实验室生物安全手册.docx

实验室生物安全手册.docx

《实验室生物安全手册.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验室生物安全手册.docx（22页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

实验室生物安全手册

实验室生物安全规范

第一部分基本规范

根据感染性微生物的相对危害程度（危险度2级，病原体能够对人致病，但对实验室工作人员或环境不易导致严重危害），本实验室为基础实验室，属于二级生物安全水平。

进入规定

1、在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志（图1）。

2、只有经批准的人员方可进入实验室工作区域。

3、实验室的门应保持关闭。

4、儿童不应被批准或允许进入实验室工作区域。

5、进入动物房应当经过特别批准。

6、与实验室工作无关的动物不得带入实验室。

图1张贴于实验室门上的生物危害警告标志

人员防护

1、在实验室工作时，任何时候都必须穿着工作服。

2、在进行可能直接或意外接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的手套。

手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。

3、在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。

4、为了防止眼睛或面部受到泼溅物、碰撞物或人工紫外线辐射的伤害，必须戴安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。

5、严禁穿着实验室工作服离开实验室，（如去餐厅、咖啡厅、办公室、图书馆、员工休息室和卫生间）。

6、不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。

7、禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。

8、禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。

9、在实验室内用过的工作服不得和日常服装放在同一柜子内。

实验室工作区

1、实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。

2、发生具有潜在危害性的材料溢出以及在每天工作结束之后，都必须清除工作台面的污染。

3、所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须清除污染。

4、在进行包装和运输时必须遵循国家和∕或国际的相关规定。

5、如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。

生物安全管理

1、实验室主任（对实验室直接负责的人员）负责制订和采用生物安全管理计划以及安全或操作手册。

2、实验室主管（向实验室主任汇报）应当保证提供常规的实验室安全培训。

3、要将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员，同时要求他们阅读生物安全或操作手册，并遵循标准的操作和规程。

实验室主管应当确保所有实验室人员都了解这些要求。

实验室内应备有可供取阅的安全或操作手册。

4、应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。

5、如有必要，应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、监测和治疗，并应妥善保存相应的医学记录。

第二部分实验室技术

实验室伤害以及与工作有关的感染主要是由于人为失误﹑不良实验技术以及仪器使用不当造成的。

本部分概要介绍了避免或尽量减少这类常见问题的技术和方法。

移液管和移液辅助器的使用

1、应用移液辅助器，严禁用口吸取。

2、所有移液管应带有棉塞以减少移液器具的污染。

3、不能向含有感染性物质的溶液中吹入气体。

4、感染性物质不能使用移液管反复吹吸混合。

5、不能将液体从移液管内用力吹出。

6、污染的移液管应完全浸入适当的消毒液中，并在消毒液中浸泡适当时间后再进行处理。

7、盛放废弃移液管的容器应当放在生物安全柜内。

8、为了避免感染性物质从移液管中滴出而扩散，在工作台面应当放置一块吸有消毒液的纸，使用后将其按感染性废弃物处理。

生物安全柜的使用

1、生物安全柜运行正常时才能使用。

2、生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。

3、安全柜内应尽量少放置器材或标本，不能影响后部压力排风系统的气流循环。

4、所有工作必须在工作台面的中后部进行，并能够通过玻璃观察挡板看到。

5、尽量减少操作者身后的人员活动。

6、操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流。

7、不要使实验记录本﹑移液管以及其他物品阻挡空气格栅，因为这将干扰气体流动，引起物品的潜在污染和操作者的暴露。

8、工作完成后以及每天下班前，应使用70%的酒精对生物安全柜的台面进行擦拭，但切忌用酒精擦拭玻璃挡板。

9、在安全柜内的工作开始前和结束后，安全柜的风机应至少运行5min。

10、在生物安全柜内操作时，不能进行文字工作。

血清的分离

1、只有经过严格培训的人员才能进行这项工作。

2、操作时应戴手套以及眼睛和黏膜的保护装置。

3、血液和血清应当小心吸取，而不能倾倒。

严禁用口吸液。

4、移液管使用后应完全浸入适当的消毒液中，并在消毒液中浸泡适当的时间，然后再丢弃或灭菌清洗后重复使用。

5、带有血凝块等的废弃标本管，在加盖后应当放在适当的防漏容器内高压灭菌。

离心机的使用

1、应按照操作手册来操作离心机。

2、离心管在使用前应检查是否破损。

3、用于离心的离心管应当始终牢固盖紧。

4、离心桶的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。

5、离心桶和十字轴应按重量配对，并在装载离心管后正确平衡。

6、操作指南中应给出液面距离心管管口需要留出的空间大小。

7、空离心桶应当用蒸馏水来平衡。

8、每次使用后，要清除离心桶、转子和离心机腔的污染。

9、使用后应当将离心桶倒置存放使平衡液流干。

10、应当每天检查离心机内转子部位的腔壁是否被污染或弄脏，如污染明显，应重新评估离心操作规范。

冰箱与冰柜的维护和使用

1、冰箱、低温冰箱和干冰柜应当定期除霜和清洁，应清理出所有在储存过程中破碎的安瓿和试管等物品。

清理时应戴厚橡胶手套并进行面部防护，清理后要对内表面进行消毒。

2、储存在冰箱内的所有容器应当清楚地标明内装物品的科学名称、储存日期和储存者的姓名。

未标明的或废旧物品应当高压灭菌并丢弃。

3、应当保存一份冻存物品的清单。

4、除非有防爆措施，否则冰箱内不能放置易燃溶液。

冰箱门上应注明这一点。

装有冻干物质安瓿的开启

1、首先清除安瓿外表面的污染。

2、如果管内有棉花或纤维塞，可以在管上靠近棉花或纤维塞的中部锉一痕迹。

3、用一团酒精浸泡的棉花将安瓿包起来以保护双手，然后手持安瓿从标记的锉痕处打开。

4、将顶部小心移去并按污染材料处理。

5、如果塞子仍然在安瓿上，用消毒镊子除去。

6、缓慢向安瓿中加入液体来重悬冻干物，避免出现泡沫。

第三部分消毒和灭菌

一、定义

关于消毒和灭菌有许多不同的术语，下面是生物安全中较常用的：

抗菌剂（antimicrobial）能够杀死微生物或抑制它们生长和繁殖的制剂。

防腐剂（antiseptic）能够抑制微生物生长和繁殖但不足将其杀灭的物质。

防腐剂经常应用于体表。

生物杀灭剂（biocide）所有能够杀死生物体的制剂的统称。

化学杀菌剂（chemicalgermcide）用于杀死微生物的化学品或化学混合物。

清除污染（decontamination）去除和／或杀死微生物的任何过程。

该词也用于去除或中和有危害的化学品和放射性物质。

消毒剂（disinfectant）用于杀死微生物的化学品或化学混合物，但不一定杀死其孢子。

消毒剂常用于非生命物体或其表面。

消毒（disinfection）杀死微生物的物理或化学手段，但不一定杀死其孢子。

灭菌剂（microbicide）能够杀死微生物的化学品或化学混合物。

该词常常可以代替“生物杀灭剂”、“化学杀菌剂”或“抗菌剂”。

杀孢子剂（sporocide）用于杀死微生物和孢子的化学品或化学混合物。

灭菌（sterilization）杀死和／或去除所有微生物及其孢子的过程。

二、化学杀菌剂

许多杀菌剂对人或环境有害，应当按生产商的说明小心地进行选择、贮存、操作、使用和废弃。

为了个人的安全，建议在稀释化学杀菌剂时应戴手套、围裙和保护眼睛的器具。

下面介绍一些常规使用的化学杀菌剂，并列出它们的一般用途和安全特征。

除非另外标注，杀菌剂的浓度用重量／体积（w/v）来表示。

表3-1汇总了含氯消毒剂的推荐使用浓度。

表1含氯消毒剂的推荐使用浓度

“清洁”情况下a

“污染”情况下b

所需的有效氯浓度

0.1%（1g/L）

0.5%（5g/L）

次氯酸钠溶液（含有5％的有效氯）

20mL/L

100mL/L

次氯酸钙（含有70％的有效氯）

1.4g/L

7.0g/L

二氯异氰尿酸钠粉剂（含60％的有效氯）

1.7g/L

8.5g/L

二氯异氰尿酸钠片剂（每片含1.5g有效氯）

每升1片

每升4片

氯胺（含有25％的有效氯）c

20g/L

20g/L

a去除大部分污染材料后

b溢流情况（如血液）或大量污染材料没有除去时

c参见正文

氯（次氯酸钠）

1、氯属于快速作用的氧化剂，是一种可广泛应用的广谱化学杀菌剂。

它一般以次氯酸钠（NaOCl）溶液来作为漂白剂销售。

但氯的许多副产物可能对人体及环境有害，应该避免滥用含氯消毒剂，特别是漂白剂。

2、常规实验室消毒剂的有效氯浓度为1g/L。

处理生物危害性物质的溢出以及含有大量有机物的情况时用含有5g/L有效氯的更强作用的溶液。

家用漂白剂的次氯酸钠溶液含有50g/L的有效氯，工业用漂白剂的次氯酸钠溶液含有近120g/L的有效氯，因此必须进行相应的稀释来达到工作浓度。

3、次氯酸钙［Ca（ClO）2］的颗粒或片剂一般含有70%的有效氯。

用颗粒或片剂配制浓度1.4g/L或7.0g/L的溶液，其有效氯浓度分别为1g/L和5g/L。

4、不建议将漂白剂当作防腐剂使用，但可以用作普通目的的消毒剂以及用于浸泡非金属类的污染材料。

在紧急情况下也可以用终浓度含1～2mg/L有效氯的漂白剂来消毒饮用水。

5、氯气具有强毒性。

因此漂白剂只能在通风良好的地方储存和使用。

6、漂白剂不能与酸混合以避免氯气快速释放。

二氯异氰尿酸钠

1、血液或其他生物危害性液体溢出时，可以使用固体NaDCC，并使其作用至少10min后再除去，然后对污染区进行进一步的清理。

2、二氯异氰尿酸钠（NaDCC）的粉剂含有60%的有效氯。

用NaDCC粉剂配制的浓度为1.7g/L和8.5g/L的溶液将分别含有1g/L和5g/L的有效氯。

3、NaDCC片剂一般每片含有1.5g的有效氯，将1片或4片溶于1升水将分别获得浓度约为1g/L和5g/L的溶液。

4、粉剂或片剂的NaDCC储存既方便又安全。

氯胺

1、因氯胺释放氯的速度比次氯酸慢，且有机物对氯胺溶液的影响没有次氯酸溶液那么大，在“清洁”和“污染”情况下都推荐使用20g/L的浓度。

2、氯胺溶液实际上无臭味，但是，浸泡在氯胺中的物品必须要彻底清洗，以除去加入到氯胺-T粉剂中的填充剂的残留物。

甲醛

1、市场上出售的产品为多聚甲醛——一种固体多聚体，呈薄片状或小块状，或为福尔马林——一种浓度约为370g/L（37％）的气体水溶液，其中含甲醇（100mL/L）作为稳定剂。

两种形式加热都可以产生气体，用于封闭空间（如生物安全柜和房间）的清除污染和消毒。

2、甲醛（5％福尔马林水溶液）可以作为液体消毒剂。

3、在温度高于20℃时，甲醛（HCHO）是一种能够杀死所有微生物及其孢子的气体。

但甲醛对朊蛋白没有杀灭活性。

4、甲醛起效相对较慢，并需要相对湿度达70％左右。

5、甲醛被怀疑是一种致癌剂。

它具有刺鼻的气味，其气体能够刺激眼睛和黏膜，因此必须在通风橱或通风良好的地方储存和使用。

必须遵守国家化学品安全规定。

戊二醛

1、戊二醛［OHC（CH2）3CHO］对繁殖的细菌、孢子、真菌和含脂或不含脂的病毒具有活性。

它不具有腐蚀性，比甲醛作用迅速，但也需要几个小时才能杀死细菌孢子。

2、通常供应的戊二醛是浓度约20g/L（2％）的溶液，绝大部分产品使用前需要加入与产品一同提供的碳酸氢盐混合物进行“活化”（变成碱性）。

活化的溶液根据其配方设计、应用类型和使用频率等情况可以重复使用1～4周。

如果戊二醛溶液变混