每单位质量迁移的驱动力也较小。

（3）Glu移向正极；Lys移向负极，Val,Ala和Thr留在原点。

]

6、有一个A肽：

经酸解分析得知由Lys、His、Asp、Glu2、Ala、以及Val、Tyr和两个NH3分子组成。

当A肽与FDNB试剂反应后，得DNP-Asp；当用羧肽酶处理得游离缬氨酸。

如果我们在实验中将A肽用胰蛋白酶降解时，得到二种肽，其中一种（Lys、Asp、Glu、Ala、Tyr）在Ph6.4时，净电荷为零，另一种（His、Glu、以及Val）可给出DNP-His，在Ph6.4时，带正电荷。

此外，A肽用糜蛋白酶降解时，也得到二种肽，其中一种（Asp、Ala、Tyr）在pH6.4时呈中性，另一种（Lys、His、Glu2、以及Val）在Ph6.4时，带正电荷。

问A肽的氨基酸顺序如何？

[Asn—Ala—Tyr—Glu—Lys—His—Gln—Val]

7、某多肽的氨基酸顺序如下：

。

（1）如用胰蛋白酶处理，此多肽将产生几个肽？

并解释原因（假设没有二硫键存在）；

（2）在pH7.5时，此多肽的净电荷是多少单位？

说明理由（假高pKa值：

α-COOH4.0；α-NH3+6.0；Glu和Asp侧链基4.0；Lys和Arg侧链基11.0；His侧链基7.5；Cys侧链基9.0；Tyr侧链基11.0）；（3）如何判断此多肽是否含有二硫键？

假如有二硫键存在，请设计实验确定5，17和23位上的Cys哪二个参与形成？

[

（1）4个肽；

（2）-2.5单位；（3）如果多肽中无二硫键存在，经胰蛋白酶水解后应得四个肽段；如果存在一个二硫键应得三个肽段并且各肽段所带电荷不同，因此可用离子交换层析、电泳等方法将肽段分开，鉴定出含二硫键的肽段，测定其氨基酸顺序，便可确定二硫键的位置。

]

8、今有一个七肽，经分析它的氨基酸组成是：

Lys,Gly,Arg,Phe,Ala,Tyr和Ser。

此肽未经糜蛋白酶处理时，与FDNB反应不产生α-DNP-氨基酸。

经糜蛋白酶作用后，此肽断裂成两个肽段，其氨基酸组成分别为Ala,Tyr,Ser和Gly,Phe,Lys,Arg。

这两个肽段分别与FDNB反应，可分别产生DNB—Ser和DNP—Lys。

此肽与胰蛋白酶反应，同样能生成两个肽段，它们的氨基酸组成分别是Arg,Gly和Phe，Tyr,Lys,Ser,Ala。

试问此七肽的一级结构是怎样的？

[它是一个环肽，顺序为—Phe—Ser—Ala—Tyr—Lys—Gly—Arg—]

9、今有一种植物的毒素蛋白。

直接用SDS凝胶电泳分析时，它的区带位于肌红蛋白（分子量为16900）和β-乳球蛋白（分子量为37100）两种标记蛋白之间。

当这个毒素蛋白用巯基乙醇和碘乙酸处理后，在SDS凝胶电泳中仍得到一条区带，但其位置靠近标记蛋白细胞色素c（分子量为13370）。

进一步实验表明，该毒素蛋白与FDNB反应并酸水解后，释放出游离的DNP-Gly和DNP-Tyr。

关于此蛋白质的结构，你能作出什么结论？

[该毒素蛋白由二条不同的多肽链通过链间二硫键交联而成，每条多肽链的分子量各在13000左右]

10、一种酶分子量为300000，在酸性环境中可解离为二个不同成分，其中一个成分分子量为100000，另一个为500000。

大的占总蛋白的三分之二，具有催化活性；小的无活性。

用β-巯基乙醇（能还原二硫桥）处理时，大的颗粒即失去催化能力，并且它的沉降速度减小，但沉降图案上只呈现一个峰。

关于该酶的结构可作出什么结论？

[此酶含4个亚基，两个亚基的分子量为50000，两个催化亚基分子量为100000，每个催化亚基是由二条无活性的多肽链（分子量为50000）组成，彼此间由二硫键联结在一起]

11、三肽Lys—Lys—Lys的pI值必定大于它的任何一个个别基团的pKa值。

这种说法是否正确？

为什么？

[正确。

因为此三肽处于等电点时，其解离基团所处的状态应是：

C末端COO-（pKa=3.0），N末端NH3+（pKa=8.95），三个侧链3（1/3ε-NH3+）（pKa=10.53）。

因为pI时正电荷的总和必须等于负电荷的总和，所以三个ε-氨基的每一个都将是大约1/3电离。

它们在1/3电离时的pH大于它们的pKa值（10.53）]

12、α-螺旋的稳定性不仅取决于肽键间的氢键形成，而且还取决于肽链的氨基酸侧链性质。

试预测在室温下的溶液中下列多聚氨基酸哪些种将形成α-螺旋，哪些种形成其它的有序结构，哪些种不能形成有序结构，并说明理由。

（1）多聚亮氨酸pH=7.0；

（2）多聚异亮氨酸，pH=7.0；（3）多聚精氨酸，pH=7.0；（4）多聚精氨酸，pH=13；（5）多聚谷氨酸，pH=1.5；（6）多聚苏氨酸，pH=7.0。

[

（1），（4）和（5）能形成α-螺旋；

（2），（3）和（6）不能形成有序结构]

13、多聚甘氨酸的右手或左手α-螺旋中，哪一个比较稳定？

为什么？

[因为甘氨酸是一种在α-碳原子上呈对称性的特殊氨基酸，因此可以预料多聚甘氨酸的左右手α-螺旋（它们是对映体）在能量上是相当的，因而也是同等稳定的]

14、测得一种血红素蛋白质含0.426%铁，计算其最低分子量。

一种纯酶按重量算含亮氨酸1.65%和异亮氨酸2.48%，问其最低分子量为多少？

[13110；15800]

15、简要说明为什么大多数球状蛋白质在溶液中具有如下性质：

（1）在低pH时沉淀。

（2）当离子强度从零增至高值时，先是溶解度增加，然后溶解降低，最后沉淀。

（3）在给定离子强度的溶液中，等电pH值时溶解度呈现最小。

（4）加热时沉淀。

（5）当介质的介电常数因加入与水混溶的非极性溶剂而下降时，溶解度降低。

（6）如果介电常数大幅度下降以至介质以非极性溶剂为主，则产生变性。

答案：

（1）在低pH时氨基被质子化，使蛋白质带有大量的净正荷。

这样造成的分子内的电荷捍斥引起了很多蛋白质的变性，并由于疏水内部暴露于水环境而变得不溶。

（2）增加盐浓度，开始时能稳定带电基团，但是当盐浓度进一步增加时，盐离子便与蛋白质竞争水分子，因此，降低了蛋白质的溶剂化，这样又促进蛋白质分子间的极性相互作用和疏水相互作用，从而导致沉淀。

（3）蛋白质在等电点时分子间的静电斥力最小。

（4）由于加热使蛋白质变性，因此，暴露出疏水内部，溶解度降低。

（5）非极性溶剂能降低表面极性基的溶剂化作用，因此，促进蛋白质之间的氢键形成以代替蛋白质与水之间形成的氢键。

（6）低介电常数能稳定暴露于溶剂中的非极性基团，因此，促进蛋白质的伸展。

16、已知某分子量为240000的蛋白质多肽链的一些节段是α-螺旋，而另一些节段是β-折叠，其分子长度为5.06×10-5cm，求分子α-螺旋和β-折叠的百分率。

解析：

本题考点：

多肽链中α-螺旋和β-折叠的计算。

一般来讲氨基酸残基的平均相对分子质量为120，此蛋白质的相对分子量为240000，所以氨基酸残基数为240000/120=2000个。

已知α-螺旋中，每个氨基酸残基上升的高度为0.15nm，β-折叠构象中，每个氨基酸残基上升的高度为0.36nm，设此链中α-螺旋的氨基酸残基数为x，而β-折叠的氨基酸残基数为2000-x，则有：

0.15x+0.36×（2000-x）=5.06×10-5×107

0.15x+7200-0.36x=560

求得x=1019

所以α-螺旋占的百分数为

，则β-折叠的百分率为49.05%。

17、蛋白质二级结构的类型、特点及其在分子整体空间结构的作用。

答案：

蛋白质的二级结构，主要是指蛋白质多肽链骨架的折叠和盘绕方式。

天然蛋白质的二级结构主要有三种基本类型：

α-螺旋、β-折叠和β-转角。

（1）α-螺旋α-螺旋结构是Pauling和Corey在1951年提出来的，纤维状蛋白和球状蛋白中均存在α-螺旋结构，它是蛋白质主链的典型结构形式。

α-螺旋结构的特点是：

1）蛋白质多肽链主链像螺旋状盘曲，每隔3.6个氨基酸残基沿中心轴螺旋上升一圈，每上升一圈相当于向上平移0.54nm，即每个氨基酸残基向上升高0.15nm，每个氨基酸残基沿中心轴旋转达100°。

2）α-螺旋的稳定性是靠链内氢键维持的，相邻的螺圈之间形成键内氢键，氢键的取向几乎与中心轴平行，氢键是由每个氨基酸残基的N-H与前面隔3个氨基酸的C=O形成，肽链上所有的肽键都参与氢键的形成，因此α-螺旋相当稳定。

3）α-螺旋中氨基酸残基的侧键伸向外侧。

Α-螺旋有左手螺旋和右手螺旋两种，但天然蛋白质α-螺旋，绝大多数都是右手螺旋。

（2）β-折叠结构，这种结构也是Pauling等人提出来的，它是蛋白质中第二种最常见的二级结构，β-折叠是两条或多条几乎完全伸展的多肽链侧向聚集在一起，靠链间氢键连结为片层结构。

Β-折叠结构的特点是：

1）β-折叠结构中两个氨基酸残基之间的轴心距为0.35nm（反平行式）及0.325nm（平行式）。

2）肽链按层排列，靠链间维持其结构的稳定性，β-折叠结构的氢键是由相邻肽键主链上的N-H和C=O之间形成的。

3）相邻肽链走向可以平行，也可以反平行，肽链的N端在同侧为平行式，不在同侧为反平行式，（即相邻肽链的N端一顺一倒地排列），从能量角度考虑，反平行式更为稳定。

4）肽链中氨基酸列基的R侧链交替分布在片层的上下。

（3）β-转角，在球状蛋白质中存在的一种二级结构。

当蛋白多肽链以180°回折时，这种回折部分就是β-转角，它是由第一个氨基酸残基的C=O与第四个氨基酸残基的N-H之间形成氢键，产生一种不很稳定的环形结构。

由于β-转角结构，可使多肽链走向发生改变，目前发现的β-转角多数都处在球状蛋白质分子的表面，在这里改变多肽链的方向阻力比较小。

18、测定氨基酸的氨基态氮，使有NaOH标准溶液测定氨基酸的羧基，再直接求出氨基态氮的量。

试问在NaOH滴定前为什么要加甲醛？

解析：

本题考点：

氨基酸的甲醛滴定。

氨基酸虽然是一种两性电解质，既是酸又是碱，但是它却不能直接用酸、碱滴定来进行定量测定。

这是因为氨基酸的酸、碱滴定的等当点pH或过高（12-13）或过低（1-2），没有适当的指示剂可被选用。

然而向氨基酸溶液中加入甲醛，可以降低氨基的碱性，甲醛与氨基酸的氨基反应如下图所示：

答案：

先加入过量的甲醛，用标准氢氧化钠滴定时，由于甲醛与氨基酸的NH2作用形成-NH·CH2OH，-N（CH2OH）2等羟甲基衍生物，而降低了氨基的碱性，相对地增强了氨基的酸性解离，使pK减少2-3个pH单位。

使滴定终止由pH12左右移至9附近，亦即达到酚酞指示剂的变色区域。

18、用lmol酸水解五肽，得2个Glu，1个Lys，用胰蛋白酶裂解成二个碎片，在pH=7时电泳，碎片之一移向阳极，另一向阴极；碎片之一用DNP水解得DNP一谷氨酸；用胰凝乳蛋白酶水解五肽产生两个二肽和一个游离的Glu，写出五肽顺序。

解析：

（1）lmol酸水解生成2个Glu，1个Lys，由于酸水解时，色氨酸，易遭到破坏，且天气酰胺和谷氨酰胺和谷按酰胺基常被水解，所以从回收的氨基酸情况可以推测该五肽的氨基酸组成为2Glx、2Trp、1Lys。

（2）用胰蛋白酶水解五肽，得到两个肽段，由于该酶专一性很强，它只断裂Lys或Arg的羧基参与形成的肽链，所以，Lys必定不是末端氨基酸，即…Lys…

（3）用胰凝乳蛋白酶水解原五肽生成两个肽段及游离的Glu，因为胰凝乳蛋白酶可水解Trp的羧基形成的肽键，所以可推知该肽的氨基酸序列为：

X-Trp-Y-Trp-Glu。

（4）综合上面的推测可知该肽的序列为X-Trp-Lys-Trp-Glu。

（5）该肽与DNP作用水解生成DNP-Glu，而DNP一般来说是与N末端的-氨基发生反应的，所以说明该五肽为Glx-Trp-Lys-Trp-Glu。

（6）用胰蛋白酶水解五肽得两个肽段，即为GlxTrpLys和TrpGlu，在pH7.0时电泳，Trp-Glu带负电荷，向阳极移动，根据题意GlxTrpLys应向阴极移动，说明Glx是Gln而不是Glu。

综上所述，该五肽应为：

Gln-Trp-Lys-Trp-Glu。

19、简述血红蛋白的结构及其结构与功能的关系。

答案：

血红蛋白是一种寡聚蛋白质，由四个亚基组成，即2个α亚基和2个β亚基，每个亚基均有一个血红素，且有与氧结合的高亲和力，每个血红素都可以和一个氧分子结合。

当四个亚基组成血红蛋白后，其结合氧的能力就会随着氧分压及其他因素的改变而改变。

这种由于血红蛋白分子的构象可以生一定程度的变化，从而影响了血红蛋白与氧的结合能力。

另外，血红蛋白分子上残基若发生变化，也会影响其功能的改变，如血红蛋白β-链中的N未端第六位上的谷氨酸若被缬氨酸取代，就会产生镰刀形红细胞贫血症，使红细胞不能正常携带氧。

20、列出蛋白质二级结构和超二级结构的基本类型。

答案：

①天然蛋白质的二级结构主要有α-螺旋、β-折叠和β-转角；②超二级结构有三种基本组合形式：

αα、βαβ和βββ。

21、根据蛋白质的理化性质，详细阐述蛋白质分离提纯的主要方法。

分离提纯某一特定蛋白质的一般程序可以分为前处理、粗分级和细分级在三步。

第一步是前处理（pretreatment）。

分离提纯某一蛋白质，首先要求把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来，并保持原来的天然状态，不丢失生物活性。

为此，应根据不同的情况，选择适当的方法，将组织和细胞破碎。

组织细胞破碎以后，选择适当的介质（一般用缓冲液）把所要的蛋白质提取出来。

第二步是粗分级（roughfractionation）当蛋白质混合物提取液获得后，选用一套适当的方法，将所要的蛋白质与其他杂蛋白质分离开业。

一般这一步的分级用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法。

这些方法的特点是简便、处理量大，既能除去大量杂质，又能浓缩蛋白质溶液。

第三步是细分级（rinefractionation），也就是样品的进一步提纯。

样品经粗分级以后，一般体积较小，杂蛋白大部分已被除去。

进一步提纯，一般使用层析法包括凝胶过滤，离子交换层析，吸附层析以及亲和层析等。

必要时还选择电泳法，包括区带电泳、等电聚焦等作为最后的提纯步骤。

用于细分级的一般规模较小，但分辨率高。

结晶是蛋白质分离提纯的最后步骤。

蛋白质纯度越高，溶液越浓就越容易得到结晶。

答案：

蛋白质由氨基酸构成，一部分性质与氨基酸相同，如两性游离和等电点，某些呈色反应等。

但蛋白质是由氨基酸借肽键构成的高分子化合物，又有不同于氨基酸的性质，易沉降、不易透过半透膜、变性、沉淀凝固等。

通常可利用蛋白质的理化性质和生物学性质来纯化蛋白质。

而分离纯化蛋白质又是研究单个蛋白质结构与功能的先决条件。

①蛋白质分子颗粒表面多为亲水基团，因而通过吸水分子形成一层消化膜，这是蛋白质胶体稳定的重要因素之一。

盐析就是利用（NH4）2SO4、NaCl等中性盐破坏蛋白质的水化膜，使之从溶液中析出，使不同性质的蛋白质初步得到分离。

②蛋白质分子量较大，不易通过半透膜，故可利用透析的方法将其与小分子化合物分开。

人们常用透析法去除蛋白质溶液中的盐等小分子为进一步纯化作准备。

③凝胶过层析法是一种根据各种蛋白质分子量的差异进行分离纯化蛋白质的方法。

含有各种分子量的蛋白质溶液，在通过带有小孔的葡聚糖颗粒所填充的长柱时，大分子量蛋白质不能进入葡聚糖颗粒而直接流出，分子量小的蛋白质则进入颗粒而流出滞后，这样就将蛋白质分成不同分子量的若干组分。

④蛋白质具有两性游离的特性，在某一pH条件下，蛋白质颗粒表面带有电荷，可利用电泳法和离子交换层析法将蛋白质离纯化。

蛋白质被分离纯化后，可用于作一级结构及空间结构的分析。

22、牛血清蛋白质含Trp0.58%（重量比），已知TrpMr=204，求该蛋白质最低相对分子质量。

解析：

因为Trp残基/牛血清蛋白Mr=0.58%，则有：

蛋白质Mr=Try残基/0.58%，而TryMr=204，所以有：

蛋白质Mr=（204-18）/0.58%=32069。

23、请例举三种蛋白质分子量的测定方法，并简过其原理。

答案：

测定蛋白质分子量的方法很多，例如渗透、扩散速率，沉降分析等，我们这里简单地介绍几种分子量的测定方法。

（1）沉降法：

又叫超速离心法，蛋白质溶液经高速离心时，由于比重关系，蛋白质分子趋于下沉，沉降速度与蛋白质颗粒大小成正比，利用m=RTS/D（1-Vρ）即可求出其分子量m。

（2）凝胶过滤法：

又称分子排阻层析或分子筛层析法，此法是在层析柱中装入葡聚糖凝胶，这种凝胶颗料中具有大量微孔，这些微孔只允许较小的分子进入胶粒，而大于胶粒微孔的分子则不能进入而被排阻。

当用洗脱液洗脱时，被排阻的分子质量大的蛋白质先被洗脱下来，分子质量小的后下来，根据待测样品的洗脱体积可以求出其分子量。

（3）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法：

蛋白质在SDS聚丙烯酰胺凝胶中电泳的速度取决于分子质量的大小，根据蛋白质分子在电泳中的相对迁移率和分子质量的对数成正比关系，可以求出蛋白质分子量。

24、凝胶过滤或分子筛层析是一种以蛋白质大小为基础的分离蛋白质的方法。

蛋白质溶液放在填有高度水化的交联聚合材料（如Sephadex一交联葡聚糖）细珠的柱上。

不同大小的蛋白质穿过水化细珠微孔的能力不同。

较小的蛋白质要比较大的容易穿过微孔，因而较小的蛋白质过柱的速度要比较大的慢。

分离蛋白质的第二种技术是园盘电泳。

它使蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶支柱物中受到电场的作用。

在变性剂十二烷基硫酸钠[SDS：

[CH3（CH2）]11SO4Na2]存在下进行电泳时，蛋白质分子按大小被分离开来，较小的分子移动得最快。

（SDS可使蛋白质变性，并与它们进行非特异性结合，给出一个恒定的电荷质量比）。

这两种方法都是根据大小对蛋白质进行分级分离的。

并且都使用交联聚合物作为支持介质。

为什么在凝胶过程中小分子比大分子更易滞留，而在SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳中情况恰是相反？

答案：

凝胶过滤是利用多孔材料的分子筛。

每一个交联葡聚糖珠的交联基质都把大的蛋白质排阻在外，而允许小的蛋白质进入。

因此，大的蛋白质必须在这些珠之间通过，也就是通过柱体积减去珠体积（此差值称这为空柱体积），小的蛋白质则通过总的柱体积。

蛋白质颗粒越大，它在珠内所耗的时间越少，因此，洗脱得越快。

电泳用的聚丙烯酰胺凝胶是以单体丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺（交联剂）为材料，在催化剂的作用下，聚合成含酰胺基侧链的脂肪族长链，在相邻长链之间通过甲撑桥连接成三维网状结构物质。

此三维网状结构物质相当于一个大的珠；这里没有珠之间的空隙，所有蛋白质必须通过交联基质。

蛋白质越小，它通过交联基质则越容易，因此移动得越迅速。

25、将赖氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、酷氨酸和丙氨酸的混合物在高pH下放入阳离子交换树脂中，在用连续降低pH的洗脱剂洗脱，试预测它们的洗脱顺序。

查表可知，6种氨基酸pI的排列顺序是：

Asp

（2.98）（3.22）（5.66）（6.02）（9.74）（19.76）

它们△pH值的排列顺序为：

Asp>Glu>Tyr>Ala>Lys>Arg

故它们被洗脱的先后顺序为：

AspGluTyrAlaLysArg

26、某一条肽经链酸水解组成分析含5种氨基酸，其N端非常容易环化。

经CNBr处理后得一游离碱性氨基酸，Pauly反应阳性。

若用胰蛋白酶作用则得两个肽段；其一为坂口反应阳性，另一个在280mm有强的光吸收，并呈Millon氏阳性反应。

求此肽的氨基酸排列顺序，并指出它的等电点（pI）应该是大于、等于或小于pH7。

答案：

其N端非常容易环化故是谷氨酸残基。

因Pauly反应阳性，故表明有组氨酸或酪氨酸残基；而C端是个碱性残基，故这残基应是组氨酸。

经CNBr处理后得一游离碱性氨基酸，因此，在C端的倒数第二位是一个甲硫氨酸残基。

且胰蛋白酶作用得两个肽段：

其一为坂口反应阳性，则说明肽链中间的一个碱性残基应是精氨酸残基；另一个肽段在280nm有强的光吸收，并呈Millon氏阳性反应，这提示了在精氨酸C端一侧的肽段中有酷氨酸。

综上所述，这五肽的序列应是谷氨酰一精氨酰一酪氨酰一甲硫氨酰一组氨酸。

这一肽段中有两个碱性残基，而酸性残基只有一个，因此，此肽段的等电点应大于7。

27、有人纯化了一个未知肽，其氨基酸组成为：

Asp1，Ser1，Gly1，Ala1，Met1Phel和lys2，又做了一系列分析，结果如下：

（1）FDNB与之反应再酸水解后得DNP-Ala

（2）胰凝乳蛋白酶（CT）消化后，从产物中分出一个纯四肽，其组成为：

Asp1，

Gly1，Lys1，Met1，此四肽的FDNB反应降解产物为DNP-Gly。

（3）胰蛋白酶（T）消化八肽后又可得到组成分别为Lys1，Alal，Serl及Phel，Lys1，Gly1的两个三肽及一个二肽。

此二肽被CNBr处理后游离出自由天冬氨酸。

请列出八肽全顺序并简示你推知的过程。

答案：

由结果

（1）可得知此肽的N端是Ala；由结果

（2）可知C端四肽的序列是Gly-Lys-Met-Asp；由结果（3）可知N端的三肽序列为Ala-Ser-Lys，中间的肽段序列为Phe-Gly-Lys，二肽被CNBr处理后游离出自由天接着氨酸，这提示了这二肽的序列为Met-Asp，而且没有碱性残基，因此是整个肽链的C端二肽。

完整的八肽序列为：

Ala-Ser-Lys-Phe-Gly-Lys-Met-Asp.

T↓CT↓T↓

Ala-Ser-Lys-Phe-Gly-Lys-Met-Asp

DNP-AlaDNP-Gly

28、蛋白质化学研究中常用的试剂有下列一些CNBr，尿素，β巯基乙醇，胰蛋白酶，过甲酸，丹磺酰氯，6mol/LHCL，茚三酮，异硫氰酸苯酯和胰凝乳蛋白酶等。

为完成下列各项试验，请回答每一项的最适试剂是什么？

（1）一个小肽的氨基酸顺序的测定

（