种酶的测定关松荫资料.docx

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种酶的测定关松荫资料

cellulase纤维素酶

sucroseinvertase蔗糖转化酶

滴定法

1试剂配制

（1）20%蔗糖

（2）甲苯

（3）PH5.5醋酸盐-磷酸盐缓冲液

（4）33%KI液

（5）H2SO4（1：

3）

（6）淀粉指示剂：

取0.5g淀粉溶于少许水中，加10ml煮沸的25%NaCl液，煮沸1min

（7）0.1NNa2S2O3滴定液：

配制方法与标定方法见多酚氧化酶测定

（8）菲林溶液：

取34.64gCuSO4.5H2O溶于蒸馏水，并稀释至500ml（a）取173g酒石酸钾钠和50gNaOH溶于蒸馏水，并稀释至500ml（b），使用前将（a）（b）按1：

1混合

2操作步骤

取10g土壤置于100ml三角瓶中，用1.5ml甲苯处理15min。

加10ml20%蔗糖和10mlPH5.5醋酸盐-磷酸盐缓冲液，摇匀后放在37℃恒温箱中培养24h

培养结束后，加50ml蒸馏水，摇荡后过滤。

取20ml滤液移于100ml三角瓶中，加10ml菲林溶液。

在沸水浴上放置10min，冷却至室温后再加3ml33%KI溶液和4mlH2SO4（1：

3）。

然后用0.1NNa2S2O3滴定，至终点前加淀粉指示剂，再滴定至蓝色消失。

试验应设以水（20ml）代替基质的对照

蔗糖酶活性，用对照与试验的0.1NNa2S2O3滴定毫升数之差表示

β-glucosidaseβ-葡糖苷酶

peroxidase过氧化物酶HRP

xylanase 木聚糖酶

淀而成。

配制浓度为1%

（2）甲苯

（3）PH6.50.15M磷酸盐缓冲液

（4）铜-磷酸盐试剂：

取28g无水K2HPO4和40g酒石酸钾钠，溶于700ml水中，加100ml1NNaOH，然后加入80ml10%CuSO4.5H2O溶液。

溶解后，加入180g无水Na2SO4，将溶液稀释至1L并过滤后备用

（5）0.005NKI

（6）2NH2SO4

（7）0.005NNa2S2O3。

5H2O溶液。

该工作夜由0.1NNa2S2O3原液稀释而成。

为防止大气中CO2的影响，稀释1L溶液加2ml10%NaOH

（8）木糖的标准溶液（1ml含0.2mg木糖）

4操作步骤

取5g土置于50ml三角瓶中，加2ml甲苯。

10min后，加5mlPH6.5磷酸缓冲液和5ml1%木聚糖溶液。

放在37℃恒温箱中培养5昼夜。

培养结束后，取5ml滤液移于大试管中，加5ml铜-磷酸盐试剂。

塞好试管后，放在沸水浴上加热10min。

这时，有红色氧化亚铜沉淀析出。

待冷却后，为使亚铜氧化，沿管壁加5ml0.005NKI溶液（不要混合）。

然后迅速注入1.5ml2NH2SO4,并立即摇动混合液。

剩余的KI用0.005Na2S2O3进行回滴。

根据KI的差，得出与当量铜量结合的碘化钾量。

为了计算反应液中生成的木聚糖，得到1mg木糖的0.005NCuO的毫克数，可用标准木糖液5ml，按上述方法沉淀，铜用硫代硫酸钠滴定。

根据用于氧化铜的KI的量，查知其当量数（以0.005NCuO

的毫克数表示）

木聚糖酶活性，以1ml反应混合物中木糖的毫克数表示。

试验设置以水代替基质的对照

phenoloxidase多酚氧化酶PPO

1分析意义

多酚氧化酶参与土壤有机组分中芳香族化合物的转化作用。

土壤中的酚类物质在多酚氧化酶的作用下氧化生成醌。

醌与氨基酸等通过一系列生物化学过程所合成最初的胡敏酸分子，所以，多酚氧化酶是腐殖化的一个媒介。

它是土壤氧化花园酶中了解得比较多的一种酶。

2方法选择与原理

在空气存在的情况下，多酚氧化酶能酶