常规实验所用溶液配方全套汇编.docx

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常规实验所用溶液配方全套汇编

常规实验所用溶液配方大全

常规实验所用溶液配方大全

1.0.5mol/LEDTA配制

组分浓度：

0.5mol/lEDTA，PH=8

配制量：

500ml

配制方法

（1）称取93.06克EDTA.Na2.2H2O，置于500ml烧杯中

（2）加入约400mlddH2O.用热磁力搅拌器充分搅拌

（3）用NaOH调节PH值到8，约用10克固体NaOH

（4）在溶液冷却后，再用NaOH调节至PH=8

（5）加ddH2O将溶液定容到500ml

（6）高温高压灭菌后，室温保存

2.NaOH溶液的配制

组分浓度：

5mol/lNaOH

配制量：

100ml

配制方法

（1）称取固体NaOH20克于容器中

（2）加入ddH2O定容到100ml

3.100mmol/lTris-HCl的配制

组分浓度：

mmol/lTris-HCl，PH=6.4

配制量：

250ml

配制方法

（1）称取3.025克Tris于250ml烧杯中.

（2）加入约200mlddH2O充分搅拌溶解.

（3）用浓盐酸调节PH值到6.4.所用浓盐酸约3ml

（4）将溶液定容至250ml

（5）用棕色瓶分装于4度冰箱中

（6）如使用，用水浴加热溶解.

4.氯仿-异戊醇的配制：

配制方法

（1）简单的体积混合，既要求比例为24：

1即可

（2）储存于棕色玻璃瓶子中

（3）置于4度冰箱以便日后使用

5.去污剂：

CTAB：

可将细胞膜裂解，使DNA释放到提取液中，同时也使组织匀浆中的蛋白质变性.

EDTA：

能与DNase的辅助因子Mg2+结合，使DNase失去活性，不能降解从细胞中释放的DNA.

6.还原剂巯基乙醇：

它抑制从细胞中释放的多酚氧仿.防止植物组织发黄变褐.

7.氯仿—异戊醇：

它可把组织匀浆中变性的蛋白质除去，将DNA与细胞中的蛋白质、碳

水化合物等分开除去.

8.RNase：

它可去除核酸中的RNA，只留下DNA.

9.硅珠悬浮液的配制

（1）称取1.2g硅珠粉，溶解于10ml无菌水中.

（2）放入4℃冰箱备用.

（3）使用时先涡旋使其混合均匀

10.10×TE，500ml配制如下：

将100mMTris-Hcl（PH=8.0）6.057g与10mMEDTA（PH=8.0）1.8612g溶于400ddH2O中，调PH=8.0，定容到500ml。

11.1×TEBuffer

组成浓度：

10mMTris-HCl1mMEDTAPH=8.0

配制量：

500ml

配制方法：

量取下列溶液于500ml烧杯中

1MTris-HClBufferPH=8.05ml

0.5MEDTAPH=8.01ml

向烧杯中加入约400mlddH2O均匀混合；将溶液定容到500ml后，高温高压灭菌；室温保存.

12.聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE

PAGE操作流程及注意事项：

1、涂胶

1）将有耳玻片（耳朝下）泡于反硅化剂中，新液25分钟，旧液30分钟.

2）涂无耳正面玻片硅化剂.均匀点四滴，轻而匀的沿一个方向涂三次，静10分钟.

3）到时间取出.打开通风橱风干30分钟.

2、封胶

1）将两玻片对贴于橡胶框中，放平，用力拧死，夹住橡胶管.

2）溶废琼脂胶，分两次：

第一次50秒，第二次10-20秒，防止沸出.

3）用小细长枪头通透加胶枪头，便于加样通畅，少起气泡.

4）吸2500-3000ul液胶加速沿玻片边缘快速顺下滴，将两面玻片充分封死，防止漏胶.以水平底线面水平高于底为佳，静止凝胶15分钟.（有时可先在封口加一点TBE以润滑玻片，利于胶流下）

3、灌胶

1）用长细枪头透开加胶枪头

2）从中间加入，每次不要全部打完，留一点在枪头内.防止断流而导致胶中含有气泡.

3）插梳子时两端平整，梳子紧贴玻板，梳齿头部不可有气泡.

4）拔梳子时先加一倍TBE液将梳子泡透，然后平行用力拔出.

5）在插梳子15分钟内跟踪观察，适当下按，保证孔的深度.

6）等待2小时，以便胶充分凝固.

4、吹孔

1）向中间槽加入1倍粗制TBE，要淹没过内玻片约1厘米.

2）拔梳子，小心平稳，均匀平衡.

3）调1000p枪到300-600ul，进行吹孔，将小孔内沉淀物吹打干净，加样中再视时吹5、加样

1）用细长专用枪加入DNA0.5ul.

2）一手托另一臂的肘，以保证加样手不抖.

3）一定垂直加到孔中去，不脱尾，不吸水，不靠壁，干净利落.

4）加完一次.在放于桌旁的吸纸上，将细枪头上余液吸干.

5）首、中、尾各留1到2个孔，两面胶孔的Marker不完全一样，以便区分.

6）加Marker0.15ul一般取0.3ul每孔注如一半，可用两个孔.

6、跑胶

1）向两侧槽中加入粗制TBE，至U管线处.

2）打开电源，稳压到120V

3）电泳2h左右

4）当样品跑到底部2cm处，关闭电源.

7、撬玻片

1）刀片不伸入过深.刀片平行于玻片，稍用力.

2）将没有硅化剂的无耳玻片放于水盘中，还有梳子.

3）清理琼脂胶，放于烧杯中.

4）胶玻片放于盘中，银染.

13.2、TBE电泳母液（10×）的配制

1）分别称取54克Tris碱，27.5克硼酸，20ml0.5mol/EDTA（PH=8.0）

2）将各组分别加入1升烧杯中，用ddH2O定容到1升.

3）在电泳时使用1倍工作液，按1：

4与水混合.

4）1倍液是为了增加电泳工作液的电流的电流量.

5）盛于玻璃瓶，在室温保存.

14.AgNO3的配制

量取AgNO3原液2500ul；将250mlddH2O和2500ulAgNO3加入胶玻片上.

（AgNO3原液的配制：

50ml中含AgNO37.5g浓度为0.15g/ml）

15溴化乙锭（10mg/ml）

﹡组分浓度10mg/ml溴化乙锭

﹡配制量100ml

1．称取1.0g溴化乙锭，加入到200ml容器中。

2．加入去离子水100ml，充分搅拌数小时完全溶解溴化乙锭。

3．将溶液转入棕色瓶，室温避光保存。

4．溴化乙锭最终工作浓度为0.5μg/ml。

15.20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）：

将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

17.10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－freeRNase）：

溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH5.0）。

溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。

用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。

（配制过程中要戴手套）

16.5mol/L氯化钠（NaCl）：

溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。

10N氢氧化钠（NaOH）：

溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10％SDS（十二烷基硫酸钠）：

称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

用水定容至1L。

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：

溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。

100％三氯乙酸（TCA）:

在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

（稀释液应在临用前配制）

2.5％X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：

溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃

17.DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水

加100ulDEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1％。

在37℃温浴至少12h，然后在15psi条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。

DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

18.TE（用于悬浮和贮存DNA）

成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量

10mmol/LTris－HCl

1mmol/LEDTA

水1ml1mol/LTris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）

200ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

98.8ml

19.5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液

成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量

445mmol/LTris碱

445mmol/L硼酸盐

10mmol/LEDTA

水54g

27.5g硼酸

20ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）

补足1L

一.常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺（Spermidine）:

溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：

溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）：

将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白（BSA）：

加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：

在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：

溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：

溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：

溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/LEDTA:

配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/LHEPES：

将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/LHCl：

加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/mlIPGT：

溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2:

溶解20.3gMgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。

100mmol/LPMSF：

溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。

分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）：

将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

10mg/mlRnase（无DNase）（DN