FreeKaoYan09年辅导班生化笔记完全解答.docx

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09年辅导班生化笔记完全解答

选择题出题点：

20种氨基酸各自的特点和碱基

蛋白质，核酸变性的特点

测定蛋白质含量与分子量的方法原理

各类连接键，结构稳定的键

二级结构特点

PI的计算，氨基酸解离分析

分析方法原理：

凝胶层析，电泳，离子交换等

单抗，多糖，疾病原因

酶活力，比活力，Km，（非）竞争性抑制动力学效应

代谢：

限速酶，场所，转运，重要联系点代谢物

抑制剂，呼吸链，限速酶

过程：

EMP,TCA,尿素循环，β氧化

血浆脂蛋白种类作用

名词解释

蛋白质等电点  蛋白质变性  核酸的增/减色效应  Tm  α螺旋  β折叠  DNA双螺旋结构  tRNA的三叶草结构  碱基互补原则  

蛋白质的结构域  蛋白质的超二级结构  米氏常数  米氏方程  变构酶  变构效  酶活力  固定化酶  同工酶  酶的活性中心

必需基团  酶的竞争性抑制  生物氧化  呼吸链  氧化磷酸化  底物水平磷酸化  粘多糖  TCA循环  乳酸循环  糖异生作用

酮体  必需脂肪酸  必需氨基酸  β氧化  尿素循环  转氨基作用  联合脱氨基作用  一碳单位  半保留复制  遗传中心法则

遗传密码  冈崎片断  转录  逆转录  基因表达  核蛋白体循环  抗代谢物  基因工程药物  生物技术药物  生物药物  

单克隆抗体  基因文库  cDNA文库  核酸的杂交  分子病  基因敲除  DNA芯片  核酸复性  蛋白质印迹  亲和层析  

离子交换层析  凝胶过滤　　

问答（有些和名解重复）

蛋白质的二级结构

DNA的双螺旋结构

固定化酶的概念制备方法及优点　

β氧化与脂肪酸合成的比较

乙酰CoA的来源去路及在细胞内的定位

青霉素的抗菌机制

磺胺药与抗菌增效剂的抗菌机制

现代生物技术的定义主要内容及在新药研究开发中的应用

哪些生化研究成果应用于新药设计研究

酶催化高效率的因素及基本原理

糖在体内主要代谢途径及生理意义

糖酵解与糖异生的比较

酮体的生成利用及意义

尿素循环过程，特点及意义

大肠杆菌DNA复制过程

RNA转录过程

重组DNA技术概念过程及应用

选择题出题点：

20种氨基酸各自的特点和碱基

必需氨基酸

　　（essentialaminoacid）：

指人体（或其它脊椎动物）不能合成或合成速度远不适应机体的需要，必需由食物蛋白供给，这些氨基酸称为必需氨基酸。

共有10种其作用分别是：

①赖氨酸（Lysine）：

促进大脑发育，是肝及胆的组成成分，能促进脂肪代谢，调节松果腺、乳腺、黄体及卵巢，防止细胞退化；

②色氨酸（Tryptophan）：

促进胃液及胰液的产生；

③苯丙氨酸（Phenylalanine）：

参与消除肾及膀胱功能的损耗；

④蛋氨酸（又叫甲硫氨酸）（Methionine）；参与组成血红蛋白、组织与血清，有促进脾脏、胰脏及淋巴的功能；

⑤苏氨酸（Threonine）：

有转变某些氨基酸达到平衡的功能；

⑥异亮氨酸（Isoleucine）：

参与胸腺、脾脏及脑下腺的调节以及代谢；脑下腺属总司令部作用于甲状腺、性腺；

⑦亮氨酸（Leucine）：

作用平衡异亮氨酸；

⑧缬氨酸（Valine）：

作用于黄体、乳腺及卵巢。

9.精氨酸（arginine）：

精氨酸与脱氧胆酸制成的复合制剂（明诺芬）是主治梅毒、病毒性黄疸等病的有效药物。

10.组氨酸histidine

人体虽能够合成Arg和His，但合成的量通常不能满足正常的需要，因此，这两种氨基酸又被称为半必需氨基酸。

前8种人体必需氨基酸的记忆口诀：

　　　①"赖蛋苏苯挟一亮色（联想记忆法-高中生物老师教的，意义深刻）"

谐音:

借（缬氨酸）,一（异亮氨酸）,两（亮氨酸）,本（苯丙氨酸）,蛋（蛋氨酸）,色（色氨酸）,书（苏氨酸）,来（赖氨酸）.

　　20种氨基酸记忆口诀

　　六伴穷光蛋，

酸谷天出门，

　　死猪肝色脸，

　　只携一两钱。

　　一本落色书，

　　拣来精读之。

　　芳香老本色，

　　不抢甘肃来。

　　六伴穷光蛋：

硫、半、光、蛋→半胱、光、蛋（甲硫）氨酸→含硫氨基酸

　　酸谷天出门：

酸、谷、天→谷氨酸、天门冬氨酸→酸性氨基酸

　　死猪肝色脸：

丝、组、甘、色→丝、组、甘、色氨酸→一碳单位来源的氨基酸

　　只携一两钱：

支、缬、异亮、亮→缬、异亮、亮氨酸→支链氨基酸

　　一本落色书：

异、苯、酪、色、苏→异亮、苯丙、酪、色、苏氨酸→生糖兼生酮

　　拣来精读之：

碱、赖、精、组→赖氨酸、精氨酸、组氨酸→碱性氨基酸

　　芳香老本色：

芳香、酪、苯、色→酪、苯丙、色氨酸→芳香族氨基酸

　　不抢甘肃来：

脯、羟、甘、苏、赖→脯、羟脯、甘、苏、赖氨酸→不参与转氨基的氨基酸

蛋白质，核酸变性的特点

蛋白质变性（proteindenaturation）是指蛋白质在某些物理和化学因素作用下其特定的空间构象被改变，从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失，这种现象称为蛋白质变性。

蛋白质结构

　　蛋白质是由多种氨基酸通过肽键构成的高分子化合物，在蛋白质分子中各氨基酸通过肽键及二硫键结合成具有一定顺序的肽链称为一级结构；蛋白质的同一多肽链中的氨基和酰基之间可以形成氢键或肽链间形成氢键，使得这一多肽链具有一定的构形，包括α-螺旋、β-折叠、β-转角和自由专曲，这些称为蛋白质的二级结构；二级结构通过连接形成三级结构；多条肽链聚集成为具有一定空间构型称为四级结构，其中一条肽链叫一个亚基。

蛋白质变性的原因

　　变性作用是蛋白质受物理或化学因素的影响，改变其分子内部结构和性质的作用。

一般认为蛋白质的二级结构和三级结构有了改变或遭到破坏，都是变性的结果。

能使蛋白质变性的化学方法有加强酸、强碱、重金属盐、尿素、乙醇、丙酮等；能使蛋白质变性的物理方法有加热（高温）、紫外线及X射线照射、超声波、剧烈振荡或搅拌等。

蛋白质变性后的方面

（一）生物活性丧失

　　蛋白质的生物活性是指蛋白质所具有的酶、激素、毒素、抗原与抗体、血红蛋白的载氧能力等生物学功能。

生物活性丧失是蛋白质变性的主要特征。

有时蛋白质的空间结构只有轻微变化即可引起生物活性的丧失。

（二）某些理化性质的改变

　　蛋白质变性后理化性质发生改变，如溶解度降低而产生沉淀，因为有些原来在分子内部的疏水基团由于结构松散而暴露出来,分子的不对称性增加，因此粘度增加，扩散系数降低。

（三）生物化学性质的改变

　　蛋白质变性后，分子结构松散，不能形成结晶，易被蛋白酶水解。

蛋白质的变性作用主要是由于蛋白质分子内部的结构被破坏。

天然蛋白质的空间结构是通过氢键等次级键维持的，而变性后次级键被破坏，蛋白质分子就从原来有序的卷曲的紧密结构变为无序的松散的伸展状结构（但一级结构并未改变）。

所以，原来处于分子内部的疏水基团大量暴露在分子表面，而亲水基团在表面的分布则相对减少，至使蛋白质颗粒不能与水相溶而失去水膜，很容易引起分子间相互碰撞而聚集沉淀。

物理变化与化学变化

　　引起蛋白质变性的原因可分为物理和化学因素两类。

物理因素可以是加热、加压、脱水、搅拌、振荡、紫外线照射、超声波的作用等；化学因素有强酸、强碱、尿素、重金属盐、十二烷基磺酸钠（SDS）等。

在临床医学上，变性因素常被应用于消毒及灭菌。

反之，注意防止蛋白质变性就能有效地保存蛋白质制剂。

蛋白质的变性很复杂，要判断变性是物理变化还是化学变化，要视具体情况而定。

如果有化学键的断裂和生成就是化学变化；如果没有化学键的断裂和生成就是物理变化。

　　重金属盐使蛋白质变性，是因为重金属阳离子可以和蛋白质中游离的羧基形成不溶性的盐，在变性过程中有化学键的断裂和生成，因此是一个化学变化。

蛋白质复性

　　蛋白质在受到光照、热、有机溶剂以及一些变性剂的作用时，次级键受到破坏，导致天然构象的破坏，使蛋白质的生物活性丧失。

如果变性条件剧烈持久，蛋白质的变性是不可逆的。

如果变性条件不剧烈，这种变性作用是可逆的，说明蛋白质分子内部结构的变化不大。

这时，如果除去变性因素，在适当条件下变性蛋白质可恢复其天然构象和生物活性，这种现象称为蛋白质复性（renaturation）。

例如胃蛋白酶加热至80～90℃时，失去溶解性，也无消化蛋白质的能力，如将温度再降低到37℃，则又可恢复溶解性和消化蛋白质的能力。

DNA变性

　　DNA变性指DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。

变性时维持双螺旋稳定性的氢键断裂，碱基间的堆积力遭到破坏，但不涉及到其一级结构的改变。

凡能破坏双螺旋稳定性的因素，如加热、极端的pH、有机试剂甲醇、乙醇、尿素及甲酰胺等，均可引起核酸分子变性。

　　变性DNA常发生一些理化及生物学性质的改变：

1）溶液粘度降低。

DNA双螺旋是紧密的刚性结构，变性后代之以柔软而松散的无规则单股线性结构，DNA粘度因此而明显下降。

2）溶液旋光性发生改变。

变性后整个DNA分子的对称性及分子局部的构性改变，使DNA溶液的旋光性发生变化。

3）增色效应（hyperchromiceffect）。

指变性后DNA溶液的紫外吸收作用增强的效应。

DNA分子中碱基间电子的相互作用使DNA分子具有吸收260nm波长紫外光的特性。

在DNA双螺旋结构中碱基藏入内侧，变性时DNA双螺旋解开，于是碱基外露，碱基中电子的相互作用更有利于紫外吸收，故而产生增色效应。

融解温度

　　对双链DNA进行加热变性，当温度升高到一定高度时，DNA溶液在260nm处的吸光度突然明显上升至最高值，随后即使温度继续升高，吸光度也不再明显变化。

若以温度对DNA溶液的紫外吸光率作图，得到的典型DNA变性曲线呈S型（如下图）。

可见DNA变性是在一个很窄的温度范围内发生的。

通常将核酸加热变性过程中，紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为核酸的解链温度，由于这一现象和结晶的融解相类似，又称融解温度（Tm,meltingtemperature）。

在Tm时，核酸分子内50%的双螺旋结构被破坏。

特定核酸分子的Tm值与其G＋C所占总碱基数的百分比成正相关，两者的关系可表示为：

?

Tm=69.3＋0.41*（G+C）%一定条件下（相对较短的核酸分子），Tm值大小还与核酸分子的长度有关，核酸分子越长，Tm值越大；另外，溶液的离子强度较低时，Tm值较低，融点范围也较宽，反之亦然，因此DNA制剂不应保存在离子强度过低的溶液中。

测定蛋白质含量与分子量的方法原理

各类连接键，结构稳定的键

多肽链中氨基酸残基的构成以及排列顺序称为氨基酸的一级结构,连接一级结构的键是肽键。

氨基酸的二级结构是指氨基酸主链原子的局部空间结构,并不涉及氨基酸残基侧链构象,二级结构的种类有α-螺旋、β-折叠、β-转角儿以及无规卷曲。

氢键是维系二级结构最主要的键。

三级结构是指多肽链主链以及侧链原子的空间排布。

次级键维持其稳定,最主要的键是疏水键。

四级结构是指两条以上具有三级结构的多肽链之间缔合在一路的结构。

其中每条具有三级结构的多肽链称为亚基,一般具有四级结构的氨基酸才有生物科学活性。

维持其稳定的是次级键,如氢键、盐键、疏水键、范德华力等。

二级结构特点

二级结构：

多肽链或多核苷酸链沿分子的一条轴所形成的旋转和折叠等，主要是由分子内的氢键维系的局部空间排列。

如蛋白质的α螺旋、β片层、β转角、无规卷曲及DNA的双螺旋结构。

β转角：

蛋白质二级结构类型之一,由4个氨基酸残基组成，其中第一个残基的CO基团和第四个残基的NH基团之间形成氢键，使多肽链的方向发生“U”形改变。

β－折叠（β－sheet）也是一种重复性的结构,可分为平行式和反平行式两种类型，它们是通过肽链间或肽段间的氢键维系。

可以把它们想象为由折叠的条状纸片侧向并排而成,每条纸片可看成是一条肽链,称为β折叠股或β股（β－strand）,肽主链沿纸条形成锯齿状,处于最伸展的构象,氢键主要在股间而不是股内。

α－碳原子位于折叠线上,由于其四面体性质,连续的酰氨平面排列成折叠形式。

需要注意的是在折叠片上的侧链都垂直于折叠片的平面,并交替的从平面上下二侧伸出。

平行折叠片比反平行折叠片更规则且一般是大结构而反平行折叠片可以少到仅由两个β股组成。

PI的计算，氨基酸解离分析

等电点（pI,isoelectricpoint）

　　蛋白质是两性电解质，在特定的pH溶液中所带正电荷数恰好等于负电荷数。

此时蛋白在电场中不再移动，此溶液的pH称该蛋白质的等电点。

　　因为当环境PH值等于PI值时，蛋白质的溶解度最小，常用于分离和提纯蛋白质或氨基酸。

氨基酸的等电点（isoelectricpoint）：

氨基酸的等电点在一定

pH条件下,某种氨基酸接受或给出质子的程度相等,分子所带

　的净电荷为零,此时溶液的pH值就称为该氨基酸的等电点（pI）

NH3+NH3+NH2

|+OH-|+OH-|

H-C-COOH========H-C-COO-======H-C-COO-

|+H+|+H+|

RRR

阳离子两性离子阴离子

pHpI

（pH对氨基酸离子化的影响示意图）

　　氨基酸等电点的计算

公式：

　pH=（pKn+pKn+1）/2

　　　　　　　　n:

氨基酸（或多肽）完全质子化时带正电荷基团数

　　　　　　　pK:

解离基团的解离常数

等电点的计算步骤

先将氨基酸/多肽可解离基团的pK值自小到大按顺序排列

判断n值

判断氨基酸的分类

酸性氨基酸和中性氨基酸的完全质子化数=1

碱性氨基酸的完全质子化数=2

等电点的应用------电泳

电泳：

带电颗粒在电场中移动的现象称为电泳

应用------氨基酸的分离与分析

氨基酸不同（pI不同，大小不同），在电场中泳动速度不同，

因此可以通过电泳将氨基酸彼此分开

∙当pH=pI时，氨基酸呈兼性离子，在电场中不移动

∙当pH>pI时，氨基酸带负电荷，在电场中向正极移动

∙当pH

∙意义

o凡是带电颗粒均可通过电泳加以分离

o电泳技术是生化常用分析技术

分析方法原理：

凝胶层析，电泳，离子交换等

电泳：

蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。

根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。

凝胶电泳：

凝胶电泳（英语：

Gelelectrophoresis）或称胶体电泳，是一大类技术，被科学工作者用于分离不同物理性质（如大小、形状、等电点等）的分子。

凝胶电泳通常用于分析用途，但也可以作为制备技术，在采用某些方法（如质谱（MS）、聚合酶链式反应（PCR）、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹）检测之前部分提纯分子。

圆盘电泳即聚丙烯酰胺凝胶电泳。

它是利用丙烯酰胺和双丙烯酰胺在催化剂的作用下聚合成大分子的凝胶物。

它同时兼有分子筛和电泳效应。

当样品通过凝胶进行电泳时，便可以根据其样品中各分子的电荷和分子量的不同而泳动出不同的区带。

由于聚丙烯酰胺凝胶化学性质较琼脂稳定，很少带有侧基，在电泳过程中，吸附作用与电渗作用均小，所以该技术的分辨率均高于其它琼脂电泳技术。

等电点聚焦（IEF）是在电场中分离蛋白质技术的一个重要发展，等电聚焦是在稳定的pH梯度中按等电点的不同分离两性大分子的平衡电泳方法。

在电场中充有两性载体和抗对流介质，当加上电场后，由于两性载体移动的结果，在两极间逐步建立稳定的pH梯度，当蛋白质分子或其他两性分子存在于这样的pH梯度中时，这种分子便会由于其表面电荷在此电场中运动，并最终达到一个使其表面静电荷为0的区带，这时的pH则是该分子的pI，聚焦在等电点的分子也会不断扩散，一旦偏离其等电点后，由于pH环境的改变，分子又立即得到正电荷或负电荷，从而又向pI迁移。

因此，这些分子总会是处于不断扩散和抗扩散的平衡中，在pI处得以“聚焦”.

离子交换层析利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定ＰＨ时，各蛋白质的电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。

如阴离子交换层析，含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。

凝胶层析

　　凝胶层析是按照蛋白质分子量大小进行分离的技术，又称之凝胶过滤，分子筛层析或排阻层析。

单个凝胶珠本身象个"筛子"。

不同类型凝胶的筛孔的大小不同。

如果将这样的凝胶装入一个足够长的柱子中，作成一个凝胶柱。

当含有大小不同的蛋白质样品加到凝胶柱上时，比凝胶珠平均孔径小的蛋白质就要连续不断地穿入珠子的内部，这样的小分子不但其运动路程长，而且受到来自凝胶珠内部的阻力也很大，所以越小的蛋白质，把它们从柱子上洗脱下来所花费的时间越长。

凝胶中只有很少的孔径可接受大的蛋白。

因此，大的蛋白质直接通过凝胶珠之间的缝隙首先被洗脱下来。

凝胶过滤所用的凝胶孔径大小的选择主要取决于要纯化的蛋白质分子量。

单抗，多糖，疾病原因

单克隆抗体：

动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，重排后具有不同基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。

当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。

被激活的B细胞分裂增殖形成效应B细胞（浆细胞）和记忆B细胞，大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液、体液中。

如果能选出一个制造一种专一抗体的浆细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。

单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体。

多糖（polysaccharide）：

是由糖苷键结合的糖链，至少要超过10个以上的单糖组成的聚合糖高分子碳水化合物，可用通式（c6h10o5）n表示。

由相同的单糖组成的多糖称为多糖，如淀粉、纤维素和糖原；以没的单糖组成的多糖称为杂多糖，如阿拉伯胶是由戊糖和半乳糖等组成。

多糖不是一种纯粹的化学物质，而是聚合程度不同的物质的混合物。

多糖类一般不溶于水，无甜味，不能形成结晶，无还原性和变旋现象。

多糖也是糖苷，所以可以水解，在水解过程中，往往产生一系列的中间产物，最终完全水解得到单糖。

“贫血”是指单位容积血液内红细胞数和血红蛋白含量低于正常。

贫血具体分类

缺铁性贫血

　　缺铁而影响血红蛋白合成所引起的贫血

出血性贫血

　　急性大量出血（如胃和十二指肠溃疡病、食管静脉曲张破裂或外伤等）所引起的。

溶血性贫血

　　红细胞过度破坏所引起的贫血，但较少见；常伴有黄疸，称为“溶血性黄疸”；

巨幼红细胞性贫血

　　缺乏红细胞成熟因素而引起的贫血，缺乏叶酸或维生素B12引起的巨幼红细胞性贫血，多见于婴儿和孕妇长期营养不良；巨幼细胞贫血是指骨髓中出现大量巨幼细胞的一类贫血。

实际上巨幼细胞是形态上和功能上都异常的各阶段幼稚红细胞。

这种巨幼细胞的形成是DNA合成缺陷的结果，核的发育和成熟落后于含血红蛋白的胞浆。

身体多种组织细胞皆受DNA合成缺陷的影响，但以造血组织最严重，特别是红系细胞。

粒系细胞和巨核细胞也都有形态上的改变和成熟细胞数量的减少。

巨幼细胞包括原巨幼细胞、早巨幼细胞、中巨幼细胞和巨幼细胞各不同发育阶段的幼稚红细胞。

这些巨幼细胞均比相应的正常幼红细胞大，浆核比例比正常略高。

经Wright染色后，原巨幼细胞的胞浆呈深蓝色，无颗粒，核周围有一染色较浅的圈；核圆形，染成紫色，最显著的特点是染色质呈颗粒状，彼此隔开，隔开处比较透亮，有时在核的周边有彼此分开的染色质小块，形成所谓“钟面”的状态；核仁较大，蓝色。

当细胞逐渐成熟，染色质保持其颗粒状结构，不易形成深染的固缩块状物。

有时巨幼细胞贫血较轻，巨幼细胞的形态往往不很典型，称为类巨幼细胞。

绝大多数巨幼细胞贫血是由叶酸、维生素B12缺乏引起的，但也有一小部分是例外，如抗代谢药物引起的巨幼细胞增生、红白血病和红血病、铁粒幼细胞贫血的巨幼细胞增多、遗传性乳清酸尿等。

不管是哪一种原因引起的，巨幼细胞的形态都是相同的。

经过适当的治疗，这些巨幼细胞都能很快变成正常的幼稚红细胞。

再生障碍性贫血

　　伴有胃酸缺乏和脊髓侧柱、后柱萎缩，病程缓慢；造血功能障碍引起的贫血，再生障碍性贫血（AA，简称再障），是由多种原因引起的骨髓干细胞、造血微环境损伤以及免疫机制改变，导致骨髓造血功能衰竭，出现以全血细胞（红细胞、粒细胞、血小板）减少为主要表现的疾病。

地中海贫血（Thalassemia）

是一组遗传性溶血性贫血。

其共同特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成。

导致血红蛋白的组成成分改变，本组疾病的临床症状轻重不一，大多表现为慢性进行性溶血性贫血。

酶活力，比活力，Km，（非）竞争性抑制动力学效应

酶活力单位（U,activeunit）：

　　酶活力单位的量度。

1961年国际酶学会议规定：

1个酶活力单位是指在特定条件（25℃，其它为最适条件）下，在1min内能转化1μmol底物的酶量，或是转化底物中1μmol的有关基团的酶量。

比活（specificactivity）:

每分钟每毫克酶蛋白在25℃下转化的底物的微摩尔数。

比活是酶纯度的测量。

米氏方程（Michaelis-Mententequation）:

表示一个酶促反应的起始速度（υ）与底物浓度（[s]）关系的速度方程：

υ=υmax[s]/（Km+[s]）

米氏常数（Michaelisconstant）:

对于一个给定的反应，使酶促反应的起始速度（υ0）达到最大反应速度（υmax）一半时的底物浓度。

酶活调节

竞争性抑制作用（competitiveinhibition）：

通过增加底物浓度可以逆转的一种酶抑制类型。

竞争性抑制剂通常与正常的底物或配体竞争同一个蛋白质的结合部位。

这种抑制使Km增大而υmax不变。

　　非竞争性抑制作用（noncompetitiveinhibition）:

抑制剂不仅与游离酶结合，也可以与酶-底物复合物结合的一种酶促反应抑制作用。

这种抑制使Km不变而υmax变小。

　　反竞争性抑制作用（uncompetitiveinhibition）:

抑制剂只与酶-底物复合物结合而不与游离的酶结合的一种酶促反应抑制作用。

这种抑制使Km和υmax都变小但υmax/Km不变。

底物浓度对反应速度的影响

　　⑴底物对酶促反应的饱和现象：

由实验观察到，在酶浓度不变时，不同的底物浓度与反应速度的关系为一矩形双曲线，即当底物浓度较低时，反应速度的增加与底物浓度的增加成正比（一级反应）；此后，随底物浓度的增加，反应速度的增加量逐渐减少（混合级反应）；最后，当底物浓度增加到一定量时，反应速度达到一最大值，不再随底物浓度的增加而增加（零级反应）。

　　⑵米氏方程及米氏常数：

根据上述实验结果，Michaelis&Menten于1913年推导出了上述矩形双曲线的数学表达式，即米氏方程：

ν=Vmax[S]/（Km+[S]）。

其中，Vmax为最大反应速度，Km为米氏常数。

　　⑶Km和Vmax的意义：

　　①当ν=Vmax/2时，Km=[S]。

因此，Km等于酶促反应速度达最大值一半时的底物浓度。

　　②当k-1>>k+2时，Km=k-1/k+1=Ks。

因此，Km可以反映酶与底物亲和力的大小，即Km值越小，则酶与底物的亲和力越大；反之，则越小。

　　③Km可用于判断反应级数：

当[S]<0.01Km时，ν=（Vmax/Km）[S]，反应为一级反应，即反应速度与底物浓度成正比；当[S]>100Km时，ν=Vmax，反应为零级反应，即反应速度与底物浓度无关；当0.01Km<[S]<100Km时，反应处于零级反应和一级反应之间，为混合级反应。

　　④Km是酶的特征性常数：

在一定条件下，某种酶的Km值是恒定的，因而可以通过测定不同酶（特别是一组同工酶）的Km值