SCTP01702 生长抑素生产工艺规程.docx
《SCTP01702 生长抑素生产工艺规程.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《SCTP01702 生长抑素生产工艺规程.docx（30页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
SCTP01702生长抑素生产工艺规程
文件名称
生长抑素工艺规程
编制者
审核者
批准者
编制日期
审核日期
批准日期
编制依据
《中华人民共和国药典》2005年版
《药品生产质量管理规范》1998年修订
《药品注册批件》2006S05219
颁发部门
质量管理部
制作备份
分发部门
质量管理部、生产技术部
实施日期
一、目的：
本工艺规程是经过验证并对生长抑素的设计、生产、包装、标准及质量控制进行全面描述的基准性技术文件，是制定岗位SOP、批生产记录和批生产指令的重要依据。
二、范围：
本规程适用于生长抑素的生产和质量管理，以及相关物料的供应。
三、职责：
生产技术部和质量管理部对本规程实施负责。
四、依据：
《中华人民共和国药典》2005年版
《药品生产质量管理规范》1998修订
《药品注册批件》2006S05219
五、目录
1.产品概述……………………………………………………………………………
2.制备方法……………………………………………………………………………
3.工艺流程……………………………………………………………………………
4.操作过程及工艺条件………………………………………………………………
5.原料质量标准………………………………………………………………………
6.辅料质量标准………………………………………………………………………
7.中间产品质量标准…………………………………………………………………
8.成品质量标准………………………………………………………………………
9.质量监控……………………………………………………………………………
10.物料消耗定额………………………………………………………………………
11.设备………………………………………………………………………………
12.技术安全及劳动保护……………………………………………………………
13.卫生………………………………………………………………………………
14.劳动组织与岗位定员、生产周期………………………………………………
15.技术经济指标的计算……………………………………………………………
六、内容
1．产品概述
1.1通用名：
生长抑素
1.2英文名/拉丁名：
Somatostatin
结构式：
分子式：
C76H104N18O19S2
分子量：
1638
1.3性状：
本品为白色粉末
1.4有效期：
24个月
1.5贮藏：
遮光，密封，2-8℃保存
1.6包装：
PVC瓶
1.7制剂：
注射用生长抑素
1.8批准文号：
国药准字号H20066874
2.制备方法
生长抑素的制备是采用多肽固相合成技术，在树脂上按生长抑素的一级结构依次连接氨基酸，形成多肽，然后用三氟醋酸（TFA）将多肽从树脂上分离下来，得到二氢生长抑素，使用空气氧化法氧化得到生长抑素粗品，再采用高效液相色谱技术对进行分离纯化，最终得到纯度为98%以上的生长抑素。
3．三氟醋酸生长抑素工艺流程图
RP-HPLC转化为醋酸盐
入库
检验合格
包装
4.操作过程及工艺条件
4.1合成
4.1.1准备
4.1.1.1根据合成指令分别领取合成所需的原料、辅料、试剂等，核对原料、辅料、试剂的名称、批号、物料编码、规格，准确无误后方可领取。
在物净间去除外包装，用75%乙醇擦拭后，经传递窗送至合成室。
4.1.1.2检查合成所需氮气是否已准备好，压力、阀门、管道状态是否正常。
4.1.1.3按规定进行清场，将合成所需容器具清洗干净，自然晾干后备用。
4.1.2溶液的配制
4.1.2.120%六氢吡啶（PIP）的配制：
用量筒量取200ml六氢吡啶溶解于二甲基甲酰胺（DMF）中并定容至1000ml，将配好的试剂倒入指定的试剂瓶中，贴上标签。
4.1.2.240%DIEA溶液的配制：
用量筒量取DIEA400ml，加入DCM400ml，摇匀；加入DMF至1000ml，摇匀即得，将配好的试剂倒入指定的试剂瓶中，贴上标签。
4.1.2.30.05mol/L醋酸铵溶液的配制：
称取7.7g醋酸铵，用去离子水溶解，定容至1000ml使成0.1mol/L醋酸铵溶液，然后用去离子水稀释配制成0.05mol/L醋酸铵溶液。
4.1.2.4Kaiser检测试液的配制
试液A：
2.5％茚三酮/丙酮（重量/体积）
试液B：
1克醋酸钙/50毫升醋酸/100毫升水
4.1.2.5将配制好的溶液倒入指定的试剂瓶中，帖好标签，填写配制记录。
4.1.3投料量的计算：
4.1.3.1根据合成树脂的量以及树脂的取代值求出理论产量，以及各种氨基酸和其他试剂的用量。
其中树脂载量与氨基酸的摩尔比=1：
3。
4.1.3.2各个氨基酸投料量为：
Fmoc-Aa用量（g）＝树脂质量×树脂取代值×Fmoc-Aa分子量×摩尔比/1000；精确称量保护氨基酸，并做好记录。
4.1.3.3氨基酸：
HBTU：
DIEA的摩尔比=1：
1：
2。
4.1.4树脂的检测：
取树脂10－30粒，加入一滴试液A，再加入一滴试液B，在70℃下加热5分钟，观察树脂的颜色。
若结果为淡黄色或灰白色，则可用于合成反应；若结果不是淡黄色或灰白色，表明树脂不符合要求，不得使用。
4.1.5按合成指令准确称量树脂倒入反应器中，将反应器接到合成仪正确位置。
向反应器中加入适量的DMF（树脂质量/g×2.5ml/g），树脂在其中浸泡1小时后，排空DMF。
4.1.6开启合成仪启动氨基酸连接程序，加入20%的PIP溶液适量（树脂质量/g×2.5ml/g），室温搅拌反应30分钟。
待去保护后，再取出少量树脂作Kaise检测，若结果为蓝色，则进行下一步，否则需继续进行去保护直至Kaise检测的结果为蓝色为止。
4.1.7准确称取所需各种氨基酸、HBTU，用适量的DMF溶解后（树脂质量/g×2.5ml/g），再按规定量准确量取DIEA，加入反应器中，将反应器接到合成仪上。
4.1.8继续启动此程序，待连接反应一段时间后（例如0.5小时），取出少量树脂作Kaise检测。
若Kaise检测为淡黄色或灰白色，则可进行下一步；若结果显蓝色，则需延长连接反应时间，直至Kaise检测结果为淡黄色或灰白色为止。
4.1.9待该步连接反应结束后，启动清洗程序，使用适量（树脂质量/g×2.5ml/g）的DMF连续清洗树脂3次。
重新启动该连接程序，连接下一个氨基酸，如此重复，直至氨基酸全部连接为止。
表1保护氨基酸名称及顺序
序号
弗马克保护氨基酸名称
氨基酸顺序
1
Fmoc-Cys（Trt）-Wang树脂
1
2
Fmoc-Ser（tBu）-OH
2
3
Fmoc-Thr（tBu）-OH
3、5
4
Fmoc-Phe-OH
4、8、9
5
Fmoc-Lys（Boc）-OH
6、11
6
Fmoc-Trp（Boc）-OH
7
7
Fmoc-Asn（Trt）-OH
10
8
Fmoc-Cys（Trt）-OH
12
9
Fmoc-Gly-OH
13
10
Fmoc-Ala-OH
14
4.2切割
4.2.1将装有合成产物的容器置冰水浴中，配制TFA/EDT/水（95：
2.5：
2.5）的混合溶液适量（树脂质量/g×10ml/g），加入含有合成产物的容器中，使得合成产物能够悬浮在混合溶液中。
4.2.2浓缩：
常温下用磁力搅拌器搅拌2小时后使用砂芯漏斗抽滤，滤液旋转蒸发至约1/4体积（浓缩至出现白色沉淀为佳）。
将浓缩后的滤液滴加到-10℃左右的冰乙醚中，乙醚的体积应约为滤液体积的10倍左右。
.
4.2.3将上述产物在-20℃左右静置30分钟后取出，摇匀抽滤，其沉淀物即为二氢生长抑素三氟醋酸盐。
将二氢生长抑素粗品置于真空干燥箱中减压干燥至恒重。
4.2.4氧化：
将二氢生长抑素粗品溶解在0.05mol/L的醋酸铵缓冲液中（PH=6-7），得到10mg/ml的溶液，空气氧化24h。
4.2.5浓缩及冻干：
将氧化液浓缩至1/10体积，冷冻干燥得到生长抑素粗品。
取出称重，并做粗肽含量检验。
做好标识置冰箱内保存。
4.3纯化
4.3.1粗品溶解：
准确称取所需的生长抑素粗品，倒入锥形瓶或烧杯中。
4.3.2按每0.5g粗品加入醋酸水溶液（1/3，v/v）10ml溶解，在磁力搅拌器上搅拌10分钟。
经离心或过滤处理除去不溶物，得到澄清溶液。
4.3.3贴上标签，注明品名、批号、溶解日期、操作人等。
4.3.4纯化设备及条件：
制备液相色谱仪：
美国VARIAN公司
色谱柱：
C18（￠77mm×25cm）
流动相A：
0.1％TFA/10％乙腈的水溶液
流动相B：
0.1％TFA/90％乙腈的水溶液
洗脱梯度：
（1）0-50min:
15-30％流动相B；
（2）50-60min:
30%-70％流动相B；
（3）60-63min:
70％流动相B；
（4）63-64min:
70%-15％流动相B；
（5）64-74min:
15％流动相B。
流速：
90ml/min
检测波长：
215nm
4.3.5操作：
按“SD-1型制备高效液相色谱仪标准操作规程”开机、进样。
用适宜的容器接收相应吸收峰所代表的样品。
4.3.6浓缩：
将纯化后的产品置旋转蒸发器中，在38-40℃下减压蒸发浓缩，浓缩体积至原体积的1/10。
用直径为0.45μm微孔滤膜过滤即得生长抑素三氟醋酸盐浓缩液。
4.3.7冷冻干燥：
将浓缩液置冻干盘中，在超低温冰箱下冷冻12小时以上，然后置冷冻干燥机中干燥48小时以上。
4.3.8将冻干所得的生长抑素三氟醋酸盐称重后，置于PVC瓶中,用封口膜密封，贴上标签，标明产品名称，批号，生产日期，重量等，置于冰箱中2℃～8℃保存。
4.3.9检验：
生产完成后由合成车间填写请验单，QA员取样交化验室检验，合格后签发生长抑素三氟醋酸盐检验报告书。
4.4反相HPLC换盐精制
4.4.1溶解：
将生长抑素三氟醋酸盐从冰箱中取出，放置室温下回温。
按精制指令准确称取所需的量，倒入锥形瓶或烧杯中。
4.4.2按每30g生长抑素三氟醋酸盐加入500ml流动相A溶解，用0.5mol/L的NaOH溶液调节pH=6.0，再用0.22μm滤膜滤过。
贴上标签，注明品名、批号、溶解日期、操作人等，备用。
4.4.3设备及条件：
制备液相色谱仪：
美国瓦里安公司prepstarSD-1
色谱柱：
C18（￠75mm×25cm）
流动相A：
1.0％醋酸/水溶液
流动相B：
1.0％醋酸/乙腈溶液
洗脱梯度：
流动相B：
1、0-30min
5%B
2、30-31min
5-30%
3、31-60min
30%
4、60-61min
30-5%
5、61-70min
5%
流速：
60ml/min
检测波长：
215nm
进样量：
200ml
4.4.4按“SD-1制备高效液相色谱仪标准操作规程”开机、进样、收集相应吸收峰所代表的组分溶液。
4.5浓缩：
收集到的组分溶液置旋转蒸发器中，在40℃下减压浓缩，浓缩体积至原体积的1/5,得到产品浓缩液。
4.6冷冻干燥
4.6.1将浓缩液置冻干盘中，在超低温冰箱下冷冻12小时以上，然后置冷冻干燥机中干燥48小时以上。
4.6.2将冻干所得的生长抑素称重后，置于PVC瓶中,用封口膜密封，贴上标签，标明产品名称，批号，生产日期，有效期、重量等，置于冰箱中2℃～8℃保存。
4.7检验：
生产完成后由纯化精制岗位填写请验单，QA员取样交化验室检验，合格后签发生长抑素检验报告书。
4.8质量管理部对批生产记录、批检验记录进行审核，合格后签发原料药批审核放行表，仓库凭审核放行表办理出入库手续
5．原料质量标准
5.1Fmoc-Ala-OH质量标准
氟马克-丙氨酸
Fmoc-Ala-OH
C18H17NO4311.3
本品为丙氨酸衍生物。
按纯度计算含C18H17NO4应不低于98.5%。
【性状】本品为白色粉末。
熔点本品的熔点（中国药典2005年版二部附录ⅥC）为148.0～153.0℃。
比旋度取本品，精密称定，用N,N-二甲基甲酰胺溶解并配制成每1ml含10mg的溶液，依法测定（中国药典2005年版二部附录ⅥE），比旋度应为-17.0º～-20.0º
【鉴别】分别取本品和对照品适量，照纯度测定项下方法，本品的保留时间与对照品一致。
【检查】溶液澄清度取本品0.3g，加2mlN,N-二甲基甲酰胺使溶解，溶液应澄清（中国药典2005年版二部附录ⅪB）。
水分取本品适量，照水分测定法依法测定（中国药典2005年版二部附录ⅧM第一法），水分含量不得过1.0%。
【纯度测定】照高效液相色谱法测定（中国药典2005年版二部附录ⅤD）
系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05mol/L三乙胺磷酸缓冲液（pH=2.3）为流动相A，以0.05mol/L三乙胺磷酸缓冲液（pH=2.3）-乙腈（30：
70）为流动相B，采用梯度洗脱，在30分钟内流动相B由50%增加到100%，并在31分钟时降为50%，用50%B平衡7分钟，检测波长为210nm，理论板数按主峰计算应不低于3000.
测定法取本品适量，加流动相制成每1ml中含0.2mg的供试品溶液。
取预试液20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，按归一化计算，即得。
【用途】肽合成用。
【贮藏】密封、阴凉避光处保存。
5.2Fmoc-Asn（Trt）-OH质量标准
氟马克-天冬酰胺
Fmoc-Asn（Trt）-OH
C38H32N2O5596.7
本品为天冬酰胺衍生物。
按纯度计算含C38H32N2O5应不低于98.5%。
【性状】本品为白色或类白色粉末。
熔点本品的熔点（中国药典2005年版二部附录ⅥC）为200℃（分解）。
比旋度取本品，精密称定，用甲醇溶解并配制成每1ml含10mg的溶液，依法测定（中国药典2005年版二部附录ⅥE），比旋度应为-13.0º～-17.0º
【鉴别】分别取本品和对照品适量，照纯度测定项下方法，本品的色谱保留时间与对照品一致。
【检查】溶液澄清度取本品0.3g，加2mlN,N-二甲基甲酰胺使溶解，溶液应澄清（中国药典2005年版二部附录ⅪB）。
水分取本品适量，照水分测定法依法测定（中国药典2005年版二部附录ⅧM第一法），水分含量不得过1.0%。
【纯度测定】照高效液相色谱法测定（中国药典2005年版二部附录ⅤD）
系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05mol/L三乙胺磷酸缓冲液（pH=2.3）为流动相A，以0.05mol/L三乙胺磷酸缓冲液（pH=2.3）-乙腈（30：
70）为流动相B，采用梯度洗脱，在30分钟内流动相B由50%增加到100%，并在31分钟时降为50%，用50%B平衡7分钟，检测波长为210nm，理论板数按主峰计算应不低于3000。
测定法取本品适量，加流动相制成每1ml中含0.2mg的供试品溶液。
取预试液20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，按归一化计算，即得。
【用途】肽合成用。
【贮藏】密封、阴凉避光处保存。
5.3Fmoc-Cys（Trt）-OH质量标准
氟马克-半胱氨酸
Fmoc-Cys（Trt）-OH
C37H31NO4585.73
本品为半胱氨酸衍生物。
按纯度计算含C37H31NO4应不低于98.5%。
【性状】本品为白色粉末。
熔点本品的熔点（中国药典2005年版二部附录ⅥC）为173.0～180.0℃。
比旋度取本品，精密称定，用N,N-二甲基甲酰胺溶解并配制成每1ml含10mg的溶液，依法测定（中国药典2005年版二部附录ⅥE），比旋度应为+19.0º～+21.0º
【鉴别】分别取本品和对照品适量，照纯度测定项下方法，本品的色谱保留时间与对照品一致。
【检查】溶液澄清度取本品0.3g，加2mlN,N-二甲基甲酰胺使溶解，溶液应澄清（中国药典2005年版二部附录ⅪB）。
水分取本品适量，照水分测定法依法测定（中国药典2005年版二部附录ⅧM第一法），水分含量不得过1.0%。
【纯度测定】照高效液相色谱法测定（中国药典2005年版二部附录ⅤD）
系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05mol/L三乙胺磷酸缓冲液（pH=2.3）为流动相A，以0.05mol/L三乙胺磷酸缓冲液（pH=2.3）-乙腈（30：
70）为流动相B，采用梯度洗脱，在30分钟内流动相B由50%增加到100%，并在31分钟时降为50%，用50%B平衡7分钟，检测波长为210nm，理论板数按主峰计算应不低于3000。
测定法取本品适量，加流动相制成每1ml中含0.2mg的供试品溶液。
取预试液20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，按归一化计算，即得。
【用途】肽合成用。
【贮藏】密封、阴凉避光处保存。
5.4Fmoc-Gly-OH质量标准
氟马克-甘氨酸
Fmoc-Gly-OH
C17H15NO4297.3
本品为甘氨酸衍生物。
按纯度计算含C17H15NO4应不低于98.5%。
【性状】本品为白色粉末。
熔点本品的熔点（中国药典2005年版二部附录ⅥC）为171.0～176.0℃。
【鉴别】分别取本品和对照品适量，照纯度测定项下方法，本品的色谱保留时间与对照品一致。
【检查】溶液澄清度取本品0.3g，加2mlN,N-二甲基甲酰胺使溶解，溶液应澄清（中国药典2005年版二部附录ⅪB）。
水分取本品适量，照水分测定法依法测定（中国药典2005年版二部附录ⅧM第一法），水分含量不得过1.0%。
【纯度测定】照高效液相色谱法测定（中国药典2005年版二部附录ⅤD）
系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05mol/L三乙胺磷酸缓冲液（pH=2.3）为流动相A，以0.05mol/L三乙胺磷酸缓冲液（pH=2.3）-乙腈（30：
70）为流动相B，采用梯度洗脱，在30分钟内流动相B由50%增加到100%，并在31分钟时降为50%，用50%B平衡7分钟，检测波长为210nm，理论板数按主峰计算应不低于3000。
测定法取本品适量，加流动相制成每1ml中含0.2mg的供试品溶液。
取预试液20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，按归一化计算，即得。
【用途】肽合成用。
【贮藏】密封、阴凉避光处保存。
5.5Fmoc-Lys（Boc）-OH质量标准
氟马克-赖氨酸
Fmoc-Lys（Boc）-OH
C26H32N2O6468.58
本品为赖氨酸衍生物。
按纯度计算含C26H32N2O6应不低于98.5%。
【性状】本品为白色粉末。
熔点本品的熔点（中国药典2005年版二部附录ⅥC）为125.0～135.0℃。
比旋度取本品，精密称定，用N,N-二甲基甲酰胺溶解并配制成每1ml含10mg的溶液，依法测定（中国药典2005年版二部附录ⅥE），比旋度应为-10.0º～-15.0º
【鉴别】分别取本品和对照品适量，照纯度测定项下方法，本品的色谱保留时间与对照品一致。
【检查】溶液澄清度取本品0.3g，加2mlN,N-二甲基甲酰胺使溶解，溶液应澄清（中国药典2005年版二部附录ⅪB）。
水分取本品适量，照水分测定法依法测定（中国药典2005年版二部附录ⅧM第一法），水分含量不得过1.0%。
【纯度测定】照高效液相色谱法测定（中国药典2005年版二部附录ⅤD）
系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05mol/L三乙胺磷酸缓冲液（pH=2.3）为流动相A，以0.05mol/L三乙胺磷酸缓冲液（pH=2.3）-乙腈（30：
70）为流动相B，采用梯度洗脱，在30分钟内流动相B由50%增加到100%，并在31分钟时降为50%，用50%B平衡7分钟，检测波长为210nm，理论板数按主峰计算应不低于3000。
测定法取本品适量，加流动相制成每1ml中含0.2mg的供试品溶液。
取预试液20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，按归一化计算，即得。
【用途】肽合成用。
【贮藏】密封、阴凉避光处保存。
5.6Fmoc-Phe-OH质量标准
氟马克-苯丙氨酸
Fmoc-Phe-OH
C24H21NO4387.4
本品为苯丙氨酸衍生物。
按纯度计算含C24H21NO4应不低于98.5%。
【性状】本品为白色粉末。
熔点本品的熔点（中国药典2005年版二部附录ⅥC）为180.0～186.0℃。
比旋度取本品，精密称定，用N,N-二甲基甲酰胺溶解并配制成每1ml含10mg的溶液，依法测定（中国药典2005年版二部附录ⅥE），比旋度应为-36.0º～-40.0º
【鉴别】分别取本品和对照品适量，照纯度测定项下方法，本品的色谱保留时间与对照品一致。
【检查】溶液澄清度取本品0.3g，加2mlN,N-二甲基甲酰胺使溶解，溶液应澄清（中国药典2005年版二部附录ⅪB）。
水分取本品适量，照水分测定法依法测定（中国药典2005年版二部附录ⅧM第一法），水分含量不得过1.0%。
【纯度测定】照高效液相色谱法测定（中国药典2005年版二部附录ⅤD）
系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05mol/L三乙胺磷酸缓冲液（pH=2.3）为流动相A，以0.05mol/L三乙胺磷酸缓冲液（pH=2.3）-乙腈（30：
70）为流动相B，采用梯度洗脱，在30分钟内流动相B由50%增加到100%，并在31分钟时降为50%，用50%B平衡7分钟，检测波长为210nm，理论板数按主峰计算应不低于3000。
测定法取本品适量，加流动相制成每1ml中含0.2mg的供试品溶液。
取预试液20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，按归一化计算，即得。
【用途】肽合成用。
【贮藏】密封、阴凉避光处保存。
5.7Fmoc-Ser（tBu）-OH质量标准
氟马克-丝氨酸
Fmoc-Ser（tBu）-OH
C22H25NO5383.44
本品为丝氨酸衍生物。
按纯度计算含C22H25NO5应不低于98.5%。
【性状】本品为白色粉末。
熔点本品的熔点（中国药典2005年版二部附录ⅥC）为125.0～130.0℃。
比旋度取本品，精密称定，用乙酸乙酯溶解并配制成每1ml含10mg的溶液，依法测定（中国药典2005年版二部附录ⅥE），比旋度应为+24.0º～+26.0º
【鉴别】分别取本品和对照品适量，照纯度测定项下方法，本品的色谱保留时间与对照品一致。
【检查】溶液澄清度取本品0.3g，加2mlN,N-二甲基甲酰胺使溶解，溶液应澄清（中国药典2005年版二部附录ⅪB）。
水分取本品适量，照水分测定法依法测定（中国药典2005年版二部附录ⅧM第一法），水分含量不得过1.0%。
【纯度测定】照高效液相色谱法测定（中国药典2005年版二部附录ⅤD）
系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05mol/L三乙胺磷酸缓冲液（pH=2.3）为流动相A，以0.05mol/L三乙胺磷酸缓冲液（pH=2.3）-乙腈（30：
70）为流动相B，采用梯度洗脱，在3
升级会员 