纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案版药典上上.docx
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纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案版药典上上
纯化水需氧菌检查R2A培养基适
用性试验方案--2015年版药典-
上上2018年
纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案
起草
部门：
QC组
签名：
日期：
审核
部门：
QC组
签名：
日期：
部门：
质量
部
签名：
日期：
批准
质量负责人
签名：
日期：
质量部颁发
本文件根据需要应分发于以下部门：
01质量部
下表用于记录修订/变更主要内容及历史
文件编号
修订原因
修订
日期
按GMP（2010年修订版）及2015年版《中国药典》要求新制定
1・概述
3.组织及职责
4.验证进度计划表
5.
验证所需要的仪器设备的确认确认
7.验证项目和验证方法7.1试验菌株7.2菌液制备7・3培养基适用性检查
7.4计数方法适用性试验（薄膜过滤法）
&偏差与漏项控制
9.验证报告会审
制药有限公司
第4页共16页
制药有限公司第5页共16页
1.概述我公司自制纯化水微生物限度检查项目为需氧菌总数检查。
参照《中国药典》2015版四部附录1105：
微生物计数法的规定，须对纯化水检查所用的R2A培养基进行适用性试验。
通过适用性试验以确认所采用的培养基适用于纯化水的需氧菌检查。
本验证方案通过试验菌株的回收率测试，验证
R2A琼脂培养基是否适用于本品的需氧菌总数检查。
2.验证目的和范围
验证纯化水的需氧菌检查所用R2A培养基的适用性，对其有效性进行评价，保证检验结果的可靠性。
本验证方案采用1批按GMF要求组织生产的纯化水，并进行R2A培养基适用性检查。
3.组织及职责
3.1验证方案和验证报告的起草、审核、批准
验证方案由质量部QC组负责起草，由质量部审核，最终由质量负责人批准。
验证方案实施完成后，由QC组负责汇总需氧菌检查法验证的结果、撰写报告，由质量部审核，最终由质量负责人批准报告。
3.2验证方案的培训
验证方案在经质量负责人批准后，由QC组组长对本次验证实施的相关人员组织培训工作，并将该次的培训记录归档。
3.3验证方案实施过程中的变更和偏差
验证方案实施过程中如有变更和偏差，质量负责人应当组织进行评估并采取相应的控制措施。
3.4验证工作小组成员表
姓名
部门及职务
职责
质量负责人/质量受权人
负责验证方案及报告的批准
质量部QA组长
审核验证方案、审核验证报告并协调工作
质量部QC组长
负责验证方案审核、实施、汇总报告及培训工作
质量部QC
负责验证方案起草、具体实施、报告工作
4.验证进度计划表
本次R2A培养基的适用性试验的计划安排时间是
2015年8月至2015年9月。
5.验证所需要的仪器设备的确认
主要检验仪器设备确认表
序号
仪器设备名称
型号
编号
生产厂家
1
电子天平
2
电热恒温水浴锅
3
恒温培养
箱
4
压力蒸汽灭菌锅
5
生物安全
柜
6
微生物限度检查仪
7
洁净工作台
检查人/日期复核人/日期：
6.验证所需要的菌种、培养基、试剂、检验样品的确认
6.1.试验菌种检查表
骨口.序号
菌种名称
代码
甘油菌种批号
菌种内控
缩写
来源
1
铜绿假单胞菌
CMC（B）10104
Pa
中国食品药品检定研究院
2
枯草芽抱杆菌
CMC（B）63501
Bs
中国食品药品检定研究院
检查人/日期复核人/日期：
6.2试验所需的培养基检查
骨口.序号
名称
生产厂家
是否通过培养
批号
基适用性试验
01
胰酪大豆胨液体培养基
□是
□否
02
胰酪大豆胨琼脂培养基
□是
□否
03
R2A琼脂培养基
□是
□否
04
R2A琼脂对照培养基
□是
□否
检查人/日期复核人/日期：
6.3试剂
骨口.序号
名称
规格
级别
生产厂家
批号
01
pH7.0无菌氯化钠-
蛋白胨缓冲液干粉
250g
\
检查人/日期
复核人/日期：
64试剂及培养基配制
pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液（冲洗液）：
称取pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液干粉16.09g。
加水定容1000mL微温溶解，滤清，分装至蓝盖试剂瓶，121C湿热灭菌20min。
胰酪大豆胨液体培养基：
取胰酪大豆胨液体培养基29.8g，加1L纯化水，加热助溶，分装至蓝盖试剂瓶，121C湿热灭菌20min。
胰酪大豆胨琼脂培养基：
取本品40g,加1L纯化水，加热助溶，分装至锥形瓶，121C湿热灭菌
20min。
R2A琼脂对照培养基：
取本品4.55g，加300mL纯化水，加热助溶，分装至锥形瓶，121C湿热灭菌20min。
R2A琼脂培养基：
取本品18.2g，加1L纯化水，加热助溶，分装至蓝盖试剂瓶，121C湿热灭菌20min。
7.验证项目和验证方法
7.1试验菌种
R2A培养基的适用性试验所用的菌株为本实验
室-80C冰箱保存的铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的甘油菌，均为第2代。
7.2菌液制备
7.2.1.稀释液的配制
pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：
称取pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液干粉16.09g。
加纯化水定容1000mL微温溶解，滤清，分装至1000mL蓝盖试剂瓶中，121C湿热灭菌20min。
7.2.2.菌液的制备
从-80C冰箱取出铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌
的第2代菌液，分别接种至10ml胰酪大豆胨液体培养基中，30〜35C培养18〜24小时。
同时分别划线接种至胰酪大豆胨琼脂培养基中，30〜35C培养
18〜24小时。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使
用；若保存在2〜8C,可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2〜8C,在验证过的贮存期内使用。
7.3.培养基适用性检查
取铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各不大于100
cfu的菌液1ml分别注入90mm无菌平皿中，注入15-20ml温度不超过45C的供试R2A琼脂培养基，混匀，凝固，每种试验菌各稀释度制备两个平板，置30-35C倒置培养3天，计数；同时，用R2A琼脂对照培养基替代被检R2A琼脂培养基进行上述试验。
回收率=供试培养基组/对照培养组X100%
计数培养基适用性检查验证记录
试验时间年月日
成时间年月日
平皿号
供试培养基组
对照培
养基组
回收率%
1
2
平均值
验证菌株
铜绿假单胞菌
（培养3
枯草芽抱杆菌
1
2
平均值
（培结论3
复核人试验
人.
7.4接受标准
可接受标准为各株试验菌的回收率应在0.5〜2
范围内。
8.偏差与漏项控制：
微生物限度检查方法验证过程中存在和发现的任何偏差与漏项，都应进行详细的记录，并应按公司GMP文件《偏差处理规程》进行调查与处理。
偏差调查与处理的报告和支持文件，应作为此确认方案的附录部分。
偏差和漏项记录表
偏差和漏项：
处理过程:
检查人/日期复核人/日期：
—
9.验证报告会审
验证报告会审表
验证项目查名称查试
纯化水需氧菌检
呈R2A培养基适用性
式验方案
》验证项目负责人
验证起止日期
验证报
告编号
验证结论：
评价和建议：
验证报告会审人签名
起草
部门：
质量部QC组
签名/日期
审核
部门：
质量部QC组
签名/日期
部门：
质量部QA组
签名/日期
批准
质量负责人
签名/日期
验证报告
2015年8月29日至年月日，验证小组根据批准的微生物限度检查方法验证文件对培养基适用性检查（需氧菌）进行了相关的一系列验证工作，达到了预期效果，滋将有关事项说明如下：
1、验证方案在实施过程中未做修改。
2、验证方案各项性能指标在验证中未作变动，误差在允许范围内。
3、验证过程中结果符合规定要求，记录完整属实。
4、验证结果符合设计要求和GMP原则要求，可以投入使用。
5、片组分或检验条件改变时须重新验证。
验证小组：
年月日
试验报告审批表
验证名称
纯化水需氧菌检查R2A培养基适用
性试验方案
编号
SOP-V-028
验证内容
审阅会签
质
量
部
审核人：
年
月日
验证委员会意见:
批准人:
验证证书
验证证书编号：
验证名称：
有效期：
上述方法已按验证方案进行验证，各项验证结果符合标准要求，批准此R2A琼脂培养基可进行本品的需氧菌检查。
特发此证。
验证总负责人：
年月日
备注:
升级会员 