生物化学实验报告137030032.docx

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生物化学实验报告137030032

孝感学院生命科学技术学院实验报告

专业:

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姓名:

分数:

实验二油脂酸价的测定

一、目的与要求

初步掌握测定油脂酸价的原理和方法;了解测定油脂酸价的意义。

二、实验原理

油脂在空气中暴露过久,部分油脂会被水解产生游离脂肪酸和醛等物质,并且这些物质具有刺激性气味,使油脂产生酸价。

酸败的程度使以水解产生的游离脂肪酸的多少为指标的,常以酸价或者是酸值来表示。

同一油脂若酸价高,则说明水解产生的游离脂肪酸就多。

酸价是指中和1g油脂中游离脂肪酸所需的氢氧化钾的毫克数。

酸价越高,油脂的质量也越差。

三、主要仪器、实验材料和试剂

1.锥形瓶(250mL)3个;2.量筒(50mL)1支;3.碱式滴定管1支;4.花生油、菜油、芝麻油等;5.乙醇-乙醚混合液(1:

1,V/V);6.0.1%KOH(1克KOH溶于1000mL纯水中)。

四、操作步骤

1.准确称取1~2g油脂于250mL锥形瓶中。

2.在瓶内加入乙醇-乙醚混合液50mL,充分振荡,使油脂样品完全溶解成透明溶液。

待油样完全溶解后,加入1%酚酞指示剂3~5滴,立即用0.1%KOH标准溶液滴定至溶液成微红色(放置30S内不褪色)为终点,并记录用去的KOH的体积,并按下式进行计算。

酸价=2(V2-V1)/W

V2:

滴定油样时耗用氢氧化钾溶液的毫升数

V1:

滴定空白对照耗用氢氧化钾溶液的毫升数

W:

油样重(g)

注:

滴定过程中如出现混浊或分层,表明由碱液带进水过多,乙醇量不足以使乙醚与碱溶液互溶。

一旦出现此现象,可补加乙醇,促使均一相体系的形成。

五、实验结果

油脂名称

起始刻度

终点刻度

体积(mL)

酸价

备注

空白对照

六、思考题

请对你的实验结果进行分析。

 

批阅教师:

年月日

孝感学院生命科学技术学院实验报告

专业:

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分数:

实验三蛋白质的提取及浓度测定(紫外吸收法)

一、目的与要求

掌握蛋白质的提取方法;学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理;熟练掌握紫外分光光度计的使用方法。

二、实验原理

大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液,少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中,因些,可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。

由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸,因此蛋白质具有吸收紫外光的性质,最大吸收峰在280nm波长处。

在此波长范围内,蛋白质溶液的光密度OD280nm与其浓度呈正比关系,可作定量测定。

三、实验材料、主要仪器和试剂

1.试验材料:

萌发3天的小麦种子

2.主要仪器

(1)紫外分光光度计,

(2)离心机(3)试管与试管架,(4)刻度吸量管(5)研钵(6)100mL容量瓶

3.试剂:

标准牛血清蛋白溶液:

准确称取经凯氏定氮法校正的结晶牛血清蛋白,配制成浓度为1mg/mL(0.5克标准牛血清蛋白纯水定容至500mL)的溶液。

四、操作步骤

1.蛋白质(淀粉酶)的提取

称取1g萌发3天的小麦种子(芽长约1cm),置于研钵中,加入少量石英砂和2mL蒸馏水,研磨匀浆。

将匀浆倒入离心管中,用6mL蒸馏水分次将残渣洗入离心管。

提取液在室温下放置提取15~20min,每隔数分钟搅动1次,使其充分提取。

然后在3,000r/min转速下离心10min,将上清液倒入100mL容量瓶中,加蒸馏水定容至刻度,摇匀,即为蛋白质原液,用于蛋白质浓度的测定。

2.标准曲线制作

按表1分别向每支试管内加入各种试剂,混匀。

以光程为1cm的石英比色杯,在280nm波长处测定各管溶液的光密度值OD280nm。

以蛋白质浓度为横坐标,光密度值为纵坐标,绘出标准曲线。

 

批阅教师:

年月日

 

表1蛋白质标准曲线制作

管号

标准蛋白质溶液(mL)

蒸馏水(mL)

蛋白质浓度(mg/mL)

OD280nm

1

0

4

0

 

2

0.5

3.5

0.125

 

3

1.0

3.0

0.25

 

4

1.5

2.5

0.375

 

5

2.0

2.0

0.50

 

6

2.5

1.5

0.625

 

7

3.0

1.0

0.75

 

8

4.0

0

1.0

 

 

3.样品测定

取提取的蛋白质溶液,按上述方法测定280nm的光密度,并从标准工作曲线上查出提取蛋白质溶液的浓度。

若提取蛋白质溶液的浓度大于2.0,超出测量范围,则稀释后再测,计算蛋白质浓度时乘以稀释倍数。

蛋白质浓度=

五、思考题

1.为何要在280nm波长下测定蛋白质浓度?

在其它波长下测定可以吗?

2.如果考虑核酸的存在,蛋白质浓度的实际的值比测量值是大还是小?

为什么?

孝感学院生命科学技术学院实验报告

专业:

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分数:

实验四淀粉酶活力的测定

一、目的与要求

学习和掌握测定淀粉酶(包括α-淀粉酶和β-淀粉酶)活力的原理和方法。

二、实验原理

淀粉是植物最主要的贮藏多糖,也是人和动物的重要食物和发酵工业的基本原料。

淀粉经淀粉酶作用后生成葡萄糖、麦芽糖等小分子物质而被机体利用。

淀粉酶主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶两种。

α-淀粉酶可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶。

β-淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解,每次水解下一分子麦芽糖,又被称为糖化酶。

淀粉酶催化产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水杨酸还原,生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。

用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线,用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量,以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。

淀粉酶存在于几乎所有植物中,特别是萌发后的禾谷类种子,淀粉酶活力最强,其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。

两种淀粉酶特性不同,α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下迅速钝化。

β-淀粉酶不耐热,在70℃15min钝化。

根据它们的这种特性,在测定活力时钝化其中之一,就可测出另一种淀粉酶的活力。

本实验采用加热的方法钝化β-淀粉酶,测出α-淀粉酶的活力。

在非钝化条件下测定淀粉酶总活力(α-淀粉酶活力+β-淀粉酶活力),再减去α-淀粉酶的活力,就可求出β-淀粉酶的活力。

三、实验材料、主要仪器和试剂

1.实验材料

萌发的小麦种子(芽长约1cm)

2.仪器

(1)离心机

(2)离心管(3)研钵(4)电炉(5)容量瓶:

50mL×1,100mL×1

(6)恒温水浴(7)20mL具塞刻度试管×13(8)试管架(9)刻度吸管:

2mL×3,1mL×2,10mL×1(10)分光光度计

3.试剂(均为分析纯)

(1)标准麦芽糖溶液(1mg/mL):

精确称取100mg麦芽糖,用蒸馏水溶解并定容至100mL。

(2)3,5-二硝基水杨酸试剂:

精确称取3,5-二硝基水杨酸1g,溶于20mL2mol/LNaOH溶液中,加入50mL蒸馏水,再加入30g酒石酸钾钠,待溶解后用蒸馏水定容至100mL。

盖紧瓶塞,勿使CO2进入。

若溶液混浊可过滤后使用。

(3)0.1mol/LpH5.6的柠檬酸缓冲液

A液:

(0.1mol/L柠檬酸):

称取C6H8O7·H2O21.01g,用蒸馏水溶解并定容至1L。

B液:

(0.1mol/L柠檬酸钠):

称取Na3C6H5O7·2H2O29.41g,用蒸馏水溶解并定容至1L。

取A液55mL与B液145mL混匀,既为0.1mol/LpH5.6的柠檬酸缓冲液。

(4)1%淀粉溶液:

称取1g淀粉溶于100mL0.1mol/LpH5.6的柠檬酸缓冲液中。

批阅教师:

年月日

四、操作步骤

1.麦芽糖标准曲线的制作

取7支干净的具塞刻度试管,编号,按表1加入试剂:

表1麦芽糖标准曲线制作

试剂

管号

1

2

3

4

5

6

7

麦芽糖标准液(mL)

0

0.2

0.6

1.0

1.4

1.8

2.0

蒸馏水(mL)

2.0

1.8

1.4

1.0

0.6

0.2

0

麦芽糖含量(mg)

0

0.2

0.6

1.0

1.4

1.8

2.0

3,5-二硝基水杨酸(mL)

2.0

2.0

2.0

2.0

2.0

2.0

2.0

吸光度值

摇匀,置沸水浴中煮沸5min。

取出后流水冷却,加蒸馏水定容至20mL。

以1号管作为空白调零点,在540nm波长下比色测定光密度。

以麦芽糖含量为横坐标,光密度为纵坐标,绘制标准曲线。

 

2.淀粉酶液的制备

称取1g萌发3天的小麦种子(芽长约1cm),置于研钵中,加入少量石英砂和2mL蒸馏水,研磨匀浆。

将匀浆倒入离心管中,用6mL蒸馏水分次将残渣洗入离心管。

提取液在室温下放置提取15~20min,每隔数分钟搅动1次,使其充分提取。

然后在3000r/min转速下离心10min,将上清液倒入100mL容量瓶中,加蒸馏水定容至刻度,摇匀,即为淀粉酶原液,用于α-淀粉酶活力测定。

吸取上述淀粉酶原液10mL,放入50mL容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀,即为淀粉酶稀释液,用于淀粉酶总活力的测定。

3.酶活力的测定:

取6支干净的试管,编号,按表2进行操作。

 

表2酶活力测定取样表

操作项目α淀粉酶活力测定α+β-淀粉酶活力测定

Ⅰ-1Ⅰ-2Ⅰ-3Ⅱ-4Ⅱ-5Ⅱ-6

淀粉酶原液(mL)1.01.01.0000

钝化β-淀粉酶置70℃水浴15min,冷却

淀粉酶稀释液(mL)0001.01.01.0

3,5-二硝基水杨酸(mL)2.0002.00.0

预保温将各试管和1%淀粉溶液分别置于40℃恒温水浴中保温10min

1%淀粉溶液(mL)1.01.01.01.01.01.0

保温在40℃恒温水浴中准确保温5min

3,5-二硝基水杨酸(mL)02.02.002.02.0

将各试管摇匀,置沸水浴中煮沸5min。

取出后流水冷却,加蒸馏水定容至20mL。

以1号管(做标准曲线时用过的)作为空白调零点,在540nm波长下比色测定光密度,记录测定结果。

管号

Ⅰ-1

Ⅰ-2

Ⅰ-3

Ⅱ-4

Ⅱ-5

Ⅱ-6

吸光度

麦芽糖含量

五、结果计算

计算Ⅰ-2、Ⅰ-3光密度平均值与Ⅰ-1光密度之差,在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量(mg),按下列公式计算α-淀粉酶的活力。

计算Ⅱ-5、Ⅱ-6光密度平均值与Ⅱ-4光密度之差,在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量(mg),按下式计算(α+β)淀粉酶总活力(单位同上)。

(α+β)淀粉酶总活力

β-淀粉酶活力=(α+β)淀粉酶总活力-α-淀粉酶活力=

六、思考题

1.为什么要将Ⅰ-1、Ⅰ-2、Ⅰ-3号试管中的淀粉酶原液置70℃水浴中保温15min?

2.为什么要将各试管中的淀粉酶原液和1%淀粉溶液分别置于40℃水浴中保温?

孝感学院生命科学技术学院实验报告

专业:

学号:

姓名:

分数:

实验五 醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质

一、目的

学习醋酸纤维薄膜电泳的操作,了解电泳技术的一般原理。

二、原理

带电质点在电场中移动的现象称为电泳。

电泳有很多类型,如,纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、纤维素或淀粉粉末电泳、淀粉凝胶电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。

任何一种物质的质点,由于其本身在溶液中的解离或由于其表面对其他带电质点的吸附,会在电场中向一定的电极移动。

例如,氨基酸、蛋白质、酶、激素、核酸及其衍生物等物质都具有许多可解离的酸性和碱性基团,它们在溶液中会解离而带电。

不同的质点在同一电场中泳动速度不同,据此可将不同带电物质分开。

醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。

醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成,它具有均一的泡沫样的结构,厚度仅120微米,有强渗透性,对分子移动无阻力,作为区带电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少、应用范围广、分离清晰、没有吸附现象等优点。

目前已广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白和同功酶的分离及用在免疫电泳中。

三、器材及试剂

1.器材:

①醋酸纤维薄膜(2×8cm)

⑥玻璃板

②常压电泳仪

⑦竹镊

③点样器(盖玻片)

⑧白磁反应板

④培养皿(染色及漂洗用)

⑨人血清或鸡血清

⑤粗滤纸

2.试剂:

①巴比妥缓冲液(PH8.6):

巴比妥2.76克,巴比妥纳15.45克,加水至1000毫升。

②染色液:

氨基黑10B0.25克,甲醇50毫升,冰醋酸10毫升,水40毫升(可重复用)。

③漂洗液:

含甲醇或乙醇45毫升,冰醋酸5毫升,水50毫升。

④透明液:

含无水乙醇7份,冰醋酸3份。

四、操作步骤

1.浸泡:

用镊子取醋酸纤维薄膜1张(识别出光泽面与无光泽面,并在无光泽面角上用铅笔做上记号)放在缓冲液中浸泡20分钟。

2.点样:

把膜条从缓冲液中取出,夹在两层粗滤纸内吸干多余的液体,然后平铺在玻璃板上(无光泽面朝上),将点样器先在白磁板上的血清中沾一下,再在膜条一端2—3厘米处轻轻地水平落下并随即提起,这样即在膜条上点上了细条状的血清样品。

批阅教师:

年月日

+

膜条

样品

3.电泳:

在电泳槽内加入缓冲液,使两个电极槽内的液面等高,将膜条平悬于电泳槽支架的滤纸桥上。

(先剪裁尺寸合适的滤纸条,取双层滤纸条附着在电泳槽的支架上,使它的一端与支架的前沿对齐,而另一端浸入电极槽的缓冲液内。

用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡,使滤纸紧贴在支架上,即为滤纸桥。

它是联系醋酸纤维薄膜和两极缓冲液之间的“桥梁”。

)膜条上点样的一端靠近负极。

盖严电泳室。

通电。

调节电压至160V,电流强度0.4—0.7毫安/厘米膜宽,电泳时间约为60分钟。

 

4.染色:

电泳完毕后将膜条取下并放在染色液中浸泡10分钟。

5.漂洗:

将膜条从染色液中取出,置漂洗液中漂洗数次至无蛋白区底色脱净为止,可得色带

清晰的电泳图谱。

 

6.定量(了解):

有两种方法

(1)将上述漂净的薄膜用滤纸吸干,剪下各种蛋白质色带,分别浸于4.0ml0.4mol·L-1NaOH溶液中(37℃)5—10分钟,色泽浸出后,比色(590nm)。

设各部分的光密度分别为:

OD白、ODα1、ODα2、ODβ、ODγ。

则光密度总和(OD总)为:

OD总=OD白+ODα1+ODα2+ODβ+ODγ

白蛋白%=

×100α1球蛋白%=

×100α2球蛋白%=

×100

β球蛋白%=

×100γ球蛋白%=

×100

(2)把薄膜放在滤纸上用电吹风吹干,待薄膜完全干燥后,浸入透明液中约5—10分钟,取出,平贴于干净玻璃片上,自然干燥或用电吹风冷风吹干,即得背景透明的电泳图谱,可用刀片刮开并从玻板上取下图谱。

能用光密度计测定各蛋白斑点。

此图谱可长期保存。

五、思考题

1.点样端为何放在负极?

2.实验中应注意哪些事项?

孝感学院生命科学技术学院实验报告

专业:

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分数:

实验六氨基酸的分离鉴定――纸层析法

一、实验目的

通过氨基酸的分离,学习纸层析法的基本原理及操作方法。

二、实验原理

纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。

层析溶剂由有机溶剂和水组成。

物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值(比移)来表示的:

Rf=原点到层析中心的距离/原点到容剂前沿的距离

在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。

Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。

本实验利用纸层析法分离氨基酸。

三、器材

1、层析缸2、毛细管3、喷雾器4、培养皿5、小烧杯6、长颈漏斗7、层析滤纸(新华一号)8、电吹风

四、试剂

1、扩展剂正丁醇:

88%甲酸:

水=15:

2.5:

2.5(体积比),平衡溶剂与扩展剂相同。

每组配制40mL。

2、氨基酸溶液0.5%的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液(各组份浓度均为0.5%)。

3、显色剂50~l00mL0.1%水合茚三酮正丁醇溶液。

五、操作

1.将盛有扩展剂10mL的小烧杯和培养皿置于密闭的层析缸中。

2.戴手套取层析滤纸(长22cm、宽14cm)一张。

在纸的一端距边缘2~3cm处用铅笔划一条直

线,在此直线上每间隔2.5cm作一记号。

3.点样:

用毛细管将各氨基酸样品分别点在这5个位置上,干后重复点一次,直径最大不超过3mm。

缝成筒状,两边不能接触。

点样面朝外,点样端朝下,盖上层析缸盖,平衡约10~30分钟。

4.展层 用长颈漏斗,扩展剂的液面需低于点样线1cm。

溶剂扩展至滤纸上沿约5厘米时,取出滤纸,用铅笔标出溶剂前沿界线,干燥。

5.显色 用0.1%茚三酮丙酮溶液均匀浸透,用热风吹干。

脯氨酸、羟脯氨酸产生黄色物质外,所有α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮产生兰紫色物质。

批阅教师:

年月日

6.计算各种氨基酸的Rf值。

六、实验结果

各种氨基酸的Rf值:

赖氨酸

脯氨酸

缬氨酸

苯丙氨酸

亮氨酸

Rf值

七、思考题

1.实验过程中切勿用手直接接触滤纸和显色剂,为什么?

2.点样过程中必须在第一滴样品干后再点第二滴,为什么?

孝感学院生命科学技术学院实验报告

专业:

学号:

姓名:

分数:

实验七基因组DNA的快速提取---碘化钾法

一、实验目的

了解碘化钾法提取动物组织基因组DNA的原理;掌握DNA提取的相关操作技术。

二、实验原理

快速、经济地从血液、组织或培养细胞中得到高产量、高纯度的DNA对于基因研究非常重要。

目前国内外基因组DNA的提取方法有传统的蛋白酶K消化法、尿素法、氯化锌法、辛酸法等,这些方法存在操作步骤繁杂或者使用蛋白酶,且国内许多实验室不易得到方法中使用的试剂。

高浓度碘化钾可直接将细胞膜、核膜破坏、使DNA释放出来,然后用异丙醇沉淀DNA。

实验表明,KI的浓度对DNA的提取效率有影响,5mol/L的KI提取DNA效果较好。

KI法操作简便,不用价格较高的蛋白酶K。

DNA丢失少。

该方法提取的DNA与经典的蛋白酶K法提取的DNA比较电泳结果基本一致。

三、实验材料、试剂及主要器材

1.实验材料

冷冻的新鲜动物肝脏。

2.试剂

氯仿/异戊醇(24∶1):

异戊醇21mL加入到500mL的氯仿试剂瓶中,混匀;5mol/L碘化钾:

(41.5克碘化钾溶于50mL纯水中);0.9%NaCl:

4.5克NaCl溶于500mL纯水中;无水乙醇。

3.主要器材

台式高速(冷冻)离心机、移液器(10,100,1000µL),旋涡混合器、Eppendorf管等。

四、实验步骤

1.取黄豆粒大小冷冻肝组织于EP管中(EP管上写上自己学号的最后两位数),有眼科剪捣碎;

2.加50µL5mol/LKI,旋涡振荡30s,静置3min;

3.加0.9%NaCl375µL,氯仿/异戊醇(24:

1)600µL,充分振荡10min,10000r/min离心5min;

4.吸取水相层(上清)于另一Ependorf管中,加-20度预冷乙醇1000µL,轻轻混匀(此时应能看到DNA的絮状沉淀),12000r/min离心5min弃上清;

5.加冷无水乙醇1000µL,12,000r/min离心3min弃净乙醇,待干(可在37℃烘干约10min);以50µL无菌双蒸水溶解DNA,备用。

2.加50µL5mol/LKI,旋涡振荡30s,将沉淀物混匀3min;

3.加0.9%NaCl250µL,氯仿/异戊醇(24∶1)375µL,充分振荡10min,10000r/min离心5min;

4.吸取水相层(上清)于另一Ependorf管中,加-20度预冷乙醇(-20度)300µL,轻轻混匀(此时应能看到DNA的絮状沉淀),-20度冰箱静置5min后12000r/min离心5min弃上清;

批阅教师:

年月日

5.加冷无水乙醇1000µL,12,000r/min离心3min弃净乙醇,待干(可在37℃烘干约10min);以50µL无菌双蒸水溶解DNA,备用。

五、思考题

1)在DNA提取过程中乙醇的作用是什么?

为什么用-20度预冷的乙醇效果更好?

2)实验所用的EP管和枪头等需要高温灭菌吗,为什么?

孝感学院生命科学技术学院实验报告

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姓名:

分数:

实验八琼脂糖凝胶电泳技术――DNA样品检测

一、实验目的

学习与掌握琼脂糖凝胶电泳的技术方法,利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA含量以及分子量,分离不同大小DNA片段。

二、实验原理

琼脂糖凝胶电泳是以琼脂糖凝胶为支撑物的区带电泳。

不同大小、不同形状和不同构象的DNA分子在相同的电泳条件下(如凝胶浓度、电流、电压、缓冲液等),有不同的迁移率,所以可通过电泳使其分离。

凝胶中的DNA可与荧光染料溴化乙锭(EB)结合,在紫外灯下可看到荧光条带,籍此可分析实验结果。

三、试剂配制

1.5×TBE:

Tris54g;硼酸27.5g;0.5MEDTA(pH8.0)20mL;加双蒸水至1L。

用时5倍稀释。

2.EB:

用水配制成10mg/mL的贮存液,分装,避光,4℃保存(1g溴乙锭于100mL水中)。

3.6×加样buffer:

0.25%溴酚蓝;40%(W/V)蔗糖;溶于水中,贮存于4℃。

四、实验操作

1.胶模水平放置胶模。

2.制胶量取200mL1×TBE缓冲液倒入三角烧瓶中,称取1.6克琼脂糖加入,在微波炉上加热至全熔(清澈透明)。

凝胶加热时间不宜过长,以免蒸干。

3.倒胶用琼脂糖封好胶模,待凝胶冷至50℃左右时(手感容器能耐受),缓缓倒入制胶模中,迅速放好梳子。

凝胶的厚度在3~5mm之间。

避免产生气泡,尤其梳子周围不能有气泡,若有气泡,可用吸管小心吸去。

4.凝胶条件凝胶通常需要在室温中放置20~30分钟。

5.电泳缓冲液凝胶完全凝固后,将凝胶放入电泳槽中(点样孔在负极),加入1×TBE电泳缓冲液,液面应高出凝胶表面1mm。

6.拔梳子小心移去梳子和隔离板,保持点样孔完整。

7.点样用移液器取1-2µL配制好的LoadingBuffer,分别与需要电泳的样品或Marker混合(5-10µL),点样,记录点样次序。

注意:

每次电泳每块胶需留一孔点DNAmarker。

加样时Tip头不必插入孔中,可对准加样孔,在孔的上方加样,样品会

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