珍稀药用真菌樟芝液态发酵产业化及其产品开发项目计划书.docx

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珍稀药用真菌樟芝液态发酵产业化及其产品开发项目计划书

珍稀药用真菌樟芝液态发酵产业化及其

产品开发项目计划书

一、项目的目的及意义

樟芝（Antrodiacinnamomea）又称牛樟芝，牛樟菇，樟内菇等，是台湾特有的珍贵药用真菌，仅生长在中国台湾山区海拔450-2000米之间的牛樟树腐朽的空心内壁，具有强烈的黄樟气味。

樟芝含有多种生理活性物质，如多糖，三萜类，超氧化物歧化酶，腺苷，维生素，微量元素锗和氨基酸等，其中多糖和三萜类化合物是其主要的生理活性物质，具有免疫调节、抗肿瘤、保肝、抗病毒、保护神经系统、抗高血压、抗高血脂、抑菌、抗辐射、抗氧化、抗炎症，抗衰老等多种生物活性，可以广泛的应用于医药，食品，化妆品，日化等领域。

樟芝自然生长条件苛刻，生长缓慢，此外不法商人的滥采滥伐，导致野生樟芝资源严重短缺和价格的一路飙升。

人工栽培面临不能获得樟芝子实体，不易除去不可食用部分，易染菌，周期长等问题。

而樟芝深层液态发酵产物富含各种生理活性物质，几乎无毒副作用，易于大规模人工生产。

因此采用现代发酵工程技术来生产樟芝的有效物质是开发樟芝，造福人类的最经济，最有效，最环保的方法。

在前期已完成深层液体发酵试生产的基础之上，本项目拟采用投融资，项目整体转让，合作开发等方式建立樟芝深层液态发酵生产线一条，同时展开后续研发实验，开发以樟芝为原料的日化产品2-3个，健康产品2-3个，药品1-2个，最终填补国内空白，为这一珍稀资源的开发和利用开辟新的途径。

二、国内外技术发展现状与趋势

2.1樟芝的生物学特性

樟芝又称樟生薄孔菌、牛樟菇、牛樟芝、红樟芝、血灵芝、樟内菇、红樟菰等，属于担子菌亚门，层菌纲，非褶菌目，多孔菌科，薄孔菌属，属台湾独有物种。

子实体多年生，平伏无柄，木栓质至木质，多附着于牛樟树中空心材内壁上生长。

子实体菌肉两层，初生时表层（上层）鲜红色，渐长为白色、淡红褐色、淡褐色或淡黄褐色，下层淡黄色；老熟后成钟状，皮壳黄褐色至黑色，外皮有明显的环状构造，质地极其坚硬。

子实体形态多变化，有板状、钟状、马蹄状或塔状，一般以板状居多。

新鲜或干老樟芝子实体有浓郁的香樟味，整面充满菌孔（4—5个／mm2），不规则，菌管孔口乳黄色，管口近圆形，内有孢子，味极苦。

生殖菌丝透明微黄，壁薄，有锁状联合：

骨架菌丝淡黄色，壁厚到近实心。

樟芝仅生于台湾深山（海拔450～2000m）特有的“国宝”级树种——百年以上的牛樟树（Cinnamomumkanehirai）上，生于空心树干之心材内壁（树干空洞）的称为樟窟内芝，少数生于枯死倒伏之牛樟树木材潮湿面的称为樟外芝。

樟芝生长极为缓慢，生长期也仅限于每年的6至1O月，形成子实体的时间相当长，其生长环境均属于幽暗、潮湿且温度稍低之中海拔地区。

樟芝主要分布在台湾桃园复兴乡、角板山，苗栗南庄乡、三湾乡，南投竹山镇、水里乡，屏东县六龟乡、高雄旗山等区域之海岸山脉阔叶林内。

2.2樟芝的学名以及分类学历史

1990年，中国科学院昆明植物研究所的臧穆与台北医学院的苏庆华共同署名发表我国台湾产灵芝属一新种——樟芝GanodermacamphoratumM.Zang&C.H.Su。

因当时模式标本（标本号HKAS22294）在实验室中沾染了灵芝类的孢子，以致将灵芝孢子描述成樟芝的孢子，误作为灵芝属的新种类；同时。

认为其寄主是香樟Cinnamomumcamphora。

这篇论文在刊印时将“camphoratum”及“camphora”中“cam-”误排为“com-”。

1995年，台湾省林业试验所张东柱等人根据樟芝子实体外观特征、气味、生长速度、孢子显微结构等研究结果，认为樟芝应归入多孔菌科的薄孔菌属Antrodia，将其学名订正为AntrodiacinnamomeaT．T．Chang&W．N．Chou（标本号TFRI119），并指出其寄主应为牛樟Cinnamomunkanehirai。

这个时期有关樟芝的研究文献中，有的还将樟芝的寄主认作沉水樟Cinnamomummicranthum（Hayata）Hayata。

1997年，台湾自然科学博物馆的吴声华等人重新检验了樟芝标本HKAS22294和TFRI119，整合前两次文献中的一致内容，再次进行新种的修订，并按真菌分类中新种命名的原则，将樟芝学名订正为Antrodiacamphorate（M.Zang&C.H.Su）ShengH.Wu,Ryvarden&T.T.Chang；把原定名人M.Zang&C.H.Su置前。

并将张东柱等发表的AntrodiacinnamomeaT.T.Chang&W.N.Chou处理为Antrodiacamphorate的同义名（即同物异名）。

该新组合名发表后，为台湾学术界及产业界所接受。

不过，由于台湾省禁止樟芝物种外流。

中国科学院微生物研究所真菌标本馆没有研究与保藏樟芝菌种或标本，故樟芝尚未收入《中国真菌志·多孔菌科》。

2.3樟芝的民间应用情况

樟芝疗效流传甚久，传说台湾原住民在采伐时，无意问发现生长于牛樟树上的樟芝。

早期台湾原住民因长期喜欢饮酒，导致罹患肝病的人数一直居高不下。

后来他们发现，在喝过以樟芝熬煮的汤汁后，肝病竟会痊愈，并且体魄强健，因此，原住民每天外出时，都会含上一片樟芝。

他们将樟芝视为最珍贵的药材，中药店视之为上好解毒剂，凡食物中毒、腹泻、呕吐、农药中毒均以樟芝作为解毒之用。

它对改善肝、胃机能及治疗血液循环疾病均有良好功效。

因此，樟芝药效被广泛宣传，在台湾地区称为“神芝”，相传在治疗肝癌上似乎特别有效，一般应用则可治疗急性腹痛、消炎、抗过敏、解毒保肝、强身，其解酒效力更是一流。

但是由于樟芝作为新种于1990年才正式发表，且樟芝是台湾特有种，台湾政府禁止樟芝物种外流，加上历史造成两岸隔阂等因素，因此，在大陆传统的中医资料中，始终未见有关樟芝的任何记载，故而开发相对非常的落后。

2.4樟芝的有效成分

迄今为止，从樟芝子实体中已经分离得到70多种化合物，包括多糖、二萜类、三萜类、甾体类、苯环衍生物等，其中多数为新化合物。

据报道，多糖、萜类和甾体类化合物为樟芝的主要活性化合物。

A．樟芝多糖

目前对于樟芝多糖的研究主要集中于提高其产量和药理活性，对于多糖的分离纯化和结构特性研究报道较少。

Huang等人发现樟芝发酵滤出液中多糖的组成主要为甘露糖，葡萄糖和木糖，和少量半乳糖和糖醛酸。

但是樟芝菌丝体水提取物和碱液提物中多糖的主要组成单糖为葡萄糖和木糖。

通过NMR、X射线和红外光谱测定，多糖分子量大约为106kDa，其结构具有β-D-葡聚糖的结构。

经证实，具有β-1,3-D-葡聚糖骨架呈现螺旋形的结构，是多糖类物质具有抗肿瘤活性的必要结构。

B．樟芝三萜类化合物

野生樟芝的味道极苦，其甲醇提取物的量高达30%，高达灵芝10倍，暗示着其所含三萜类化合物较多。

Chen等人在1995年首次从樟芝子实体中分离得到了三种新的麦角甾烷型（ergostane）三萜类化合物AnticinA-C。

1996年，Chen等人以相同的方法又发现四种新的三萜类化合物：

actcinE-F、methylantcinateG和methylantcinateH。

随后，多项研究报道证实了樟芝子实体中含有较多的三萜类化合物，且多数为新化合物。

到目前为止，共从樟芝中分离纯化得到30来种三萜类化合物，骨架结构主要以麦角甾烷和羊毛脂烷（lanostane）为主（表1）。

樟芝子实体分离出的三萜类化合物的支链上均具24（28）-en的结构，表明樟芝三萜类化合物的代谢途径与常见的灵芝三萜可能有很大的不同。

另一方面，目前绝大多数研究都是围绕从樟芝子实体中分离纯化得到的新化合物，对于人工培养的樟芝获得大量化合物研究鲜有报道。

表1樟芝子实体、菌丝体和发酵液中分离鉴定的三萜化合物化合物

2.5樟芝三萜的生物活性

自从樟芝被报道以来，樟芝以独特的生物活性引起了人们的研究热情，截至到目前为止共发表了大约150篇的SCI研究论文。

大量研究文献表明，樟芝菌有免疫调节、抗肿瘤、保肝、抗病毒、保护神经系统、抗高血压、抗高血脂、抑菌、抗辐射、抗氧化、抗炎症等多种生物活性，具有很好的市场开发前景。

由于篇幅限制，本文仅对成药性和市场前景最好的护肝，抑制乙肝病毒，抗肝癌等方面进行详尽的介绍（见表2）。

表2樟芝的护肝药理活性

功能

实验样品，剂量

模型，实验设计

结果

参考文献

保肝

樟芝子实体或菌丝体

500mg,1000mg/kg.day

酒精诱导急性肝损伤，雄性SD大鼠，体内

通过抗氧化对急性肝损伤有显著保护作用。

Daietal.（2003）

樟芝子实体或菌丝体

500mg,1000mg/kg.day

酒精诱导急性肝损伤，雄性SD大鼠，体内

1）能够显著降低大鼠血清AST，ALT，ALP，BIL和TG（P<0.05）；2）能够抑制乙醇所致的MDA升高，并显著提高GSH水平及GPx和GR活性（P<0.05）；3）显著改善经四氯化碳处理后引起的肝组织病变。

Luetal.（2007）

樟芝

20%酒精诱导慢性酒精性肝发炎，大鼠，体内

能够显著降低TLR-4,5,7,9，伴随着其下游蛋白MyD88，MAPKpathwayp-Erk，p-p38，PI3K，AKT及其产生的发炎因子的明显下降。

Huangetal

（1999）

野生樟芝（25mg/kg.

Day）

20%酒精诱导酒精性脂肪肝，体内

可以显著降低肝脏中胆固醇，脂肪的含量；可显著改变酒精伤肝代谢有关基因的表现活性；可加强GSH，Trolox的抗氧化能力，降低肝脏中丙二醛的含量和降低血中转氨酵素的活性；肝组织受损程度大幅减轻。

Huangetal

（2010）

牛樟芝水提物

250,750,1250mg/kg.day.4day/week

四氯化碳诱导急性肝功能障碍，雄性ICR大鼠，体内

通过显著降低抗氧化酵素（catala-se,SOD,TBARs等）的含量，且降低脂质过氧化的程度以达到保肝护肝的作用。

Hsiaoetal.

（2003）

樟芝菌丝体发酵液干燥物

250mg,500mg/kg.day

四氯化碳诱导急性肝功能障碍，雄性SD大鼠，体内

通过向上调节肝脏GSH依赖酶，维持正常的GSH／GSSH比率和清除四氯化碳代谢产生的自由基，在防止肝脏系统的氧化损伤方面发挥显著作用。

Songandyen.

（2003）

樟芝菌丝体发酵过滤液，3，12.4，24.8ml/kg.day

四氯化碳诱导慢性肝功能障碍，体内

对肝脏生理机能有明显的正面影响，可明显降低肝纤维化程度及变性程度，增加肝脏红血球中GSH含量及增加抗氧化酵素活性，降低肝脏脂质过氧化程度，而有利于体内氧化压力的下降。

Chenetal.

（2002）

樟芝菌丝体（0.5,

1.0g/kg.day）

四氯化碳诱导急性肝功能障碍，雄性WISTAR大鼠，体内

能够显著抑制四氯化碳引起的肝纤维化进程。

Linetal.

（2006）

樟芝水提取物，连续12周

硫代乙酰胺诱导肝纤维化或者肝硬化，体内

樟芝水提物能够有效降低肝损伤。

Leeetal.

（2005）

樟芝菌丝体（0.25mg，100mg/kg，连续84天）

二氯化汞处理，SD雄性大鼠，体内

1）可显著降低肝指数GPT，GOT；2）可显著提高抗氧化酵素GSH，GSHPx，GSH/GSSG以及catalase，SOD的活性；3）明显降低总胆固醇以及三酸甘油脂指数

Chenetal.

（1996）

樟芝菌丝体多糖提取物（0.4,0.8g/kg.day）

痤疮丙酸杆菌和脂类多糖处理，雄