最新整理凝血四项检查说课讲解.docx
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最新整理凝血四项检查说课讲解
凝血四项检查
APTT
【检验原理】
37℃下，在待检血浆中加入APTT试剂，即以脑磷脂作为血小板的替代物加入贫血小板血浆中，在Ca2+的参与下，使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块，测定凝固所需要的时间，即为待测血浆的APTT。
【样本制备】
1.采血与抗凝：
采血后立即与抗凝剂充分混合，血液与抗凝剂（0.109mmol/L枸橼酸钠）比例为9：
1。
2.离心：
抗凝血以2500xg离心10分钟，用微量移液器吸出待测血浆。
3.保存：
血浆样本应立即测试。
22～24℃条件下保存，应2小时内测定，2～4℃条件下保存，应3小时内测定。
【检验方法】
1.仪器预热：
开机，按照仪器使用说明书预热，达到要求稳定温度，进入正常工作状态。
2.试剂配制：
严格按照标示量加入蒸馏水复溶试剂，将试剂瓶直立在18～25℃中静置30分钟，使用前轻轻旋转试剂瓶至完全溶解，勿剧烈振摇。
氯化钙用前应放入仪器37℃预温槽。
3.正常质控血浆制备：
按照质控血浆试剂盒使用说明书。
4.测定：
以半自动高性能血凝仪为例：
①将测试杯置于预温槽中，用加珠器在每个测试杯中放一粒钢珠。
②试剂放相应位置，37℃预温，需混匀放搅拌子。
③将待测血浆100μl（患畜或者质控血浆）加入测试杯，再将APTT试剂100μl加入测试杯，混匀，启动预温时间计时，37℃，5分钟，将测试杯从预温槽移至测试槽。
④使用联动加样器加入氯化钙100μl，仪器自动启动计时器开始计时并自动打印结果。
【正常值参考范围】
犬：
10.0～18.0秒，建议各实验室建立自己的正常值参考范围。
【检验结果解释】
APTT延长见于ＦⅧ、ＦⅨ、ＦⅪ血浆水平减低。
APTT缩短见于高凝状态、血栓性疾病。
口服避孕药会影响检测结果。
PT
【检验原理】
在待检血浆中加入过量的组织凝血活酶和钙离子，使凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块，测定凝固所需要的时间，即为待测血浆的凝血酶原时间（PT）。
PT与血浆中的外源性凝血因子含量呈负相关。
【样本制备】
1.采血与抗凝：
采血后立即与抗凝剂充分混合，血液与抗凝剂（0.109mmol/L枸橼酸钠）比例为9：
1。
草酸钠、EDTA、肝素不适于作抗凝剂。
2.离心：
抗凝血以2500xg离心10分钟。
3.保存：
血浆样本应立即测试。
22～24℃条件下保存，应2小时内测定，2～4℃条件下保存，应3小时内测定。
如不能立即测试，应采样后60分钟内分离血浆。
【检验方法】
1.仪器预热：
开机，按照仪器使用说明书预热，进入正常工作状态。
2.试剂配制：
严格按照标示量加入蒸馏水复溶试剂，将试剂瓶直立在室温中静置30分钟，使用前轻轻旋转试剂瓶至完全溶解，勿剧烈振摇。
3.正常质控血浆制备：
按照质控血浆试剂盒使用说明书。
4.测定：
以半自动高性能血凝仪为例：
①将测试杯置于预温槽中，用加珠器在每个测试杯中放一粒钢珠。
②试剂放相应位置，37︒C预温，混匀需放搅拌子。
③将待测血浆100μl（患畜或者质控血浆）加入测试杯。
④启动预温时间计时，37℃，3分钟，将测试杯从预温槽中移至测试槽中。
⑤使用联动加样器加入试剂100μl，仪器自动启动计时器开始计时进行测试。
记录结果。
【正常值参考范围】
犬：
5.0～15.0秒，建议各实验室建立自己的正常值参考范围。
质量控制程序：
实验室应建立质量控制程序，使用质控血浆测定。
FIB
【检验原理】
在待检稀释血浆中加入高浓度的凝血酶，使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块，测定凝固所需要的时间，在以参比血浆制作的标准曲线上查得待测血浆的纤维蛋白原浓度，即为待测血浆的纤维蛋白原（FIB）含量。
【样本制备】
1.采血与抗凝：
采血后立即与抗凝剂充分混合，血液与抗凝剂（0.109mmol/L枸橼酸钠）比例为9：
1。
2.离心：
抗凝血以2500xg离心10分钟。
3.稀释：
用咪唑缓冲液按照1：
5比例稀释血浆。
4.保存：
血浆样本应立即测试。
22～24℃条件下保存，应2小时内测定，2～4℃条件下保存，应3小时内测定。
【检验方法】
1.仪器预热：
开机，按照仪器使用说明书预热，进入正常工作状态。
2.试剂配制：
严格按照标示量加入蒸馏水复溶试剂，并放室温静置30分钟，使用前轻轻旋转试剂瓶至完全溶解，勿剧烈振摇。
3.定标血浆制备：
以蒸馏水复溶血浆，加入量标识在试剂瓶上。
正常质控血浆制备：
按照质控血浆试剂盒使用说明书。
4.FIB标准曲线制备：
以半自动血凝仪为例：
①按下表稀释标准血浆（假设FIB标定液浓度2.57g/L）：
比例
标准血浆（μl）
咪唑缓冲液（μl）
总体积（μl）
FIB浓度（g/L）
1:
5
100
400
500
5.14
1:
10
50
450
500
2.57
1:
15
40
560
600
1.72
1:
20
30
570
600
1.28
1:
40
20
780
800
0.64
②每份稀释血浆宜重复测试4次（至少测定2次），求秒数均值。
③进入FIB标定菜单，选录入，将不同稀释度血浆凝固时间均值和FIB浓度输入仪器。
④选计算，按2次确认，标准曲线输入完成并打印。
则检测样本时，同时报告秒数和g/L。
更换试剂批号时应重做标准曲线。
5.测定：
以半自动高性能血凝仪为例：
①将测试杯置于预温槽中，用加珠器在测试杯中放一粒钢珠。
②将5倍稀释血浆100μl（患畜或者质控血浆）加入测试杯，37︒C预温3分钟，将测试杯移至测试槽。
③用联动加样器加入已预温的凝血酶试剂100μl，启动计时器，仪器记录时间并自动打印结果。
【正常值参考范围】
犬：
4.0～14.0秒。
建议各实验室建立自己的正常值参考范围。
TT
【检验原理】
在待检血浆中加入标定的凝血酶，使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块，测定凝固所需要的时间，即为待测血浆的凝血酶时间（TT）。
【样本制备】
1.采血与抗凝：
采血后立即与抗凝剂充分混合，血液与抗凝剂（0.109mmol/L枸橼酸钠）比例为9：
1。
2.离心：
抗凝血以2500xg离心10分钟。
3.保存：
血浆样本应立即测试。
22～24℃条件下保存，应2小时内测定，2～4℃条件下保存，应3小时内测定。
【检验方法】
1.仪器预热：
开机，按照仪器使用说明书预热，达到要求稳定温度，进入正常工作状态。
2.试剂配制：
严格按照标示量加入蒸馏水复溶试剂，将试剂瓶直立在室温中静置30分钟，使用前轻轻旋转试剂瓶至完全溶解，勿剧烈振摇。
3.正常质控血浆制备：
按照质控血浆试剂盒使用说明书。
4.测定：
以半自动高性能血凝仪为例：
①将测试杯置于预温槽中，用加珠器在每个测试杯中放一粒钢珠。
②将待测血浆100μl（患畜或者质控血浆）加入测试杯，启动预温时间计时，37℃，3分钟，将测试杯从预温槽中移至测试槽中。
③使用联动加样器加入试剂100μl，仪器自动启动计时器开始计时进行测试。
报告凝血酶时间。
【正常值参考范围】
犬：
7.0～17.0秒，建议各实验室建立自己的正常值参考范围。
质量控制程序：
实验室应建立质量控制程序，使用质控血浆测定。
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