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食品卫生与安全检验

实训教学指导书

2013年6月

《食品卫生与安全检验》实训指导书

依据《食品卫生与安全检验》课程教学大纲的要求，结合我校的实际情况，编写本指导书，作这《食品卫生与安全检验》任课教师教学参考和食品加工技术专业教学用书。

全书共分10个实训专题，教师可根据教学需要选用。

《食品卫生与安全检验》是在学过分析化学、食品生物化学、食品微生物学等课程的基础上开设的，与《食品卫生与安全检验》构成了一个既相互联系、又相对独立的有机整体，是高职高专院校食品加工技术专业一门技术性、实践性很强的专业基础课程，是能够把基础课与专业课紧密联结起来的一门应用科学。

该课程主要讲授食品的安全卫生、食品卫生检测有关知识、食品卫生检测技术、食品安全管理、食品卫生监督、国家食品卫生法与世界卫生组织、典型食品安全卫生案例分析等。

通过本课程各教学环节，要求学生掌握从事食品生产与加工、食品营销及检测等职业岗位群工作所必须具备的基本知识、基本原理和基本技能；能合理运用所学知识和技能，提高食品品质，保证食品的安全性。

使学生在食品加工实践中具备发现问题、分析问题和解决问题的能力；了解国内外食品安全与检测的科学技术动向。

因此，本课程承担着培养食品专业高级实用型专门人才和提高食品安全、卫生检测技术的双重任务。

在具体实施中，既可以采取理论与实训结合的教学形式，也可单独组织实训教学。

要强调所有实际操作必须符合食品行业卫生规范、职场卫生健康、操作规程等的要求。

要强调紧密结合生产实践，改革实验教学内容，减少演示性、验证性实验，增加工艺性、设计性、综合性实验，逐步形成基本实践能力与操作技能、综合实践能力与综合技能有机结合的实践教学体系。

构建具有高职高专食品专业特色的“实验、认识实习、生产实习、专业综合训练、毕业实习”的实践教学模式。

实训一花生中黄曲霉毒素B1的检测

一、目的

1、熟练掌握薄层层析法原理。

2、掌握薄层层析操作作方法。

二、原理

样品中黄曲霉毒素B1经有机溶剂提取，浓缩、净化以及薄层分离前处理后，在波长365nm紫外光下产生兰紫色荧光，根据其在薄层板上显示荧光的最低检出量来测定含量。

三、试剂

1．三氯甲烷、甲醇、苯、乙腈、丙酮

2．正己烷（沸程30～60℃）或石油醚（沸程60～90℃）.

3．无水乙醚或乙醚经无水硫酸钠脱水

4．苯――乙腈（98：

2）混合溶液：

量取98ml苯，加2ml乙腈，混匀。

5．甲醇――水（55：

45）溶液：

配制方法同上。

6．三氟乙酸、无水硫酸钠、氯化钠

7．硅胶G，薄层色谱用。

8．AFTB1标准溶液的制备：

用百万分之一的微量分析天平精密称取1～1.2mgAFTB1标准品，先加入2ml乙腈溶解后，再用苯稀释至100ml。

然后避光置于4℃冰箱中保存。

最后进行AFTB1标准溶液浓度的测定。

（此标准溶液浓度为10μg/ml）。

9．AFTB1标准使用液Ⅰ：

精密吸取1ml10μg/ml标准溶液于10ml容量瓶中，加苯－乙腈混合液至刻度，混匀。

此溶液浓度为1μg/ml。

10．AFTB1标准使用液Ⅱ：

精密吸取1.0ml1μg/mlAFTB1标准使用液Ⅰ于5ml容量瓶中，加苯－乙腈混合液稀释至刻度，摇匀。

此溶液浓度为0.2μg/ml。

11．AFTB1标准使用液Ⅲ：

精密吸取1.0mlAFTB1标准使用液Ⅱ于5ml容量瓶中，加苯－乙腈混合液稀释至刻度，摇匀。

此溶液浓度为0.04μg/ml。

12．50/L次氯酸钠溶液：

取100g漂白精，加入500ml水，搅拌均匀。

另将160g工业用碳酸钠（Na2CO3·10H2O）溶于500ml温水中，再将两液混合，搅拌，澄清后，再过滤即可。

四、仪器和用具

1．小型粉碎机、样筛、电动振荡器

2．全玻璃浓缩器、电子恒温水浴锅、薄层板涂布器

3．玻璃板：

5cm×20cm。

4．展开槽：

内长25cm，宽6cm，高4cm。

5．紫外光灯：

100～125W，带有波长365nm滤光片

6．微量进样器、蒸发器：

50ml

五、操作步骤

1．样品提取、净化

样品去壳去皮粉碎后，称取20g粉碎过筛样品，置于250ml具塞锥形瓶中，加30ml正乙烷或石油醚和100ml甲醇水溶液，在瓶塞上涂上一层水，盖严防漏。

振荡30min，静置片刻，以叠成折叠式的快速定性滤纸过滤于分液漏斗中，等下层甲醇水溶液分清后，放出甲醇水溶液于另一具塞锥形瓶中。

取20.0ml甲醇水溶液提取液（相当于4g样品）置于另一个125ml分液漏斗中，加20mlCHCl3，振摇2min，静置分层（如出现乳化则可滴加甲醇使其分层），放出CHCl3层，经盛有约10g先用CHCl3湿润的无水硫酸钠的慢速定量滤纸过滤于50ml蒸发皿中，分液漏斗中再加5mlCHCl3重复振摇提取，CHCl3层一并滤于蒸发皿中，最后用少量CHCl3洗滤器，洗液并于蒸发皿中。

将蒸发皿放在通风橱内于65℃水浴上通风挥干，然后放在冰箱内冰却2－3min后，准确加入1ml苯－乙腈混合液（或将CHCl3用浓缩蒸馏器减压吹干蒸干，然后再准确加入1ml苯－乙腈混合液）。

用带橡皮头的滴管的管尖将残渣充分混合，如果有苯的结晶析出，则将蒸发皿取下，继续溶解、混合，晶体则立即消失，再用此滴管吸取上清液转移于2ml具塞试管中。

2．样品的测定（单向展开法）

（1）薄层板的制备：

称取约3g硅胶G，加入相当于硅胶量2－3倍左右的水，用力研磨1－2min至成糊状后立即倒入涂布器内，推成5×20cm，厚度约0.25mm的簿层板三块。

在空气中干燥大约15min后，放入100℃烘箱内活化2h，取出在干燥器中保存。

一般可保存2－3d，若放置时间较长，可再进行干燥活化后使用。

（2）点样：

将簿层板边缘附着的吸附剂刮净，在距薄层板下端3cm处做一个基线，然后在基线上用微量注射器滴加样液。

一块板可滴加4个点，点距边缘和点间距约为1cm，点直径约为3mm。

要求在同一块板上滴加点的大小应一致，可用吹风机冷风边吹边加。

滴加的样点如下：

第一点：

10μl、0.04μg/mlAFTB1标准使用液。

第二点：

20μl样品溶液。

第三点：

20μl样液＋10μl　0.04μg/mlAFTB1标准使用液。

第四点：

20μl样液＋10μl　0.2μg/mlAFTB1标准使用液。

（3）展开与观察：

加入10ml无水乙醚于展开槽内，预展12cm，取出挥干。

再于另一展开槽内加入10ml丙酮：

三氯甲烷（8：

92）溶剂，展开10－12cm，取出在紫外光下观察结果，方法如下：

①第一点滴加10μlAFTB1标准使用液，其中含AFTB10.04μg/ml（最低检出量

5μg/kg）。

可作为检验薄层板好坏及色谱是否合适，能检出最低检出量。

如果展开后此点无荧光，则说明薄层板或色谱条件存在问题。

②第三点和第四点上滴加了样液和AFTB1标准液，可使样液中的AFTB1荧光点和标液AFTB1荧光点重叠。

加以认证。

第三点是用来检验最低检出量在样液中是否能正常呈现，如果第一点呈阳性，第三点呈阴性则说明样品的提取存在问题，可能存在荧光猝灭剂，应重新提取。

第四点主要是起定位作用。

AFTB1的Rf值约0.6。

③第二点起判断作用。

如果第二点（样液）在AFTB1标准点的相应位置（Rf≈0.6）处呈阴性，而其它各点均呈阳性，则说明样品中AFBT1的含量在5μg/kg（最低检出量）以下，如果第二点在其相应位置上呈阳性，则需进行确证试验。

（4）确证试验：

为了证明在薄层板上样液呈现的荧光确系由AFTB1产生的，则在样点上滴加三氟乙酸，产生AFTB1的衍生物，继续展开后，此衍生物的Rf值约为0.1左右。

方法如下：

依次在薄层板左边滴加两个点：

第一点：

10μl0.04μg/mlAFTB1标准使用液。

第二点：

20μl样液。

在以上两点处各加一小滴三氟乙酸盖于其上，经反应5min后，用电吹风机吹热风2min，热风吹到薄层板上的温度不得高于40℃，再于薄板右边滴加以下两点。

第三点：

10μl　0.04μg/mlAFTB1标准使用液。

第四点：

20μl样液。

同前展开后，在紫外光下观察样液是否产生与AFTB1标准点相同的衍生物。

第三点和第四点，可作为样液与标准衍生物的空白对照。

（5）稀释定量：

样液中的AFTB1荧光点的荧光强度与AFTB1标准点（最低检出量）的荧光强度一致，则表示样品AFTB1含量在5μg/kg；如样液中荧光强度比最低检出量强，则根据其强度估计减少点样量或将样液稀释后再点样，直至样液点的荧光强调与最低检出量的荧光强度一致为止，滴加样式如下：

第一点：

10μg/mlAFTB1标使液。

第二点：

根据具体情况点10μl样液。

第三点：

根据具体情况点15μl样液。

第四点：

根据具体情况点20μl样液。

（6）计算：

X=0.0004×

　　　　　　（3－1）

式中：

X——样品中AFTB1的含量，μg/kg；

V1——稀释前样液的体积，ml；

V2——出现同样最低荧光强度时滴加样液的点样量，μl；

D——样液的总稀释倍数；

m——稀释前相当样品的质量，g；

0.0004——AFTB1的最低检出量，μg。

注意事项

1．本法的灵敏度较高，容易产生误差。

如薄层板制作不平整、不均匀，点样的间距太小等都会产生误差。

2．AFTB1标准储备液应密封于具塞试管中，在4oc冰箱中避光保存。

如果在保存期间体积明显减少，应及时补充溶剂。

使用前，应对其测定标准液的浓度。

3．AFT是一种剧毒和强致癌性物质，因此，在使用时特别注意其安全保护。

如实验时应佩戴口罩，配标液时应戴乳胶手套。

如被标液污染时应及时用50g/L次氯酸钠溶液浸泡消毒。

实验结束后应做好清洗消毒工作，对于剩余的AFT标液以及呈阳性样液，应先用50g/L次氯酸钠处理后方可倒在指定的地方。

实验所用玻璃器皿消毒后再进行清洗（用50g/L次氯酸那浸泡5min）。

实训二、食品中N－亚硝胺化合物的检测

一、目的

1、熟练掌握食品中N-亚硝胺化合物的测定原理。

2、掌握食品中N-亚硝胺化合物的测定方法。

二、测定原理

本法是测定食品中挥发性N－亚硝胺总量的方法。

食品中挥发性亚硝胺经水蒸气蒸馏纯化后，经过紫外光照射，分解释放为亚硝酸根。

然后利用强碱性离子交换树脂浓缩，在酸性条件下与对位氨基苯磺酸形成重氮盐，最后与N－萘乙烯二胺二盐酸盐形成红色偶氮染料。

颜色的深浅与N－亚硝胺的含量成正比。

三、试剂

1．0.1mol/L磷酸缓冲溶液（PH7）：

分别吸取0.1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）61.9ml和0.1mol/L磷酸氢二钠（NaH2PO4）39.0ml，将两者混合而成缓冲溶液。

2．300g/L醋酸溶液

3．0.5mol/L氢氧化钠溶液

4．1.7mol/L盐酸溶液

5．100μg/ml二乙基亚硝胺标准溶液

6．100μg/ml亚硝酸钠标准溶液

7．1mol/L氢氧化钠溶液：

用正丁醇饱和

8．10g/L硫酸锌溶液

9．强碱性离子交换树脂：

交链度8，粒度150目。

10．显色剂：

显色剂A――10g/L对位氨基苯磺酸的300g/L醋酸溶液

显色剂B――2g/LN－1－萘乙烯二胺二盐酸盐的300g/L醋酸溶液

显色剂C――10g/L对位氨基苯磺酸的1.7mol/L盐酸溶液

显色剂D――10g/L　N－1－萘乙烯二胺二盐酸盐溶液

四、仪器和用具

分光光度计、紫外灯：

BR－69盘形杀菌灯（10W）。

五、操作方法

1．亚硝胺标准曲线绘制

准确吸取亚硝胺标准溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10ml，分别放入小培养皿中，在小培养皿中分别加入PH7的磷酸缓冲溶液，使溶液的总体积为2.0ml，摇匀。

在紫外光下照1min。

然后依次加入0.5ml显色剂A，摇匀，再加入0.5ml显色剂B，使溶液呈玫瑰红色后，分别在550nm波长下用分光光度计测定其吸光度，然后绘制其标准曲线。

2．样品的制备

液体样品：

称取10.0－20.0g样品（根据样品中亚硝胺的含量大小称量），移入100ml容量瓶中，加入0.5mol/L氢氧化钠溶液，调整其浓度为1mol/L，摇匀后过滤，收集滤液备用。

固体样品：

将固体样品捣碎或研磨搅拌均匀，称取20.0g，用正丁醇饱和过的1mol/L氢氧化钠溶液将其转移入100ml容量瓶中至刻度，摇匀后浸泡过夜，最后离心取清液备用。

3．挥发性N－亚硝胺总量的测定

吸取样品50ml清液置于蒸馏瓶内，将其进行夹层保温水蒸气蒸馏，收集馏出液25ml，用300g/L醋酸溶液调节其PH值至3－4。

再继续蒸馏，再收集馏出液25ml，用0.5mol/L氢氧化钠调至PH7－8。

在紫外光下照射15min，通过强碱性离子（氯离子型）交换柱（φ1cm×0.5cm）浓缩，用少量蒸馏水水洗，然后用1mol/L氯化钠溶液洗脱亚硝酸根，然后分管收集洗脱液，每管1ml，直至所收集的洗脱液加入显色剂不显色为止。

在管中各加入1.0mlPH7的磷酸缓冲溶液、0.5ml显色剂A，摇匀，然后再加入0.5ml显色剂B，待溶液呈玫瑰红色后，在分光光度计以550nm波长下测定其吸光度，根据其吸光度，从标准曲线中查得每管亚硝胺的含量，计算其总含量。

六、计算

X＝

×1000　　　　　　　　（3－2）

式中：

X――挥发性N－亚硝胺含量，μg/kg；

　　　m1――相当于挥发性N－亚硝胺标准的量，μg；

　　　m――测定时样品溶液相当于样品的量，g。

注意事项

对于亚硝酸盐含量高的样品，由于二甲胺与亚硝酸盐在酸性条件下能结合产生亚硝胺，因此，会影响N－亚硝胺的测定结果。

可以用同样的比色法计算出亚硝酸盐相当于挥发性N－亚硝胺含量X0，然后再减去X0得到实际样品中挥发性N－亚硝胺含量。

实训三、稻米中久效磷残留量的检测（气相色谱法）

一、目的

1、了解稻米中久效磷残留量的测定原理。

2、学会气相色谱仪的使用方法。

二、原理

久效磷属有机磷化合物，在富氢焰上燃烧时会以氢磷氧形式放射出特征光，采用磷型火焰光度检测器检测特异性极强。

稻米样品中久效磷采用丙酮作为提取剂进行索氏提取，石油醚液液分配净化，二氯甲烷萃取，浓缩后气相色谱磷型火焰光度检测器检测。

三、仪器与试剂

气相色谱仪，磷型火焰光度检测器，索氏抽提器，旋转蒸发器。

久效磷标准储备液：

准确称取久效磷标准品，用无水乙醇配成浓度约1mg/ml。

久效磷标准使用液：

根据所用仪器的灵敏度将久效磷标准储备液用无水乙醇稀释至适宜浓度。

丙酮、石油醚、二氯甲烷、无水乙醇、氯化钠、无水硫酸钠。

四、实验步骤

1、提取

称取约40g粉碎稻米样品，置于索氏抽提器滤纸筒中，加入100ml丙酮，于67～69℃水浴回流提取6h，提取液经50℃水浴旋转蒸发器上浓缩并定容至3～5ml，待净化。

2、净化

待净化提取液倒入250ml的分液漏斗中，加入100ml的1%硫酸钠溶液，混匀，用石油醚（每次25ml）分4次洗，弃去石油醚层。

加入25ml饱和氯化钠溶液，再用二氯甲烷（每次25ml）萃取4次，合并二氯甲烷层，于40℃的水浴旋转蒸发器上浓缩近干，用无水乙醇溶解并定容至0.5ml，待气相色谱分析。

3、检测

（1）色谱柱玻璃柱，内径3mm，长1m，内装40g/LOV-210/chromosorbWAWD-MCS（80～100目）。

（2）温度柱温185℃，气化室和检测器温度240℃。

（3）气体流速载气：

氮气100ml/min；空气：

200ml/min；氢气：

150ml/min。

注意事项：

1．国际上多用乙腈作为有机磷农药的提取试剂及分配净化试剂，如AOAC，FDA等采取与有机氯农药提取净化大致相同的方法来提取，净化有机磷农药，即用乙腈或石油醚提取，用乙腈/水分配或乙腈/石油醚分配等方法净化。

但乙腈毒性大，价格贵，且不易购买，故本法采用二氯甲烷提取，并在提取时根据样品性状加适量无水Na2SO4、中性氧化铝、活性炭以脱水、脱油、脱色，基本上一次完成提取、净化的目的。

另有用各种吸附柱（如弗罗里矽土柱、活性炭等）或用扫集共蒸馏方法净化。

2．分析测定有机磷农药时，由于农药的性质不同，故应注意担体与固定液的选择，一般原则是：

被分离的农药是极性化合物，则选择极性固定液；若被分离的农药是非极性化合物，则选择非极性固定液，若选择前者，各农药的出峰顺序一般为极性小的农药先出峰，极性大的农药后出峰；若选择后者，则按沸点高低出峰，低沸点的化合物先出峰。

3．有些热稳定性差的有机磷农药如敌敌畏在用气相色谱仪测定时比较困难，主要原因是易被担体所吸附，同时因对热不稳定而引起分解。

故可采用缩短色谱柱到1－1.3m，或减小固定液涂渍的厚度和降低操作温度（如本法）等措施来克服上述困难。

实训四、香肠中亚硝酸盐的测定（盐酸萘乙二胺法）

一、目的

1、熟练掌握样品制备、提取的基本要求。

2、进一步学习并熟练掌握分光光度计的使用方法和技能。

3、盐酸萘乙二胺法测亚硝酸的原理和操作要点。

二、原理

样品经沉淀蛋白质除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，生成重氮化合物，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色颜料，在538nm波长下测定其吸光度与标准比较定量。

本法最低检出限为0.0001g/kg。

三、试剂

1．亚铁氰化钾溶液：

称取106g亚铁氰化钾[K4Fe（CN）6·3H2O]，溶于水后稀释至1000ml。

2．乙酸锌溶液：

称取220g乙酸锌[Zn（CH3COO）2·2H2O]，加30ml冰乙酸溶于水，稀释至1000ml。

3．饱和硼砂溶液：

称取5g硼酸钠[Na2B4O7·10H2O]，溶于100ml热水中，冷却后备用。

4．4g/L对氨基苯磺酸溶液：

称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100ml20%的盐酸中，避光保存。

5．2g/L盐酸萘乙二胺溶液：

称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100ml水中，避光保存。

6．亚硝酸钠标准溶液：

精密称取0.1000g在硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，用蒸馏水溶解移入500ml容量瓶中，并稀释至刻度。

此溶液亚硝酸钠含量为200μg/ml。

7．亚硝酸钠标准使用液：

临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00ml置于200ml容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液亚硝酸钠含量为5μg/ml。

四、操作方法

1．样品处理

称取5.0g经绞碎混匀的样品，将其置于50ml烧杯中，加入12.5ml硼砂饱和溶液，搅拌均匀，用70℃左右的水约300ml，将样品全部转移入500ml容量瓶中，置沸水浴中加热15min后，取出冷却至室温，然后边转动边加入5ml亚铁氰化钾溶液，摇匀后再加入5ml乙酸锌溶液以沉淀蛋白质，加水至刻度，混匀，放置0.5h，除去上层脂肪后将清液用滤纸过滤，弃去初滤液约30ml，收集滤液备用。

2．测定

吸取40ml上述滤液于50ml比色管中，另吸取0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50、2.00、2.50ml亚硝酸钠标准使用液（相当于0、1、2、3、4、5、7.5、10、12.5μg亚硝酸钠），分别置于50ml比色管中。

在样品管和标准系列中分别加入2ml4g/L对氨基苯磺酸溶液，混匀后静置3－5min，再分别加入1ml2g/L盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀后静置15min，然后以2cm比色杯，用零管调节零点，于538nm波长下测定吸光度，并绘制标准曲线比较定量。

五、结果计算

X＝

　　　　　　　　　　　（3－4）

式中：

X――样品中亚硝酸盐的含量，g/kg；

　　　m――样品质量，g；

　　　A――测定用样液中亚硝酸钠的含量，μg；

　　　V1――样品处理液总体积，ml；

　　　V2――比色时吸取样品处理液体积，ml。

注意事项

1．显色时的PH值以1.9－3.0为宜，显色后稳定性与室温有关，一般认为显色温度为15－30℃，在20－30min内比色为好。

2．当样品中亚硝酸盐含量高时，过量的亚硝酸盐可以将生成偶氮化合物氧化，使红色消失，对结果产生影响，可以采取先放入试剂，然后再滴加试液的方法，防止氧化。

实训五、蘑菇罐头中亚硫酸盐的测定（盐酸副玫瑰苯胺法）

一、目的

1、学习盐酸副玫瑰苯胺法的原理及操作要点。

2、熟悉分光光度法的基本操作技术。

二、原理

亚硫酸盐与四氯汞钠反应吸收后，生成稳定的化合物，再与甲醛和盐酸副玫瑰苯胺作用，经分子重排后生成紫红色络合物，颜色的深浅与二氧化硫浓度成正比，在550nm波长测定其吸光度，与标准系列比较定量。

三、试剂

1．四氯汞钠吸收液：

称取27.2g氯化高汞及11.9g氯化钠，溶于水中并稀释至1000ml，放置过夜，过滤后备用。

2．12g/L氨基磺酸铵溶液。

3．2g/L甲醛溶液：

吸取0.55ml无聚合沉淀的36%甲醛，加水稀释至100ml混匀。

4．淀粉指示液：

称取1g可溶性淀粉，用少许水调成糊状，缓缓倾入100ml沸水中，边加边搅拌，煮沸，放冷备用，此溶液临用时现配。

5．亚铁氰化钾溶液：

称取10.6g亚铁氰化钾[K4Fe（CN）6·3H2O]，加水溶解并稀释至100ml。

6．乙酸锌溶液：

称取22g乙酸锌[Zn（CH3COO）2·2H2O]溶于少量水中，加入3ml冰乙酸后加水稀释至100ml。

7．盐酸副玫瑰苯胺溶液：

称取0.1g盐酸副玫瑰苯胺[C19H18N3Cl·4H2O]于研钵中，加少量水研磨使溶解并稀释至100ml。

取出20ml置于100ml容量瓶中，加6mol/L盐酸溶液充分摇匀，使溶液由红变黄，如不变黄可再滴加少量盐酸至出现黄色，再加水稀释至刻度，混匀，备用（如无盐酸副玫瑰苯胺可用盐酸品红代替）。

盐酸副玫瑰苯胺的精制方法：

称取20g盐酸副玫瑰苯胺置于400ml水中，用50ml2mol/L盐酸使其酸化，徐徐搅拌，加4-5g活性碳，加热煮沸2min。

将混合物倒入大漏斗（保温）中，趁热过滤。

滤液放置过夜，出现结晶，然后再用布氏漏斗抽滤，将结晶再悬浮于1000ml乙醚：

乙醇（10+1）的混合液中，振摇3－5min，再用布氏漏斗抽滤，用乙醚反复洗涤至醚层不带色为止。

置于硫酸干燥器中干燥，研细后贮于棕色瓶中保存。

8．0.1mol/L（1/2I2）溶液：

9．0.1000mol/L硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O）标准溶液。

10．二氧化硫标准溶液：

称取0.5g亚硫酸氢钠，溶于200ml四氯汞钠吸收液中，静置过夜，将上清液用定量滤纸备用。

二氧化硫溶液标定：

吸取10.0ml亚硫酸氢钠四氯汞钠溶液于250ml碘量瓶中，加水100ml，准确加入20.00ml0.1mol/L（1/2I2）溶液及5ml冰乙酸摇匀，置于暗处2min后，立即用0.1000mol/L硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O）标准溶液滴定至淡黄色。

用0.5ml淀粉指示液继续滴至无色。

另取100ml，准确加入20.00ml0.1mol/L（1/2I2）溶液和5ml冰乙酸，按相同方法做试剂空白试验。

计算：

C1＝

　　　　　　　　　（3－7）

式中：

C1――二氧化硫标准溶液浓度，mg/ml；

V1――测定用亚硫酸氢钠四氯汞钠溶液消耗硫代硫酸钠标准溶液体积，ml；

V2――试剂空白消耗硫代硫酸钠标准溶液体积，ml；

C0――硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O）标准溶液浓度，mol/L；32.03――1/2SO2的摩尔质量，g/mol。

11．二氧化硫使用液：

临用前将二氧化硫标准溶液用四氯汞钠吸收液稀释成每毫升相当于2μg二氧化硫。

12．0.5mol/L氢氧化钠溶液

13．硫酸溶液：

（1＋1）

四、操作方法

1．样品处理

称取蘑菇罐头样品，开罐后倒入组织捣碎机中捣成匀浆。

称取20g匀浆，置100ml容量瓶中，加入20ml四氯汞钠吸收液，加入亚铁氰化钾及乙酸锌溶液各2.5ml，最