大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定.docx

1、大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定 农业大学兽医微生物学课程论文 题 目： 大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定 姓 名： 学 院： 动物科技学院 班 级： 马业科学1201班 学 号： 2012 任课教师： 温建新 二0一四 年 四 月 一 日大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定 马业科学1201 任课教师 温建新摘要：为了鉴别大肠杆菌和沙门氏菌，我们将用过氧化氢试验，甘露醇试验，凝固酶试验等方法进行鉴别，并根据他们的不同性质出现不同的结果，得出菌的种类。关键词：大肠杆菌 沙门氏菌 三糖铁 糖发酵 麦康凯琼脂引言：大肠杆菌是肠杆菌中埃希氏菌中的代表种。根据O、H、K抗原的不同，可将大肠杆菌株分为不同的血清型。自然

2、界肠杆菌的血清型可分为数万种，但致病性大肠杆菌的数量有限。 沙门氏菌属是有一大群血清学相关的革兰氏阴性、兼性厌氧的无芽孢杆菌组成，系肠杆菌科中重要的病原菌属之一，对任何动物均有致病性，可以欺人的伤寒、副伤寒、肠炎和食物中毒，对动物能致多种临床表现的沙门氏菌病，亦能以继发菌出现在其他疾病中。 大肠杆菌和沙门氏菌作为肠杆菌科的成员具有一些共同的特征，如形态、染色特性等。但一些培养特性和生化特性有差异，可作为鉴别诊断的依据，有时还需要依靠血清学方法。摘 要 I关键词 I引言 I1 材料 1 1.1 菌种 1 1.2 培养基 1 1.3 生化试剂 1 1.4 沙门氏菌诊断血清 1 1.5 器材 12

3、方法 12.1 增菌培养 12.2 直接分离培养 12.3 形态观察 12.4 培养特性观察 12.5 生化试验 2 2.5.1糖发酵管接种 2 2.5.2 蛋白胨水接种 2 2.5.3 葡萄糖蛋白胨水接种 2 2.5.4 尿素琼脂接种 2 2.5.5 枸橼酸盐琼脂接种 2 2.6 生化特性的观察 2 2.6.1 糖发酵实验 2 2.6.2 MR实验 2 2.6.3 VP实验 2 2.6.4 吲哚实验 3 2.6.5 枸橼酸盐利用实验 3 2.6.6硫化氢实验 3 2.7 药物敏感试验-扩散法 33 结果观察 3 3.1 大肠杆菌和沙门氏菌在三糖铁琼脂培养基上的生长状况 3 3.2 细菌的染色

4、、镜检 4 3.3 生化管的接种培养 4 3.4 吲哚、MR、V-P实验 5 3.5 药物敏感试验 6 4 结论 7参考文献 71 材料1.1菌种大肠杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌与沙门氏菌的混合菌液1.2 培养基普通培养基: 肉汤、普通琼脂、半固体培养基。鉴别培养基：SS琼脂、麦康凯琼脂、三糖铁琼脂。生化鉴别基：糖发酵管、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、尿素琼脂、醋酸铅琼脂。1.3 生化试剂MR试剂、VP试剂、吲哚试剂、乙醚、硝酸盐还原试剂等。1.4 沙门氏菌诊断血清 AE群多价O血清及单因子血清。1.5 器材 革兰氏染液、显微镜、吸管等。2 方法2.1 增菌培养 用无菌刻度吸管吸取大肠杆菌与沙门氏菌的

5、混合菌液2ml，分别加入已有亚砷酸盐量绿增菌液100ml的试管和四磺酸钠增菌液10ml的试管个1ml.接种后轻轻混匀，置37摄氏度温箱培养18-24h。2.2 直接分离培养2.3 形态观察 以无菌接种环分别挑取麦康凯琼脂平板或SS琼脂平板上新鲜培养的大肠杆菌和沙门氏菌单个菌落，在在载玻片上制成涂片，待自然干燥后，以火焰固定，进行革兰氏染色，镜检。观察两种细菌的形态，大小与排列方式并做比较。这两种都是革兰氏阴性、两端钝圆的球杆菌，菌体大多单个存在，大小差异不显著。2.4 培养特性观察 将大肠杆菌和沙门氏菌的纯培养物分别接种肉汤、普通琼脂、三糖铁琼脂、SS琼脂和麦康凯琼脂。三糖铁琼脂接种时，先涂布

6、斜面，后穿刺底层。置37摄氏度温箱培养24h后，取出观察两种细菌的培养特性并比较。2.5 生化试验 生化实验前，须对菌种进行纯度检查，以保证不被污染杂菌。检查方法同一般培养物的制片、染色、镜检。镜检时要适当多看几个视野，每个视野中细菌形态也染色特性菌须符合该种菌种的特性。凡污染杂菌者，此菌种不可用。2.5.1糖发酵管接种 每种菌纯培养物分别接种葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、卫矛醇微量生化反应管，每种唐一管，穿刺接种。后置于37温箱培养2-3d。2.5.2 蛋白胨水接种 每种菌纯培养物接种一管，培养后作吲哚实验。后置于37温箱培养2-3d。2.5.3 葡萄糖蛋白胨水接种 每种菌纯培养物接种

7、两管，培养后一管作MR实验，另一管作VP实验。后置于37温箱培养2-3d。2.5.4 尿素琼脂接种 每种菌纯培养物接种一管，接种量要大。后置于37温箱培养数小时。2.5.5 枸橼酸盐琼脂接种 每种菌纯培养物接种一管，接种量要少。后置于37温箱培养2-3d。2.6 生化特性的观察2.6.1 糖发酵实验 取经2-3d培养后的两种细菌的糖发酵管一一观察，凡培养基变为黄色的，表示该菌发酵此糖产酸气；凡凡培养基不变色的，表示该菌不发酵此糖。2.6.2 MR实验 取一支经2-3d培养后的葡萄糖蛋白胨水的糖发酵管，加入MR试剂数滴，凡液体呈红色者为阳性反应，呈黄色者为阴性反应，橙黄色者为可疑反应。2.6.3

8、 VP实验 取另一支葡萄糖蛋白胨水的糖发酵管，加入VP试剂3ml，再加入VP试剂乙液1ml，充分摇匀后静置与试管架上，在数分钟出现红色者为阳性反应，不出现红色者应放在37继续观察1-2h，仍然不变色者判为阴性。2.6.4 吲哚实验 去蛋白胨水培养管先加乙醚少量，塞紧棉塞摇振试管，是一米与培养基充分混匀，静置片刻，待乙醚浮于液面上层时，沿管壁加入吲哚试剂2-3滴。凡在乙醚层出现玫瑰红色者为阳性反应，不变色者位阴性反应。2.6.5 枸橼酸盐利用实验 观察经2-3d培养的枸橼酸盐琼脂管是否有细菌生长，并观察其颜色变化。凡有细菌生长，培养基变为天蓝色为该菌利用枸橼酸盐，否则为阴性反应。2.6.6 硫化

9、氢实验 观察经2-3d培养的醋酸铅琼脂管，凡沿穿刺线或其周围出现黑色沉淀者，为硫化氢反应阳性，无黑色者为反应阴性。2.7 药物敏感试验-扩散法 曲松纳、红霉素、硫酸链霉素、磷霉素、多面环素对大肠杆菌或沙门氏菌生长的影响。3 结果观察3.1大肠杆菌和沙门氏菌在三糖铁琼脂培养基上的生长状况 大肠杆菌反应模式表示： 沙门氏菌 反应模式表示：3.2细菌的染色、镜检3.3生化管的接种培养 接种培养前： 接种培养后： 实图：3.4 吲哚、MR、V-P实验 实验结果; 3.5药物敏感试验4结论大肠杆菌和沙门氏菌生化反应结果综合汇表 菌三糖铁糖发酵甲基红VP吲哚硫化氢尿素酶枸橼酸盐利用 运动力种斜面底层硫化氢葡萄糖乳糖甘露醇 蔗糖 卫矛醇AAA-/- v+-+-+-+BKA+/-+-+/-+/-注：产酸产气、+阳性、-阴性、+/-大多数菌株阳性/少数阴性、v种间有不同反应。 A：大肠杆菌 B：沙门氏菌参考文献： 【1】一经，兽医微生物学，2011年1月第一版。【2】陆承平，兽医微生物学第四版。【3】兽医微生物学(原书第2版）