常用试剂的配方.docx

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常用试剂的配方

一.常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺（Spermidine）:

溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：

溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）：

将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白（BSA）：

加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，

须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：

在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg的二硫苏糖醇

至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：

溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：

溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：

溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/LEDTA:

配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/LHEPES：

将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/LHCl：

加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/mlIPGT：

溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2:

溶解20.3gMgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。

100mmol/LPMSF：

溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。

分成小份并用铝箔将装液管包裹

或贮存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）：

将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－freeRNase）：

溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH5.0）。

溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。

用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。

（配制过程中要戴手套）

5mol/L氯化钠（NaCl）：

溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。

10N氢氧化钠（NaOH）：

溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10％SDS（十二烷基硫酸钠）：

称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

用水定容至1L。

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：

溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。

100％三氯乙酸（TCA）:

在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

（稀释液应在临用前配制）

2.5％X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：

溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。

100×Denhardt试剂（Denhardt'sregent）

成分及终浓度

配制100ml溶液各成分的用量

2%聚蔗糖（Ficoll，400型）

2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）

2%BSA（组分V）

水

2g

2g

2g

加水至总体积为100ml

依照上表称取各组分，溶于水中定容。

过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。

10×标准DNA连接酶缓冲液（standardDNAligasebuffer）（粘端、平端连接）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分的用量

0.5mol/LTris-HCl

100mmol/LMgCl2

100mmol/LDTT

2mmol/LATP

5mmol/L盐酸亚精胺（可选）

0.5mg/mlBSA（组分V）（可选）

水

5ml1mol/L贮液

1ml1mol/L贮液

1ml1mol/L贮液

200ul100mmol/L贮液

50ul1mmol/L贮液

0.5ml10mg/mL贮液

2.25ml

将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃。

100mmol/LdNTP溶液（dNTPsolutions）

可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。

10mmol/LdNTP混合液

成分及终浓度

配制20ul溶液各成分的用量

10mmol/LdATP

10mmol/LdCTP

10mmol/LdGTP

10mmol/LdTTP

水

2ul100mmol/LdATP贮液

2ul100mmol/LdCTP贮液

2ul100mmol/LdGTP贮液

2ul100mmol/LdTTP贮液

12ul

20％PEG8000/2.5MNaCl

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分的用量

质量浓度为20％聚乙二醇

2.5mol/L氯化钠

水

20g

50ml5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠

补足100ml

加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。

20×SSC

成分及终浓度

配制1L溶液各成分的用量

300mmol/L柠檬酸三钠（二水）

3mol/L氯化钠

水

88.2g

175.3g

补足1L

溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水

加100ulDEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1％。

在37℃温浴至少12h，然后在15psi条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。

DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionizedformamide）

直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。

经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。

磷酸缓冲液（phosphatebuffer）

按照下表所给定的体积，混合1mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。

配制1mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）贮液：

溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:

溶解142g于足量水中使终体积为1L。

1mol/L磷酸二氢钠（ml）

1mol/L磷酸氢二钠（ml）

最终pH值

877

850

815

775

735

685

625

565

510

450

390

330

280

123

150

185

225

265

315

375

435

490

550

610

670

720

6.0

6.1

6.2

6.3

6.4

6.5

6.6

6.7

6.8

6.9

7.0

7.1

7.2

TE（用于悬浮和贮存DNA）

成分及终浓度

配制100ml溶液各成分的用量

10mmol/LTris－HCl

1mmol/LEDTA

水

1ml1mol/LTris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）

200ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

98.8ml

Tris缓冲液（Tris-HClbuffer）

将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。

浓盐酸的体积（ml）

pH

8.6

14

21

28.5

38

46

56

66

71.3

76

9.0

8.8

8.6

8.4

8.2

8.0

7.8

7.6

7.4

7.2

二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

电泳缓冲液

50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液

成分及终浓度

配制1L溶液各成分的用量

2mol/LTris碱

1mol/L乙酸

100mmol/LEDTA

水

242g

57.1ml的冰乙酸（17.4mol/L）

200ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）

补足1L

5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液

成分及终浓度

配制1L溶液各成分的用量

445mmol/LTris碱

445mmol/L硼酸盐

10mmol/LEDTA

水

54g

27.5g硼酸

20ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）

补足1L

染料

1％溴酚蓝（bromophenolblue）

加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（xylenecyanoleFF）

溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭（ethidiumbromide）

小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。

用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。

凝胶上样液（gelloadingsolutions）

6×碱性凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.3N氢氧化钠

6mmol/LEDTA

18％聚蔗糖（400型）

0.15％溴甲酚绿

0.25％二甲苯青FF

水

300ul10N氢氧化钠

120ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

1.8g

15mg

25mg

补足到10ml

6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF

5mmol/LEDTA

15％聚蔗糖（400型）

水

1.5ml1％溴酚蓝

1.5ml1％二甲苯青FF

100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

1.5g

补足到10ml

6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.25％溴酚蓝

0.25％二甲苯青FF

15％聚蔗糖（400型）

水

2.5ml1％溴酚蓝

2.5ml1％二甲苯青FF

1.5g

补足到10ml

6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF

5mm