基因工程原理练习题及其答案.docx
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基因工程原理练习题及其答案
基因工程原理练习题及其答案
一、填空题
1.基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。
2.基因工程的两个基本特点是:
(1)____________,
(2)___________。
3.基因克隆中三个基本要点是:
___________;_________和__________。
4.碱裂解提取溶液I中的葡萄糖的作用________________、_______________、______________________________。
5.同一质粒不同构型在电泳过程中迁移速率为。
6.部分酶切可采取的措施有:
(1)____________
(2)___________(3)___________等。
7.第一个分离的限制性内切核酸酶是___________;而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。
8.限制性内切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同,但识别的序列都是_________,它们属于_____________。
9.DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段,具有两种酶活性:
(1)____________;
(2)________________的活性。
10.为了防止DNA的自身环化,可用_____________去双链DNA__________________。
11.EGTA是____________离子螯合剂。
12.测序酶是修饰了的T7DNA聚合酶,它只有_____________酶的活性,而没有_______酶的活性。
13.切口移位(nicktranslation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。
14.欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式,通常可采用_________或_______________。
15.反转录酶除了催化DNA的合成外,还具有____________的作用,可以将DNA-
RNA杂种双链中的___________水解掉。
16.基因工程中有3种主要类型的载体:
_______________、_____________、______________。
17.就克隆一个基因(DNA片段)来说,最简单的质粒载体也必需包括三个部分:
_______________、_____________、______________。
另外,一个理想的质粒载体必须具有低分子量。
18.琼脂糖凝胶的分辨力与胶浓度的关系是。
19.如果改变反应条件就会影响酶的专一性和切割效率,称为________________。
20.影响限制性内切酶活性的因素________________、________________、________________、________________。
21.连接反应的实用温度为________________。
22.pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。
pUC系列的载体是通过
和两种质粒改造而来。
它的复制子来自,Amp
抗性基因则是来自。
23.噬菌体之所以被选为基因工程载体,主要有两方面的原因:
一是;二是。
24.野生型的M13不适合用作基因工程载体,主要原因是
和。
25.黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体,它的复制子来自、COS位点序列来自,最大的克隆片段达到kb。
26.野生型的噬菌体DNA不宜作为基因工程载体,原因是:
(1)
(2)(3)。
27.噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的,其中来自质粒的主要结构是,而来自噬菌体的主要结构是。
28.噬菌体载体由于受到包装的限制,插入外源DNA片段后,总的长度应在噬菌体基
因组的的范围内。
29.在分离DNA时要使用金属离子螯合剂,如EDTA和柠檬酸钠等,其目的是
。
30.用乙醇沉淀DNA时,通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子,如NaCl和NaAc,
其目的是。
31.引物在基因工程中至少有4个方面的用途:
(1)
(2)
(3)(4)。
32.Clark发现用TaqDNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端,而是有一个突出
碱基末端的双链DNA分子。
根据这一发现设计了克隆PCR产物的。
33.在cDNA的合成中要用到S1核酸酶,其作用是切除在
。
34.乙醇沉淀DNA的原理是。
35.假定克隆一个编码某种蛋白质的基因,必须考虑其表达的三个基本条件:
(1)________________________________
(2)_____________________________
(3)_________________________________。
36.受体细胞的感受态是___________________________________。
37.DNA重组连接的方法大致分为四种:
(1)_____________
(2)_______________
(3)___________________________(4)___________________________。
38.将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个___________,各种此类质
粒的集合体称之为构建了一个_________________。
39.将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称作一个____________,源于同一批RNA制备
物的克隆群则构建了一个_________________。
40.只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成,用___________可以将这段DNA
进行百万倍的扩增。
41.人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为___________时吸附DNA,___________时摄人DNA。
42.目前,在重组体的筛选中,已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。
大致可以分为:
(1)_______________
(2)_______________(3)___________________
(4)____________________________等。
43.PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法,它适合于___________________________。
44.核酸杂交探针可分为两大类:
DNA探针和RNA探针。
其中DNA探针又分为__________探针和__________________探针。
45.RNaseH的活性为________________________________________________。
46.第一个用于基因克隆的天然质粒。
47.噬菌粒载体的包装需要________________的帮助下才能完成。
48.cDNA文库的特点:
、、、。
49.用________________处理大肠杆菌,能增加膜的通透性。
50.在________________技术中,DNA限制性片段经凝胶电泳分离后,被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上,然后与放射性的DNA探针杂交。
51.可用T4DNA聚合酶进行平末端的DNA标记,因为这种酶具有____________和_______的活性。
52.根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体,必需考虑三种因素:
(1)_______________
(2)________________________(3)______________________。
53.Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别:
(1)_______________________________________________________________________
(2)_______________________________________________________________________。
54.外源基因导入植物细胞的方法有:
。
答案
1.70
2.
(1)分子水平上的操作;
(2)细胞水平上的表达
3.克隆基因的类型;受体的选择;载体的选择
4.增加溶液的粘度,维持渗透压,防止DNA受机械力(震荡)的作用而降解。
5.超螺旋大于线性大于开环。
6.
(1)减少酶量;
(2)缩短反应时间;(3)增大反应体积
7.EcoK;EcoRl
8.GGCC;异源同工酶
9.枯草杆菌蛋白酶;
(1)5'-3'合成酶的活性;
(2)3'-5'外切核酸酶
10.碱性磷酸酶;5’端的磷酸基团
11.Ca2+
12.5'-3'合成;3'-5'外切
13.DNA聚合酶I:
5'一3'外切核酸酶;5'一3'合成酶
14.S1核酸酶切割;DNA聚合酶补平
15.核酸水解酶H;RNA
16.质粒DNA;病毒DNA;质粒和病毒DNA杂合体
17.复制区:
含有复制起点;选择标记:
主要是抗性基因;克隆位点:
便于外源DNA的插入
18.正比
19,星号(*)活性
20.DNA的纯度、DNA的甲基化程度、温度、缓冲液(Buffer)
21.4~16C
22.pBR322和M13;pMBl;转座子
23.它在细菌中能够大量繁殖,这样有利于外源DNA的扩增;对某些噬菌体(如噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚,其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽
24.没有合适的限制性内切核酸酶识别位点;选择标记
25.质粒;噬菌体;45
26.
(1)分子量大,
(2)酶的多切点,(3)无选择标记
27.复制区;IG区
28.75%~105%
29.螯合Mg2+离子,抑制核酸酶的活性
30.中和DNA分子的负电荷,增加DNA分子间的凝聚力
31.
(1)合成探针;
(2)合成cDNA;(3)用于PCR反应;(4)进行序列分析
32.T—载体
33.第二链合成时形成的发夹环•
34.乙醇使DNA分子脱水
35.
(1)保持正确的可读框
(2)能够使其转录的启动子(3)具有翻译的起始和终止信号
36.接受外源DNA的生理状态
37.
(1)黏性末端连接;
(2)平末端连接;(3)同聚物接尾连接;(4)接头连接法
38.基因组DNA克隆;基因组DNA文库
39.cDNA克隆;cDNA文库
40.聚合酶链式反应(PCR)
41.0C;42C
42.
(1)遗传学方法;
(2)物理筛选法;(3)核酸杂交法;(4)表达产物分析法
43.插入外源片段的种类较多,大小又极为相似的重组体的筛选
44.基因组DNA;cDNA
45.5’3’或3’5’方向特异地水解RNA-DNA杂交双链中的RNA链
46.pSC101
47.辅助噬菌体
48.
(1)不含内含子序列。
(2)可以在细菌中直接表达。
(3)包含了所有编码蛋白质的基因。
(4)比DNA文库小的多,容易构建
49.CaCl2
50.Southern印迹
51.5’3’合成酶;3’5’外切核酸酶
52.
(1)克隆的是完整的基因;
(2)使用的是表达载体;(3)不含内含子
53.
(1)印迹的对象不同:
Northern是RNA,Southern是DNA;
(2)电泳条件不同,前者是变性条件,后者是非变性条件
54.叶盘法、电击法、基因枪法
二、选择题(单选或多选)
1.因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是()
(a)A.Kornberg(b)W.Gilbert(c)P.Berg(d)B.McClintock
2.第一个作为重组DNA载体的质粒是()
(a)pBR322(b)ColEl(c)pSCl01(d)pUCl8
3.关于宿主控制的限制修饰现象的本质,下列描述中只有()不太恰当。
(a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成
(b)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰
(d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统
4.Ⅱ型限制性内切核酸酶:
()
(a)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列
(b)仅有内切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供
(c)限制性识别非甲基化的核苷酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性
(e)仅有外切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供
5.下面有关限制酶的叙述哪些是正确的()
(a)限制酶是外切酶而不是内切酶
(b)限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割
(c)同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的
(d)一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA,产生黏末端
(e)一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA,产生平末端
6.第一个被分离的Ⅱ类酶是:
()
(a)EcoK(b)HindⅢ(c)HindⅡ(d)EcoB
7.在下列进行DNA部分酶切的条件中,控制那一项最好()
(a)反应时间(b)酶量(c)反应体积(d)酶反应的温度
8.在下列试剂中,那一种可以螯合Ca2+离子()
(a)EDTA(b)柠檬酸钠(c)SDS(d)EGTA
9.在下列工具酶中,那一种可以被EGTA抑制活性()
(a)S1单链核酸酶(b)末端转移酶(c)碱性磷酸酶(d)Bal31核酸酶
10.限制性核酸内切酶切割DNA后产生()
(a)5′磷酸基和3′羟基基团的末端(b)5′磷酸基和3′磷酸基团的末端
(c)5′羟基和3′羟基基团的末端(d)3′磷酸基和5′羟基基团的末端(e)以上都不是
11.可识别并切割特异DNA序列的酶是()
(a)非限制性核酸外切酶(b)限制性核酸内切酶
(c)限制性核酸外切酶(d)非限制性核酸内切酶
(e)DNA酶
12.克隆所依赖的DNA载体的最基本性质是()
(a)卡那霉素抗性(b)青霉素抗性
(c)自我复制能力(d)自我表达能力
(e)自我转录能力
13.下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大()
(a)质粒(b).黏粒(c)酵母人工染色体(YAC)(d).噬菌体(e)cDNA表达载体
14.关于cDNA的最正确的说法是:
()
(a)同mRNA互补的单链DNA(b)同mRNA互补的双链DNA(c).以mRNA为模板合成的双链DNA(d)以上都正确
15.关于感受态细胞性质的描述,下面哪一种说法不正确()
(a)功具有可诱导性(b)细菌生长的任何时期都可以出现(c)具有可转移性(d)不同细菌出现感受态的比例是不同的
16.Southem印迹的DNA探针()杂交。
(a)只与完全相同的片段(b)可与任何含有相同序列的DNA片段(c)可与任何含有互补序列的DNA片段(d)可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段(e).以上都是
17.在利用lacZ失活的显色反应筛选法中,IPTG的作用是()
(a)诱导宿主的α肽的合成(b)诱导宿主的ω肽的合成
(c)作为酶的作用底物(d)作为显色反应的指示剂
18.用免疫化学法筛选重组体的原理是()
(a)根据外源基因的表达(b)根据载体基因的表达
(c)根据mRNA同DNA的杂交(d)根据DNA同DNA的杂交
19.在基因工程中,DNA重组体是指()
(a)不同来源的两段DNA单链的复性(b)目的基因与载体的连接物
(c)不同来源的DNA分子的连接物(d)原核DNA与真核DNA的连接物
(e)两个不同的结构基因形成的连接物
20.重组DNA的筛选与鉴定不包括哪一方法()
(a)限制酶酶切图谱鉴定(b).PCR扩增鉴定
(c)显微注射(d)蓝白筛选
(e)抗药筛选
21.下面关于多克隆位点(multiple clone site, MCS)的描述,不正确的—句是()
(a)仅位于质粒载体中 (b)具有多种酶的识别序列 (c)不同酶的识别序列可以有重叠
(d)一般是人工合成后添加到载体中
22.在cDNA技术中,所形成的发夹环可用()
(a)限制性内切核酸酶切除 (b)用31外切核酸酶切除 (c)用S1核酸酶切除
(d)用51外切核酸酶切除
23.下列对逆转录酶描述正确的是:
()
(a)依赖于RNA的DNA聚合酶或称为RNA指导的DNA聚合酶
(b)依赖于cDNA的DNA聚合酶或称为cDNA指导的DNA聚合酶
(c)依赖于DNA的DNA聚合酶或称为DNA指导的DNA聚合酶
(d)依赖于RNA的RNA聚合酶或称为rNA指导的RNA聚合酶
24.T4-DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起,其底物的关键基团是()
(a)2'-OH和5'–P(b)2'-OH和3'–P(c)3'-OH和2'–P(d)3'-OH和5'-P
25.下列哪一种酶作用时需要引物()
(a)限制酶(b)末端转移酶(c)反转录酶(d)DNA连接酶
26.用下列方法进行重组体的筛选,只有()说明外源基因进行了表达。
(a)Southem印迹杂交(b)Northem印迹杂交
(c)Western印迹(d)原位菌落杂交
27.Klenow酶与DNA聚合酶相比,前者丧失了()的活性。
(a)5,--3,合成酶,(b)3,--5,外切酶(c)5,---3,外切酶(d)转移酶
28.在下列进行DNA部分酶切的条件中,控制那一项最好()
(a)反应时间(b)酶量(c)反应体积(d)酶反应的温度
29.黏性末端连接法,不仅操作方便,而且()
(a)产生新切点(b)易于回收外源片段(c)载体不易环化(d)影响外源基因的表达
30.能够用来克隆32kb以下大小的外源片段的质粒载体是()
(a)charomid(b)plasmid(C)cosmid(d)phagemid
31.第一个作为重组DNA载体的质粒是()
(a)pBR322(b)ColEl(c)pSCl01(d)pUCl8
32.Ti质粒:
()
(a)可从农杆菌转到植物细胞中(b)作为双链DNA被转移
(c)在植物中导致肿瘤(d)介导冠瘿碱的合成,作为细菌的营养物和植物的生长激素
(e)需要细菌的vir基因帮助转移(f)在植物细胞中作为染色体外质粒
33.黏粒(cosmid)是一种人工建造的载体,()
(a)它具有COS位点,因而可进行体外包装(b)它具有质粒DNA的复制特性
(c)进入受体细胞后,可引起裂解反应(d)进入受体细胞后,可引起溶源化反应
34.有两种确定核酸中核苷酸序列的方法:
化学序列分析法(Maxam-Glbert)和酶学序列分析法(Sanger)。
酶学测序法的基本原理/优点是:
()
(a)碱基与特殊染料间不同的相互作用
(b)一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止
(c)限制性位点与DNA末端标记的相关性
(d)可同时对DNA双螺旋的两条链进行测序
(e)反应是DNA特异的,RNA不会带来干扰。
这样既减少纯化步骤,也节约了开支。
35.关于cDNA的最正确的说法是:
()
(a)同mRNA互补的单链DNA(b)同mRNA互补的双链DNA
(c)以mRNA为模板合成的双链DNA(d)以上都正确
36.用碱法分离质粒DNA时,染色体DNA之所以可以被除去,是因为:
()
(a)染色体DNA断成了碎片(b)染色体DNA分子量大,而不能释放
(c)染色体变性后来不及复性(d)染色体未同蛋白质分开而沉淀
37.关于碱解法分离质粒DNA,下面哪一种说法不正确()
(a)溶液I的作用是悬浮菌体(b)溶液Ⅱ的作用是使DNA变性
(c)溶液Ⅲ的作用是使DNA复性
(d)质粒DNA分子小,所以没有变性,染色体变性后不能复性
38.Clark做了一个有趣的实验,发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板,在双链DNA的
末端加一个碱基,主要是加().
(a)dGTP(b)dATP(c)dCTP(d)dTTP
39.根据构建方法的不同,基因文库分为基因组文库、cDNA文库等。
在下列文库中,
()属cDNA文库
(a)YAC文库(b)MAC文库(c)扣减文库(d)BAC文库
40.下面关于多克隆位点(multipleclonesite,MCS)的描述,不正确的—句是()
(a)仅位于质粒载体中(b)具有多种酶的识别序列
(c)不同酶的识别序列可以有重叠(d)一般是人工合成后添加到载体中
41.在cDNA技术中,所形成的发夹环可用()
(a)限制性内切核酸酶切除(b)用3¹外切核酸酶切除
(c)用S1核酸酶切除(d)用5¹外切核酸酶切除
42.在DNA的酶切反应系统中,通常:
()
(a)用SSC缓冲液(b)加入Mg2+作辅助因子
(c)加入BSA等保护剂(d)上述说法中,有两项是正确的
43.黏性末端连接法,不仅操作方便,而且()
(a)产生新切点(b)易于回收外源片段(c)载体不易环化(d)影响外源基因的表达
44.在下列表型中,()是基因工程上理想的受体菌表型
(a)r+m+rec*(b)r-m-rec-(C)r-m-rec+(d)r+m+rec-
45.关于DNA接头在基因工程中的作用,下列说法中哪一项不正确()
(a)给外源DNA添加适当的切点(b)人工构建载体
(c)调整外源基因的可读框(d)增加调控元件
46.cDNA文库包括该种生物的()
(a)某些蛋白质的结构基因(b)所有蛋白质的结构基因
(c)所有结构基因(d)内含子和调控区
47.下列关于建立cDNA文库的叙述中,哪一项是错误的()
(a)从特定组织或细胞中提取DNA或RNA
(b)用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA
(c)以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA
(d)新合成的双链DNA甲基化
48.下列对黏性末端连接法的评价中,哪一项是不正确的()
(a)操作方便(b)易于回收片段
(c)易于定向重组(d)载体易于自身环化,降低重组率
49.关于感受态细胞性质的描述,下面哪一种说法不正确()
(功具有可诱导性(b)具有可转移性
(c)细菌生长的任何时期都可以出现(d)不同细菌出现感受态的比例是不同的
50.下面关于用T4多核苷酸激酶标记5'端制备探针的描述中()是不正确的。
(a)既能标记DNA,又能标记RNA(b)既能标记双链DNA又能标记单链DNA
(c)只能标记突出的5'端不能标记其他类型末端
(d)DNA或RNA必须有5'-OH的存在
51.Southem印迹的DNA探针()杂交。
(a)只与完全相同的片段(b)可与任何含有相同序列的DNA片段
(c)可与任何含有互补序列的DNA片段’.
(d)可与用某些限制性内切核酸