大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定.docx
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大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定
农业大学
兽医微生物学课程论文
题目：
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定
姓名：
学院：
动物科技学院
班级：
马业科学1201班
学号：
2012
任课教师：
温建新
二0一四年四月一日
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定
马业科学1201
任课教师温建新
摘要：
为了鉴别大肠杆菌和沙门氏菌，我们将用过氧化氢试验，甘露醇试验，凝固酶试验等方法进行鉴别，并根据他们的不同性质出现不同的结果，得出菌的种类。
关键词：
大肠杆菌沙门氏菌三糖铁糖发酵麦康凯琼脂
引言：
大肠杆菌是肠杆菌中埃希氏菌中的代表种。
根据O、H、K抗原的不同，可将大肠杆菌株分为不同的血清型。
自然界肠杆菌的血清型可分为数万种，但致病性大肠杆菌的数量有限。
沙门氏菌属是有一大群血清学相关的革兰氏阴性、兼性厌氧的无芽孢杆菌组成，系肠杆菌科中重要的病原菌属之一，对任何动物均有致病性，可以欺人的伤寒、副伤寒、肠炎和食物中毒，对动物能致多种临床表现的沙门氏菌病，亦能以继发菌出现在其他疾病中。
大肠杆菌和沙门氏菌作为肠杆菌科的成员具有一些共同的特征，如形态、染色特性等。
但一些培养特性和生化特性有差异，可作为鉴别诊断的依据，有时还需要依靠血清学方法。
摘要I
关键词I
引言I
1材料1
1.1菌种1
1.2培养基1
1.3生化试剂1
1.4沙门氏菌诊断血清1
1.5器材1
2方法1
2.1增菌培养1
2.2直接分离培养1
2.3形态观察1
2.4培养特性观察1
2.5生化试验2
2.5.1糖发酵管接种2
2.5.2蛋白胨水接种2
2.5.3葡萄糖蛋白胨水接种2
2.5.4尿素琼脂接种2
2.5.5枸橼酸盐琼脂接种2
2.6生化特性的观察2
2.6.1糖发酵实验2
2.6.2MR实验2
2.6.3VP实验2
2.6.4吲哚实验3
2.6.5枸橼酸盐利用实验3
2.6.6硫化氢实验3
2.7药物敏感试验-扩散法3
3结果观察3
3.1大肠杆菌和沙门氏菌在三糖铁琼脂培养基上的生长状况3
3.2细菌的染色、镜检4
3.3生化管的接种培养4
3.4吲哚、MR、V-P实验5
3.5药物敏感试验6
4结论7
参考文献7
1材料
1.1菌种
大肠杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌与沙门氏菌的混合菌液
1.2培养基
普通培养基:
肉汤、普通琼脂、半固体培养基。
鉴别培养基：
SS琼脂、麦康凯琼脂、三糖铁琼脂。
生化鉴别基：
糖发酵管、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、尿素琼脂、醋酸铅琼脂。
1.3生化试剂
MR试剂、VP试剂、吲哚试剂、乙醚、硝酸盐还原试剂等。
1.4沙门氏菌诊断血清
A~E群多价O血清及单因子血清。
1.5器材
革兰氏染液、显微镜、吸管等。
2方法
2.1增菌培养
用无菌刻度吸管吸取大肠杆菌与沙门氏菌的混合菌液2ml，分别加入已有亚砷酸盐量绿增菌液100ml的试管和四磺酸钠增菌液10ml的试管个1ml.接种后轻轻混匀，置37摄氏度温箱培养18-24h。
2.2直接分离培养
2.3形态观察
以无菌接种环分别挑取麦康凯琼脂平板或SS琼脂平板上新鲜培养的大肠杆菌和沙门氏菌单个菌落，在在载玻片上制成涂片，待自然干燥后，以火焰固定，进行革兰氏染色，镜检。
观察两种细菌的形态，大小与排列方式并做比较。
这两种都是革兰氏阴性、两端钝圆的球杆菌，菌体大多单个存在，大小差异不显著。
2.4培养特性观察
将大肠杆菌和沙门氏菌的纯培养物分别接种肉汤、普通琼脂、三糖铁琼脂、SS琼脂和麦康凯琼脂。
三糖铁琼脂接种时，先涂布斜面，后穿刺底层。
置37摄氏度温箱培养24h后，取出观察两种细菌的培养特性并比较。
2.5生化试验
生化实验前，须对菌种进行纯度检查，以保证不被污染杂菌。
检查方法同一般培养物的制片、染色、镜检。
镜检时要适当多看几个视野，每个视野中细菌形态也染色特性菌须符合该种菌种的特性。
凡污染杂菌者，此菌种不可用。
2.5.1糖发酵管接种
每种菌纯培养物分别接种葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、卫矛醇微量生化反应管，每种唐一管，穿刺接种。
后置于37℃温箱培养2-3d。
2.5.2蛋白胨水接种
每种菌纯培养物接种一管，培养后作吲哚实验。
后置于37℃温箱培养2-3d。
2.5.3葡萄糖蛋白胨水接种
每种菌纯培养物接种两管，培养后一管作MR实验，另一管作VP实验。
后置于37℃温箱培养2-3d。
2.5.4尿素琼脂接种
每种菌纯培养物接种一管，接种量要大。
后置于37℃温箱培养数小时。
2.5.5枸橼酸盐琼脂接种
每种菌纯培养物接种一管，接种量要少。
后置于37℃温箱培养2-3d。
2.6生化特性的观察
2.6.1糖发酵实验
取经2-3d培养后的两种细菌的糖发酵管一一观察，凡培养基变为黄色的，表示该菌发酵此糖产酸气；凡凡培养基不变色的，表示该菌不发酵此糖。
2.6.2MR实验
取一支经2-3d培养后的葡萄糖蛋白胨水的糖发酵管，加入MR试剂数滴，凡液体呈红色者为阳性反应，呈黄色者为阴性反应，橙黄色者为可疑反应。
2.6.3VP实验
取另一支葡萄糖蛋白胨水的糖发酵管，加入VP试剂3ml，再加入VP试剂乙液1ml，充分摇匀后静置与试管架上，在数分钟出现红色者为阳性反应，不出现红色者应放在37℃继续观察1-2h，仍然不变色者判为阴性。
2.6.4吲哚实验
去蛋白胨水培养管先加乙醚少量，塞紧棉塞摇振试管，是一米与培养基充分混匀，静置片刻，待乙醚浮于液面上层时，沿管壁加入吲哚试剂2-3滴。
凡在乙醚层出现玫瑰红色者为阳性反应，不变色者位阴性反应。
2.6.5枸橼酸盐利用实验
观察经2-3d培养的枸橼酸盐琼脂管是否有细菌生长，并观察其颜色变化。
凡有细菌生长，培养基变为天蓝色为该菌利用枸橼酸盐，否则为阴性反应。
2.6.6硫化氢实验
观察经2-3d培养的醋酸铅琼脂管，凡沿穿刺线或其周围出现黑色沉淀者，为硫化氢反应阳性，无黑色者为反应阴性。
2.7药物敏感试验-扩散法
曲松纳、红霉素、硫酸链霉素、磷霉素、多面环素对大肠杆菌或沙门氏菌生长的影响。
3结果观察
3.1大肠杆菌和沙门氏菌在三糖铁琼脂培养基上的生长状况
大肠杆菌
反应模式表示：
沙门氏菌
反应模式表示：
3.2细菌的染色、镜检
3.3生化管的接种培养
接种培养前：
接种培养后：
实图：
3.4吲哚、MR、V-P实验
实验结果;
3.5药物敏感试验
4结论
大肠杆菌和沙门氏菌生化反应结果综合汇表
菌
三糖铁
糖发酵
甲基红
VP
吲哚
硫化氢
尿素酶
枸橼酸盐利用
运动力
种
斜面
底层
硫化氢
葡萄糖
乳糖
甘露醇
蔗糖
卫矛醇
A
A
A
-
⊕
⊕/-
⊕
v
+
+
-
+
-
+
-
+
B
K
A
+/-
⊕
-
⊕
-
-
-
+
-
+/-
-
+
+/-
注：
⊕ 产酸产气、+ 阳性、- 阴性、 +/- 大多数菌株阳性/少数阴性、 v 种间有不同反应。
A：
大肠杆菌
B：
沙门氏菌
参考文献：
【1】一经，兽医微生物学，2011年1月第一版。
【2】陆承平，兽医微生物学第四版。
【3】兽医微生物学（原书第2版）
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