TLC跑经验总结.docx

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TLC跑经验总结

看了MERK兄的帖子，很受启发，想起发这个帖子，希望大家把在过柱子过程中的获得的成功的或不成功的，成熟的或不成熟的经验或想法，留在这块，我们大家可以互相学习，互相交流，期待着共同的进步，共同的提高，希望大家跟帖。

谢谢！

先把板子爬好

其实也不是这么简单。

有时候板上很好，柱子差远了。

有同感！

我感觉过柱子跟爬板，不太一样，板爬的好，过柱子时，可就没有那么幸运了。

板子爬不好，柱子一定爬不好

还是先把板子爬好，板子比柱子好把握，有个参考好多了。

还是先把板子爬好，掌握好各个Rf值对，过柱是一个很好的参考，我一般在开始时选用2、3个展开剂过柱，开始用极性小的展开剂，将极性小的杂质先除名，再用极性大的。

如果我想要的那个东东的Rf值约左右（展开剂是氯仿／甲醇：

10／1），那么我能否单用氯仿过柱？

柱子和板有差异的话，想看的清楚一点，最好把板90度爬两次，如果不是会洗脱液中分解的话，应该会比较容易重复的！

柱子情况与TLC基本上一样的，但是装柱和上样一定要搞好

不然很容易跑得一塌糊涂

无论干柱还是湿柱，把柱子压实分离效果才会好

过柱的关键有几点:

1是选择好硅胶,装柱的时候要压紧,压平,使柱子中间没有气泡;2是要选择好展开剂;

最好先查查文献，看看有没有类似的色谱条件，这样做起来就事半功倍了

回9楼：

可以单一用氯仿做洗脱剂！

效果还不错！

感觉冬天过柱效果较差

9楼兄弟这个不好说,因为我们大家过柱的方法不一定相同,学校一般使用常压或加压,而我们这里使用的确实减压间歇法.

好的板子很重要

只要你的化合物有极性区别，理论上没有分不开的柱子。

所以一定要耐心，有几分象钓鱼。

过柱子是一个经验活，主要凭感觉，因为它和您的待分离物的个数、各点间的间距、Rf值...均有关系，柱子过多了，就会感觉出一个合适的洗脱液以及极性。

但也并非无规律可循，过柱前爬板是必不可少的，试不同极性，找一个各点分离较开的极性，内径一厘米的柱子一般极性放大10倍左右，柱子越粗，极性放达越大。

爬板时，如果待分点离开基线，而其下一点未动时的极性一般适于过柱。

板子的分离效果一般好于柱子，因为板子的粒度较细

高效板有差异的，用高效板跑的，在实际过柱时要再降低溶剂极性，一般板Rf在～适宜过柱

各位大侠:

请问氯仿:

甲醇=10:

1做洗脱剂时可以用二氯甲烷:

甲醇=10:

1或?

:

?

来代替吗?

因为考虑到氯仿太毒了,请帮忙分析一下.

另外:

有没有大侠知道过柱用的硅胶怎么选择比较合理?

硅胶柱层析下面介绍我现在惯用的方法：

匀浆法。

1。

称量。

200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。

干硅胶的视密度在左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。

2。

搅成匀浆。

加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。

如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。

如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。

氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。

如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。

3。

装柱。

将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。

随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。

4。

压实。

沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。

柱床约被压缩至9/10体积。

无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。

5。

上样。

干法湿法都可以。

海沙是没必要的。

上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。

然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。

6。

过柱和收集。

柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。

太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。

收集的例子：

10mg上样量，1g硅胶H，收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。

7。

检测。

要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。

8。

送谱。

收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。

如果样品太少或为液体，可过一小凝胶柱，作为送谱前的最后纯化手段。

可除去氢谱左右所谓的“硅胶”峰。

呵呵，写得手好累呀，欢迎大家指正或提出更好的建议！

对了，欢迎制备薄层层析法（ptlc）的高手发言！

关键是装柱和展开剂的选择

各位能否介绍一些工业上用的填料？

比如要分离磷酸酯类的化合物。

谢谢！

爬板子是为了过柱子作准备，要过好柱子还得对样品的特性有了解，才能遭到找到合适的柱子，也才有可能过好柱子。

复28楼，工业用填料也不过是琼脂糖类、硅胶类和聚苯乙烯类，但粒径要比分析用的填料大，而且粒径越均匀分离效果月越好。

如果流动相偏酸或偏碱，建议用聚苯乙烯类填料，这类填料进口的很贵。

国内的南京麦科菲高效分离载体有限公司也有同样产品，我用来分离核苷酸，白介-2，EPO,效果与Source相当，比活略好，但价格只有Source的70%。

这是一家留德博士办的公司，采用的是在德研究的技术。

还可以根据客户的要求专门制备所需的填料。

联系方法：

Tel:

FAX:

E-mail

请问各位大侠:

1.对于在柱子上不显色的样品如何分离,如何确定各个色带已经分开?

2.柱子的粗细，长短对分离有什么影响呢？

3.柱子后面跑不动的部分吸附在硅胶上，如何取下来？

欢迎大家讨论！

回：

31楼

1.用TLC板跟踪分析

2.柱子粗的话，分离速度相对会快；长短取决于待分离物的多少（一定长的柱子能否把待分离物分开）和其它因素

3.把硅胶取下来，用溶剂溶解，再过滤除去硅胶，滤液蒸干

不知说得对不对，请各位大侠多指教！

！

！

谢谢32楼!

可是一根柱子至少要过一天,不可能不停的点板把,费时费力费钱阿!

有没有捷径可走呢?

可以用真空液相层析，分离几十克东西用不了半天，且用硅胶很少。

真空液相层析即vacuumliquidchromatography（VLC）,即用真空代替压力进行层析，具体方法可见Synthesis,2001,No,16,2431-,andJchemedu,1997,10,1222-,哈哈，一定要仔细阅读。

但是怎样选择相应的显色剂呢？

一般还都是适用紫外灯吧

这个话题很好，我也老是走不好。

请教：

一开始是否能用跑板用的比例去洗脱？

还是极性从小到大？

怎样去检测？

各位同仁，有问题要请教了。

如果层析硅胶在打开包装后，吸收了空气中的水分，这会不会影响硅胶的分离效果。

请各位高手赐教。

先谢了。

当然会影响分离效果了因为硅胶的活性级别改变了影响硅胶的吸附性能和爬板是一个道理

最近合成了一系列化合物,过柱子时总是分解（不管是硅胶还是中性氧化铝）,重结晶又不行.请教各位高手应该怎么分离才好?

回复24楼，我也喜欢用毒性小的溶剂代替毒性大的溶剂，但有时替换以后并不好，你可以先跑板看看再代替，有高效液相走液相也可以。

如果杂点不多的话，完全可以用氯仿，用二氯甲烷代替也许更好，二氯甲烷毒性小得多

干法上样，一般用于固体或粘度大的液体样品。

样品用低沸点易溶溶剂溶解，加入1-3倍的粗硅胶，晾干或旋干，干燥的标准是硅胶成细粉而不粘在瓶壁上。

装好的柱子上留一段溶剂，把吸附了样品的硅胶慢慢到进去，震动柱子或再加一些溶剂，把粘在柱壁上的硅胶洗下。

--作者：

leleba

--发布时间：

2004-3-1621:

07:

44

--请26楼的lanthanum讲讲如何干法上样吧？

偶不太会，要注意什么吗？

这个地方真是太好了,我也经常遇到以上的问题,这下可真是收获不小.

有时爬板效果不错,但一上柱子效果就不明显了.或者看起来色带还不错,但走的太慢,硬是不下来.一调节极性杂质就夹带下来了.是不是我的洗脱液选的还不合适?

望给位高手给予指点!

谢了!

在装柱子的时候，不管是湿法还是干法装，用节橡皮管边装边敲打，这样可以把柱子装的比较匀，只有柱子装得匀，分离效果才能好。

一般的柱子底下的死体积太大，很多分开的物质又重新被合在一起造成分离失败

爬板子时，Rf值在什么范围对柱子分离效果最好？

回二楼的可以单用氯仿过，最后在用甲醇冲残余物质

觉得柱子爬得好坏与很多因素有关,但是主要的是洗脱液的选择和洗脱的快慢.

一般板的Rf在左右比较好。

柱子和板子的硅胶性能差别一般挺大，主要是粒度不同，空隙率不同，我的经验是3-8倍。

还有如Merck公司的大孔硅胶孔径180埃，一般国产60埃，差别太大。

230-400目的Merck硅胶可以装flash柱，国产的我没试成功过

我现在做个产品但是提不纯,3种物质在TLC分离效果很好（展开剂CH2Cl2:

CH30H=9:

1）

请问用硅胶柱分离可行吗?

如可行用多少目的硅胶和多长的柱子

1R-CH（CH2OOCCH3）2

2R-CH（CH2OH）2

3R-CHCH上接CH2OH和CH2OOCCH3两个基团

2和3只溶于水和醇，1溶于水，醇，二氯甲烷。

试试分级萃取。

我现在做个产品但是提不纯,3种物质在TLC分离效果很好（展开剂CH2Cl2:

CH30H=9:

1）

请问用硅胶柱分离可行吗?

如可行用多少目的硅胶和多长的柱子

1R-CH（CH2OOCCH3）2

2R-CH（CH2OH）2

3R-CHCH上接CH2OH和CH2OOCCH3两个基团

2和3只溶于水和醇，1溶于水，醇，二氯甲烷。

分级萃取我我今天试过,还是搞不定,

楼上的朋友还有更好的方发吗?

我需要的是产物3,2和3不好分离,

试试用甲醇/石油醚（正己烷），萃取。

再不行就过柱吧：

）

我认为主要在怎么装柱子！

这个应该是关键！

请问lanthanum，什么是分级萃取，是不是用极性不同的溶剂分次提取。

这两者用色谱法应不难分离，柱的尺寸应该根据你的量，两者容易分离的话，可用粗点的硅胶100-200mesh，柱子可以采用短粗型，这样速度快

Rf值在多少过柱比较好，还要看分离的化合物的情况。

如果产物相对干净，杂质点隔得较远，Rf值可以大一点也能分离开，如果杂质点较多，tlc上距离有比较近的话，Rf值应该小一些，最好在~。

首先是爬板，找到合适的洗脱剂。

其次是装柱，没有气泡压实，柱平整。

再次是洗脱剂，如果Rf值相差很大，可以用爬板的极性，否则梯度洗脱更把握一些，这个和经验很有关系。

柱的高度和粗度对洗脱的效果很有影响。

转载1

发信人:

zagzig（拼完了～爱咋咋地了）,信区:

Chemistry

标题:

柱子之我见

（一）zz

发信站:

日月光华（2004年01月14日21:

51:

02星期三）,站内信件

发信人（恐“龙”）,信区:

Chemistry

标题:

柱子之我见

（一）

发信站:

我爱南开站（SunDec2118:

03:

062003）

转信站:

SMTH!

从96年开始过柱子，差点就八年抗战了。

常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。

我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相

的吸附柱。

由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望

能有所帮助。

柱子可以分为：

加压，常压，减压。

压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。

所

以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分

离，一个柱子几个月也是有的。

减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过

硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得

不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。

以