优质细胞融合实验报告推荐word版 10页.docx

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优质细胞融合实验报告推荐word版10页

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细胞融合实验报告

篇一：

细胞融合实验报告

细胞融合CellFusion

xx201X00140120同组者：

xx201X年3月14号

【实验目的】

1、了解动物细胞融合的常用方法

Learncommonmethodsofcellfusion

2、学习用PEG进行细胞融合的基本操作过程

UsePEGtoinducecellfusion

3、注意动物细胞融合的过程中细胞的行为和变化

Payattentiontotheactionandchangeofcellsduringtheprocessofcellfusion

【实验原理】

细胞融合是指把相同或不同类型的两个或多个细胞融合成一个具有共同细胞质和单一、连续细胞膜的细胞。

Cellfusionisthattwoormorecells，ofsameordifferenttypes，befusedbycertaintechniquetoproduceonecellwithacommoncytoplasmandasinglecontinuouscellmembrane.

目前用于细胞融合的有以下三种常用的方法：

1、Virus病毒

2、PEG聚乙二醇

3、Electricshock电击

通过结合化学和电击的方法，可以使细胞融合率高达70%

Upto70%cellfusionefficienciesbycombiningbothchemicalandelectricalfusionprotocols.

细胞融合率=已融合的细胞核总数/所有细胞的细胞核总数*100%

Cellfusionefficiencyistheratioofthetotalnumberoffusednucleusoverthatofallthecellsinthevision，usuallyshownaspercentage.

除了诱导剂外，其他因素，如细胞类型和性质、温度、PH值、离子强度等也会影响细胞融合率。

Inadditiontoinducers，someotherfactors，suchascelltypeandnature，temperature，PHvalue，ionicstrengthetc，willalsoaffecttheefficiencyofcellfusion.

聚乙二醇PEG，又名聚环氧乙烷PEO、聚氧乙烯POE，是一种具有重要商业价值的聚醚。

Poly-ethylene-glycol，alsoknownaspoly-ethylene-oxide、polyoxyethylene，isakindofimportantpolyetherofgreatcommercialvalue.

PEG分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触处质膜的脂类分子发生疏散和重组，改变接触处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合，产生体细胞杂合体。

PEGmoleculecouldchangethemembranestructureofcellswhich

makesthelipidmoleculedisperseandrecombineatthepointofcontractbetweentwocells.Withthechangeoftheaffinityandthesurfacetensionofthelipidbilayeratthepointofcontract，cellfusionoccurs，producingsomaticcellhybrids.

细胞融合技术的应用：

applicationofcellfusion

1、生产单克隆抗体productionofmonoclonalantibody

2、基因定位Genemapping

3、绘制人类基因图谱Human’sgeneticmap

4、原生质体新培养体系Newculturesystemforprotoplast

5、培育抗逆植株productionofadverse-resistantplants

6、生物药品的生产productionofbiologicaldrug

7、为发酵工程提供优良菌种providingstrainsforfermentationindustry

【实验材料】

1、试剂

用Alsver液悬浮培养的鸡血细胞，0.85%的生理盐水，GKN溶液，50%PEG溶液

2、仪器和工具

盖玻片、载玻片、离心管、离心机、滴管、显微镜等

【实验方法】

1、向1ml血细胞悬液中加入4ml0.85%的生理盐水，清洗细胞，1000~1200r/min离心5min，弃上清。

Add4ml0.85%physiologicalsalineinto1mlbloodcellsuspension，washthoroughlyandcentrifugefor5minutesat1000~1200r/min，discardsupernatant

2、重复第一步1~2次

Repeatstep1onceortwice

3、细胞沉淀中加入GKN溶液至1~2ml，混匀

AddGKNsolutionintocellpelletofstep2to1~2mlandmix

4、加0.5ml的混合液到1.5ml的GKN溶液中，充分混匀，红细胞密度应为1.5*107/ml

Add0.5mlmixedsolutioninto1.5mlGKNsolution，mixthemup，andthedensityofRBCinthissuspensionshouldbearound1.5*107/ml

5、取1ml上述红细胞悬液，加入0.5ml50%PEG溶液，室温下静置2~3min，混匀，再进行镜检观察

Add0.5ml50%PEGsolutioninto1mlRBCsuspension，incubateatroomtemperaturefor2~3minbeforeobserveundermicroscope

【注意事项】

1、制备的鸡血红细胞浓度不能太高，否则细胞容易聚集，影响融合效果。

ThedensityofRBCshouldnotbetoohigh，oritwouldbeeasytoleadtothegatheringofcells，whichwouldaffecttheresultofcellfusion.

2、小心仔细，以免出错

Becareful，lestmistakes.

3、溶液的pH值8.0-8.2，可采用缓冲液。

温度为38-40℃。

适当地提高温度可以使细胞融合得更充分，但温度不能过高，以免细胞膜上的蛋白质变性。

ThePHvalueofsolutionshouldbe8.0~8.2，wecanusebuffertocontrolit.Thetemperatureshouldbe38~40℃，increasingthetemperatureappropriatelycancontributetoahigherratioofcellfusion，butahightemperaturemayleadtoproteindenaturation.

【实验结果】

图1未加入PEG时的细胞

图2加入PEG后的细胞（10*40）

经过PEG的处理，鸡血红细胞中有少部分的细胞发生了融合，但融合大多是刚刚开始，或两个细胞细胞质膜刚刚接触，大部分细胞

篇二：

动物细胞融合实验报告

科目细胞生物学实验实验题目动物细胞融合日期201X.03.01

实验二：

动物细胞融合

一、实验目的

1、了解动物细胞融合的常用方法。

2、学习化学融合的基本操作过程。

3、观察动物细胞融和过程中细胞的行为和变化。

二、实验用品

1、材料

鸡血红细胞

2、试剂

50%PEG、Hank’s溶液（pH7.4）、Alsever’s细胞保存液0.85%氯化钠溶液。

3、器材

普通光学显微镜、离心机、量筒、载玻片、盖玻片离心管、废液缸等。

三、实验原理

细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并

为双核或者多核细胞的过程。

目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括病毒诱导融合、化学诱导融和和电激诱导融合。

1、病毒诱导融和

仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞

的融时也可介导细胞与细胞的融合。

用紫外线灭活后，这些病毒即可

科目细胞生物学实验实验题目动物细胞融合日期201X.03.01诱导细胞发生融合。

2、化学诱导融合

很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇（PEG）、二甲基亚

砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。

这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。

在恢复过程中想接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。

化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。

PEG是广泛使用的化学融合剂。

3、电激诱导融合

包括电诱导、激光诱导等。

其中，电诱导是先使细胞在电场中极

化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。

电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。

四、实验步骤

1、鸡血细胞的制备与保存（老师完成）。

2、取鸡血1ml+0.85%的NaCl溶液4ml，在1200r/min的离心机内离心5分钟。

科目细胞生物学实验实验题目动物细胞融合日期201X.03.01

3、将上一步的沉降血球（去上清液后，约0.1-0.2ml），加入GKN液至4ml，制成细胞悬液。

4、有下面两种方法：

方法一：

取上步得到的细胞悬液1ml，加0.5ml的PEG液，静置5min后摇匀，制片，在显微镜下观察。

方法二：

取上步得到的细胞悬液0.5ml，加0.5ml的PEG液，静置5min后加0.5mlGKN液，摇匀,制片，在显微镜下观察。

五、实验结果

细胞融合观察（10×40）

细胞初步凝集细胞初步相接细胞融为一体细胞发生变形（10×40）（10×40）（10×40）（10×40）

六、结果分析

科目细胞生物学实验实验题目动物细胞融合日期201X.03.01

1、结果中由于PEG的作用，细胞变形情况较为严重。

2、因为PEG作用时间长，细胞受到严重损伤；且混合液粘度较高，没有观察到细胞的运动情况。

3、因为PEG有的凝集作用，红细胞发生多细胞的凝集反应。

4、因融合时间短的缘故，没有观察到细胞的完全融合。

七、注意事项

1、PEG特性：

亲脂性，与质膜结合，改变磷脂双分子层的结构；PEG可使膜脱水，以收缩促进融合；有促使细胞凝集作用。

2、PEG对细胞融合的作用效果与毒害作用随着分子量的增加而增大，在实验过程中一般取其分子量800-6000。

若做细胞融合培养实验则需考虑融合细胞的成活率，故使用分子量不大于1000的PEG溶液；做细胞融合实验，本次试验中采用分子量为4000的PEG。

3、PEG对细胞融合的作用效果和毒害作用随着浓度的增加而增大。

在实验过程中一般采用40%-60%浓度的PEG溶液。

4、在制备鸡血红细胞时要反复离心洗涤制备的鸡红细胞液以清洗掉杂质。

篇三：

细胞融合实验报告

聚乙二醇介导的细胞融合

201X年2月19星期一

陈倩倩（118627140313）同作者：

郑梦璐谢雨后赵松

1、文摘

细胞能不受种属的局限可实现种间生物体细胞的融合,使远缘杂交成为可能,因而是改造细胞遗传物质的有力手段。

它的意义在于从此打破了仅仅依赖有性杂交重组基因创造新种的界限,扩大了遗传物质的重组范围。

但融合后获得的杂种细胞具有染色体异倍性,致使细胞株的遗传性不稳定、植株不育性、畸形、生育迟缓等不符合育种要求的性状出现,直接利用杂种细胞作育种材料目前还有许多障碍。

细胞融合技术避免了分离、提纯、剪切、拼接等基因操作,在技术和仪器设备上的要求不像基因工程那样复杂,投资少,有利于广泛开展研究和推广,有着重大的实践意义,正得到科学界的日益重视。

自从2（来自:

在点网）0世纪70年代Kao和Michayluk用聚乙二醇（PEG,polyethyleneglycol）诱导大麦、大豆等植物原生质体融合后PEG法诱导细胞融合以其容易制备、活性稳定、不需要特别的仪器设备、操作简便等优点,被普遍地应用于生物、遗传、医药等研究领域.高体积分数、高相对分子质量的PEG会对细胞产生毒性,是限制其被广泛应用的瓶颈,此外,由于该方法涉及的影响因素较多,进一步加大了获得理想细胞融合率的难度.本实验主要研究PEG的浓度和细胞浓度对细胞融合率的影响。

2、背景介绍

细胞融合现象最初是在动物细胞中发现的。

1958年日本学者阅田善雄用紫外光灭活的仙台病毒在体外诱导艾氏腹水红纲胞相互融合。

1965年他和Harris等在此基础上各自分别采用灭活的仙台病毒,诱导产主了第一个种间融合并培养成活。

一年后Yerganzan又进一步使用仙台病毒获得了能够增殖的杂种细胞。

后来Littlefield用缺陷型细胞HGPRT-XTK-细胞杂交,用HAT选择培养基选出杂种细胞,开创了细胞工程的新纪元,继而推动了整个生物工程的发展。

1975年英国科学家Milestein和Kohler在体细胞杂交基础上创立了B淋巴细胞杂交瘤技术,他们将在体外不能长期生存的经绵羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞（B淋巴细胞）与在体外能迅速增殖的小鼠骨髓溜细胞在聚乙二醇（PEG）或汕台病毒的作用下融合而产生杂交瘤细胞,所得杂交瘤细咆承袭了两种亲代细胞的遗传特性,既保存了瘤细胞在体外迅速增殖传代的能力,又继承了免疫细胞合成和分泌的能力,即能分泌抗绵羊红细胞的抗体。

该技术被誉为免疫学的一次革命其创建者荣获1984年诺贝尔医学和生理学奖。

B细胞杂交瘤可在体外大量培养,也可接种到小鼠腹腔中繁殖。

自1975年以来,世界各国科学家采用B细胞杂交瘤技术已制备出万余种单抗,其中绝大部分为小鼠墓抗。

所谓单抗就是指培养单个杂交瘤细胞使之无性生殖形成细胞集落（称为克隆）,由这些细胞所产生的只能识别和对付一种抗原的特导性抗体就称为单克隆抗体,即单抗。

单抗于八十年代处已领尤商品化，现已有百余种诊断试剂和数种治疗剂投放市场。

目前,单抗新兴产业正在形成。

随着B淋巴细胞杂交瘤技术的建立和发展,B淋巴

细抱杂交瘤技术也发展起来了。

早在1977年就有T细胞杂交瘤的报道,但有功能的、能分泌各种因子的T细胞杂交瘤的报道则始于1978年,如抗原特异的抑制因子,制造T细胞杂交瘤技术的基本操作过程和B细咆杂交瘤技术相似,只是用于融合的细胞是激活或抗原致敏的T细胞和酶缺陷型的淋巴瘤细胞。

目前,由于技术上的限制,T细胞杂交瘤还未能发挥其固有的潜能,所以,虽然这项技术开展的时间不短,但收到的成效却不如B细胞杂交瘤那么显著.

最近研究表明,细胞融合与病毒和细胞之间的融合以及细胞内的膜泡融合有许多相似之处,即带包被的病毒（或细胞）通过转膜病毒蛋白介导与宿主细胞的细胞膜进行融合。

I类病毒融合蛋白包括流感病毒红血球凝集素（HA）和人类免疫缺陷病毒包被蛋白,它们都具有相似的结构域,即都具有a-螺旋结构。

病毒和细胞之间正是通过这些蛋白来完成融合过程（伴随有构象的变化）的。

细胞内的膜泡融合也是如此,其相关融合蛋白包括GTPases及SNARE家族。

因此推测细胞融合采用相似的机理。

然而细胞融合蛋白并不全具有a-螺旋结构,提示a-螺旋并非融合所必需。

3、材料和方法

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3.1材料

用Alsver液悬浮的鸡血细胞Alsver溶液，

0.85%的生理盐水，GKN溶液，

50%的聚乙二醇溶液3.2工具和仪器

盖玻片，载玻片，离心管，试管，吸管，显微镜，离心机3.3实验步骤

1.向1ml血细胞悬液中加入4ml0.85%生理盐水，清洗细胞，1000-1200r/min离心5min。

弃上清。

2.重复第一步一到两次。

3.细胞沉淀中加GKN溶液至2ml，混匀。

4.加0.5ml的混合液到1.5ml的GKN溶液中，充分混匀。

红细胞的密度应该是1.5×107/ml。

将这一管标记为A。

5.将0.5ml的液体移到另一个管B中，加1.0mlGKN溶液，充分混匀。

B管中血细胞的浓度变成5.0×106/ml.

6.按照下表，将A、B中的溶液平均分成三份，分别标记为A1-3和B1-3共设立6组每组各含有0.5ml细胞悬液。

7.GKN溶液1,0.5and0ml分别加到第6步中标记的1，2和3号管中。

然后各管中加0,0.5and1ml50%PEG溶液至总体积为2ml。

8.在室温下静置2-3min，然后镜检。

9.将红细胞悬液涂片，在光镜下观察细胞融合情况。

寻找融合细胞并计算融合率。

4、结果

由上述结果可知：

1.由单独的A组（或B组）内部相互对照可知，在细胞浓度相同的情况下，PEG浓度越大诱导细胞融合率越高。

2，由A－3、B－3组相互对照可知，在相同浓度的PEG的情况下，细胞浓度越大诱导细胞融合率越高。

而矛盾的是，比较A-2、B-2组相互对照结果却正好相反。

5、讨论

1，通过这次实验可以看出，诱导细胞融合成功的因素一方面与诱导剂的浓度有关，在一定的范围内诱导剂PEG的浓度越高，诱导成功率越高；另一方面与细胞的浓度有关，相互接触的细胞才有可能进行融合，因此，在一定的范围内，细胞的浓度越高诱导成功率越高。

2，对于结果2的矛盾可能原因是因为细胞融合本身就是概率事件，而且这次实验仅仅只是一次实验统计的结果，所以结果并不具有代表性。

因此尽管看似矛盾的结果，实际上并不矛盾。

要得到更加明确的结果，需要对更多相同的实验统计得到的结果进行分析。

3，通过这次试验我知道，一次实验的结果并不值得信赖，需要多次统计检验才能获得相对而言比较接近事实的结果。

6、参考文献

1，李秀兰、姜曰水聚乙二醇诱导细胞融合影响因素菏泽学院学报1673-2103（201X）05-0079-04

2，周显青细胞融合的研究和发展淄博师专学报第二期1995年6月。

3，李保华细胞融合研究进展安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.201X,36（15）:

6187-6188,6207