执业药师考试药物分析讲义汇总.docx
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执业药师考试药物分析讲义汇总
第一章 国家品标准
1.概念
2.制定原则
3.中国药典结构和现行版本
4.其他常用药典
5.药物分析相关的凡例规定
1.国家药品标准概念
记载有药品规格、检验方法以及生产工艺的技术要求的、各药品相关部门和单位共同遵循的法定依据、技术文件。
三类:
药典、药品标准、药品注册标准
2.制定原则
三性
药品针对性
方法科学性:
准确灵敏简便快速,先进不乏适用(利于普及)
限度合理性
3.中国药典结构和现行版本
中国药典
Ch.P,2010年版,三部
结构:
凡例、正文、附录、索引
凡例
概念:
共性问题统一规定,有法律约束力
相关规定
“贮藏”:
密闭、密封、熔封或严封
阴凉处、凉暗处、冷处、常温、未规定贮藏温度
方法:
法定方法,仲裁依据
含量及限度:
重量百分数;原料药含量>100%;未规定上限
相关规定
标准品、对照品:
指定部门制备、标定及供应;对照品含量除另有规定外,按干燥品(或无水物)计算;标准品用于生物检定、抗生素或生化药品含量或效价测定,按效价单位(或μg计)。
精确度(例子):
称取,“约”若干,称定、精密称定、精密量取,恒重,“按干燥品计”,空白试验,未注明的实验温度的试验温度规定
正文
内容:
品名、结构式、分子式、分子量、含量或效价规定、性状、鉴别、检查、含量测定、规格、类别、贮藏、制剂
性状:
外观、臭、味、溶解度、物理常数
鉴别:
化学法(显色、沉淀、产气)、物理化学法、生物学法
检查:
安全性、有效性、均一性、纯度(例子)
含量测定:
重量百分数、干燥品计
化学分析法:
精密度高、准确性好
仪器分析法:
灵敏度高、专属性强
生物测定法:
结果与活性相关
附录
内容:
制剂通则、通用检测方法、指导原则
作用:
“通用”方法和“指导原则”的技术文件
一般鉴别试验、分析方法、物理常数测定方法、特殊基团和物质测定方法、一般杂质检查方法、试液、滴定液配制等
外国药典
美国药典:
USP
英国药典:
BP
日本药局方:
JP
欧洲药典:
E.P.
第二章 药物分析基础
1.药品检验基本程序
2.计量器具的使用与校正
3.数据处理
4.方法验证
药品检验的基本程序
取样:
3件、300件、三公式、3次用
检验:
性状、鉴别、检查、含量测定
记录和报告
记录与报告的内容:
检验对象、检验依据、检验项目与方法、数据、结果和结论、检验人(复核人)、负责人
原则:
真实、完整、简明、具体、清晰
涂改方式
计量器具的使用与校正
计量器具:
分析天平、紫外与红外分光光度计、pH计、旋光计、
容量瓶、滴定管和移液管
分析天平
用途:
含量测定、对照品、滴定液标定等的“精密称定”
感量:
0.1mg0.01mg,0.001mg
选用:
不同称量范围选用不同感量的天平(原理与例子)
校正项目
方法
旋光计
准确度
标准石英旋光管
pH计
准确度(定位、斜率)
两种标准缓冲液
紫外-可见分光光度计
波长、吸光度、杂散光
汞灯、氘灯波长用;重铬酸钾吸光度;杂散光需用二钠盐:
碘化钠、亚硝酸钠
红外分光光度计
波数、分辨率
聚苯乙烯薄膜
玻璃仪器校正
原理:
V=W/d
容量瓶:
允差为1/1000,校正时,瓶内干净、干燥、不挂水珠
移液管:
100ml允差:
1/1000;25ml:
2/1000
滴定管:
分段校正;允差:
10ml以下2/1000,20ml以上1/1000
数据处理
误差的概念
绝对误差和相对误差
系统误差与偶然误差
系统误差特点:
方向、大小固定,重复出现,来自方法、试剂、操作、仪器;消除原因可消除
偶然误差特点:
方向、大小不固定,大误差概率小,小误差概率大,正负误差几率相等;重复测定平均可减少
有效数字(所有计量的数据)
准确数字+最后一位不准确数
位数
修约:
四舍六入五留双
运算法则:
加减传递绝对误差;乘除传递相对误差(例子)
分析方法验证
验证内容:
准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性
准确度:
回收率(%)及其公式
精密度:
同一均匀样品,偏差或标准偏差(SD)或相对标准偏差(RSD)及其公式;精密度与准确度关系
精密度评估的三层次:
重复性(同一人多次)、中间精密度(同实验室不同人多次)、重现性(不同实验室不同人)
专属性
检测限:
能检出的最低浓度或量
目视法
信噪比法S/N
定量限:
能准确定量的最低浓度或量
信噪比10/1
线性:
测定结果与样品浓度正比关系
最小二乘法回归,相关系数r
范围:
在达到准确度、精密度和线性要求下,适用的高低限浓度区间
耐用性:
测定条件变动对方法结果的影响程度
分析方法
定性分析(如鉴别):
检测限、专属性、耐用性
定量分析
常量定量:
准确度、精密度、线性、范围、专属性、耐用性
微量定量:
准确度、精密度、定量限、线性、范围、专属性、耐用性
附表 检验项目和验证内容
鉴别
杂质测定
含量测定及溶出量测定
定量
限度
准确度
精密度
重复性
中间精密度
专属性
检测限
定量限
线性
范围
耐用性
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+
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第三章 物理常数测定法
物理常数测定的意义
物理常数:
熔点、凝点、相对密度、比旋度、黏度、碘值、皂化值、酸值、吸收系数、馏程、折光率(二点三度三值一数一馏率)
本章内容:
熔点、旋光度和pH值
熔点测定法
概念:
熔点、熔程、初熔、全熔、熔融同时分解
测定法:
三法
考试要素:
105℃或五氧化二磷干燥;3mm,2.5cm,样品于汞球中部,升温速率,重复三次平均;b形管;经过校正的0.5℃刻度分浸型温度计;内径0.9-1.1mm,壁厚0.1mm的中性硬质玻璃毛细管;传温液
旋光度测定法:
概念:
平面偏振光,顺右逆左
比旋度概念
应用:
鉴别、检查、含量测定,记住测定比旋度或用旋光法进行检查和含量测定的药物
测试方法:
0.01°,无气泡澄清溶液,溶剂空白校正,中国药典20℃、钠光谱D线(589.3nm)
pH值测定
概念:
氢离子活度负对数
pH值测定系统(原电池):
指示电极、参比电极、待测液
测定方法
标准缓冲溶液的选择
定位和斜率调整
高pH值的碱误差:
锂玻璃电极
新沸放冷的纯化水、电极清洗
第二部分分析方法
第四章 滴定分析法
标准液(滴定液)(A)
待测物(B)+指示剂
A+B=C
滴定分析概念:
滴定液与待测物定量反应;指示剂
滴定特点:
准确可靠,简便快速,原料药分析首选
滴定类型及其原理
指示剂选用及终点现象
滴定液配制与标定(基准物、有特点的方法)
应用
酸碱滴定
类型
原理特点
滴定剂
指示剂
应用
强酸、强碱滴定
突越大,计量点为7
0.05mol/L硫酸、0.1mol/L盐酸、氢氧化钠
酚酞、甲基红、甲基橙
滴定液标定
强酸滴定弱碱
CKb≥10-8;突越在酸侧,计量点为5.27
0.05mol/L硫酸、0.1mol/L盐酸
甲基红、甲基橙
弱碱性药物
强碱滴定弱酸
CKa≥10-8;突越在碱侧,计量点为8.73
0.1mol/LNaOH
酚酞
弱酸性药物
非水滴定
非水碱量法:
Kb≥10-10冰醋酸或醋酐为溶剂;非水酸量法:
乙二胺或二甲基甲酰胺为溶剂
0.1mol/LHClO4
0.1mol/LNaOCH3
碱量法:
电位法或结晶紫;酸量法:
麝香草酚蓝、溴酚蓝
碱量法:
弱碱性药物、有机碱无机酸盐、有机碱有机酸盐、有机酸碱金属盐
滴定剂标定
滴定剂
配制要点
基准物
指示剂
标定要点
0.1mol/L盐酸、硫酸
基准无水碳酸钠
甲基红-溴甲酚绿
270-300℃干燥基准物除去水和碳酸氢钠;
紫红色时煮沸2min,除去CO2;暗紫色终点
0.1mol/L氢氧化钠
饱和氢氧化钠溶液去除碳酸钠;新沸过的冷水去除水中CO2
邻苯二甲酸氢钾
酚酞
105℃干燥基准物;粉红色终点
0.1mol/L高氯酸
无水冰醋酸溶剂,醋酐除去冰醋酸和高氯酸中的水分
邻苯二甲酸氢钾
结晶紫
105℃干燥基准物;蓝色终点,空白试验校正
0.1mol/L甲醇钠
无水甲醇、金属钠,无水苯
基准苯甲酸
麝香草酚蓝
五氧化二磷干燥至恒重,蓝色终点
标定计算公式
氧化还原滴定
类型
原理特点
滴定剂
指示剂
注意事项与应用
碘量法
1.直接、剩余碘量法:
以碘作氧化剂,滴定还原性物质;
2.置换碘量法:
以碘化钾作还原剂,滴定氧化性物质
1.直接碘量法:
0.05mol/LI2;
2.剩余碘量法:
0.1mol/L硫代硫酸钠、碘滴定液
3.置换碘量法:
0.1mol/L硫代硫酸钠
淀粉指示液2-10ml;直接法直接加入;剩余和置换法近终点加入,直接法变蓝,间接法蓝消失
1.酸性至弱碱性溶液中滴定;
2.剩余法和置换法碘瓶中进行
3.VC、咖啡因、硫代硫酸钠标定
亚硝酸钠法
芳伯氨基重氮化
0.1mol/L亚硝酸钠滴定液
永停法、內指示剂、外指示剂
1.溴化钾加快反应,多用盐酸;2.液面下2/3,先快后慢;3.电流指针不再回零;4.磺胺类药物含测
铈量法
酸性条件下测定还原性物质
0.1mol/L硫酸铈滴定液
邻二氮菲,红变蓝
亚铁类药物,不受淀粉等糖类干扰;生育酚检查;硝苯地平含量测定
滴定剂
配制要点
基准物
指示剂
标定要点
0.05mol/L碘滴定液
碘+碘化钾+盐酸:
增加溶解度,去除碘酸盐,防止自身氧化还原
淀粉,近终点加入,至蓝色消失
用已标定的硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)标定
0.1mol/L硫代硫酸钠
硫代硫酸钠+无水碳酸钠+新沸过的冷水:
抑制细菌,防止分解除去水中二氧化碳和氧气
120℃干燥恒重的基准重铬酸钾
淀粉3ml,蓝色消失呈亮绿色
碘化钾,碘瓶,暗处放置10min,1mol硫代硫酸钠相当于1/2mol碘,相当于1/6重铬酸钾
0.1mol/L硫酸铈
硫酸铈+硫酸
105℃干燥恒重的基准三氧化二砷
邻二氮菲
红色变淡绿色;一氯化碘催化,氢氧化钠促溶解,盐酸滴定液中和
0.1mol/L亚硝酸钠
亚硝酸钠+无水碳酸钠
120℃干燥恒重的基准对氨基苯磺酸
永停指示法
溴化钾,温度,液面下2/3,先快后慢
第五章 分光光度法
紫外-可见分光光度法、红外分光光度法,掌握:
1.原理
2.仪器基本结构
3.应用
紫外-可见分光光度法
原理
价电子能级跃迁,200-760nm光吸收
定量:
单色光,
比吸收系数、摩尔吸收系数,A值范围0.3-0.7
仪器结构
光源:
氢灯、氘灯和钨灯
单色器:
光栅+狭缝
吸收池:
玻璃、石英
检测器:
光电倍增管
二极管阵列(同一时间得到全波长光谱)
应用
要求
1.溶剂:
溶解药物、不挥发、无化学作用、吸光度符合要求
2.空白对照:
溶剂
3.测定波长:
偏差小于±2nm
4.供试液浓度:
使A值在0.3-0.7
5.狭缝宽度(保证单色光和灵敏度):
狭缝再小,吸光度不再大
类型
1.鉴别:
核对光谱特征参数(
)
比较光谱、比较A比值
2.杂质检查:
如肾上腺素的酮体检查
3.含量测定:
对照品比较法
吸收系数法
计算分光光度法
比色法
红外分光光度法
原理:
分子振动、转动能级跃迁,偶极矩大峰强度大,4000-400cm-1
仪器结构
光源:
能斯特灯和硅碳棒
吸收池:
气、液、固均可,固体为KBr、氯化钾压片或糊法、薄膜;液体溶剂为CHCl3或CS2,盐片有:
KBr、氯化钾、氯化钠盐片
单色器:
光栅或尼克尔干涉仪
检测器:
真空热电偶、高来池
红外吸收与结构关系
官能团区4000-1300cm-1与指纹区1300-400cm-1及其特点
重要的官能团吸收特征
官能团
振动形式
峰位
O-H,N-H
νOHνNH
3750-3000强
≡C-H,=C-H,Ar-H
ν≡CHν=CHνAr
3300-3000弱
-C-H
ν-CH
3000-2700
C=O
νC=O
1900-1650
C=C,C=N
νC=C
1650-1500
C-O
νC-O
1300-1000
应用
鉴别:
药品红外光谱集
检查:
甲苯咪唑低效晶型
第六章 色谱法
色谱的概念与分析特点
色谱理论
色谱分类
色谱仪器基本结构(检测器)
色谱分析应用
色谱基础知识
1.色谱分析特点:
高灵敏度、高效能、高选择性、快速度
2.色谱峰三参数:
峰面积(定量)、峰位(定性)、峰宽(柱效)
色谱理论
分配系数、容量因子:
k=K×(Vs/Vm)=(Cs/Cm)×(Vs/Vm);容量因子差异是色谱分离的先决条件;分配系数差异是物质分离的前提。
两个理论
速率理论:
涡流扩散(小粒度均匀颗粒匀浆装柱);传质阻抗(小粒度、低粘度、适当高温);纵向扩散(限气相色谱)
塔板理论:
n=5.54(tR/Wh/2)2
H=L/n
色谱分离原理分类
吸附色谱:
如薄层色谱
分配色谱:
固定相为液体的液相、气相色谱,最普遍
离子交换色谱:
离子型物质分离
分子排阻色谱:
大分子物质可利用分子大小不同而分离
薄层色谱
原理:
利用A、B两种物质的KA≠KB而分离
固定相:
硅胶(活化、G、H、F254)、硅藻土、氧化铝、纤维素等
薄层板制备:
1份固定相+3份水,同一方向研磨
点样:
距底边2.0cm,样点直径2-4mm;
检视:
显色、荧光
色谱系统适用性:
灵敏度、比移值、分离度
应用
鉴别:
比较Rf值是否一致
杂质检查:
杂质对照法、自身稀释对照法
高效液相色谱法
原理:
分配色谱、分子排阻色谱、离子交换…
分配色谱分类:
反相色谱(流动相极性大于固定相;极性强的先出柱;分离非极性和中等极性有机分子;固定相多为C18(ODS)和C8柱;流动相多为甲醇-水或乙腈-水;最广泛);
正相色谱(流动相极性小于固定相;极性弱的先出柱;分离极性和中等极性有机分子)
仪器结构
高压泵
色谱柱(固定相:
C18烷基键合硅胶,流动相:
甲醇-水或乙腈-水)
进样阀
检测器
浓度型:
紫外检测器、光电二极管阵列检测器、荧光检测器、电化学检测器、质谱检测器
质量型:
蒸发光散射检测器、示差折光检测器
色谱系统适用性
四参数:
理论板数、分离度、重复性和拖尾因子
理论板数、分离度(R>1.5)、重复性(RSD≤2.0%)、拖尾因子(0.95-1.05)的计算公式
标准色谱分析方法中的固定因素:
固定相种类、流动相组成、检测器类型
应用
1.鉴别:
比较tR
2.杂质检查
内标法(公式)
外标法(公式)
加校正因子(需有杂质对照品)和不加校正因子主成分自身对照
面积归一化
3.含量测定
内标法
外标法
气相色谱法
原理:
分配色谱,分离热稳定蒸汽压大的物质
仪器结构
气源:
氮、氦、氢
进样:
顶空进样、直接进样
色谱柱:
填充柱和毛细管柱(开管型(涂壁WCOT或涂层SCOT);填充型);SCOT应用最多;色谱柱用前需老化
固定液与载体
固定液:
烃类(角鲨烷,非极性)、硅氧烷(弱极性,应用最广)、醇类(氢键型,聚乙二醇,药物分析常用)
载体:
硅藻土、多孔微球
检测器:
火焰离子化检测器(FID)、电子捕获检测器(ECD,用于含卤素、硫、氧、等电负性强基团)、质谱检测器(MS)、热导检测器(TCD)
应用(同液相色谱)
内标法
外标法
标准加入法(消除样本基质的影响)
面积归一化法
电泳法
原理:
带电荷物质在电场下趟度差异而分离
影响因素:
pH值和离子强度(缓冲液)、电场强度、样品浓度1%
类型:
平板电泳、毛细管电泳
应用
鉴别:
肝素钠乳膏鉴别:
琼脂糖凝胶电泳
分子量测定:
注射用重组人促红素:
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
纯度检查:
冻干人血白蛋白纯度:
醋酸纤维素薄膜电泳;肉毒抗毒素纯度:
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
等电点测定:
注射用重组人白介素-2等电点:
等电聚胶电泳
分子组分比测定:
尿激酶分子组分比:
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
第七章 体内药物分析
体内样品种类
血液:
血浆、血清、全血的制备与存放
尿液:
药物代谢物
随时尿、晨尿、白天尿、夜间尿及时间尿
唾液:
游离药物浓度
体内样品处理
血浆或血清除蛋白
1.蛋白沉淀法:
有机溶剂(甲醇、乙腈、丙酮)、强酸(三氯醋酸、高氯酸)、无机盐(硫酸钠、镁盐)
2.蛋白分解法
缀合物水解(代谢物分析)
1.酸水解:
盐酸或磷酸
2.酶水解:
葡糖醛酸苷酶或硫酸酯酶
纯化和浓集
液液萃取:
与水不相溶的有机溶剂:
三氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷;水相pH(pKa差异3pH);
固相萃取:
活化(先甲醇后水)、加样、洗涤(低比例甲醇水)、洗脱(高比例甲醇水)
测定
免疫分析和色谱分析
第八章 药物的杂质检查
杂质来源
杂质分类
杂质限量的概念、计算(例子)
常见一般杂质的检查
杂质来源:
依法生产和贮存;原料、中间体、副产物、溶剂、试剂、来自于器皿管道的金属、水解氧化异构化晶型改变
杂质分类:
一般杂质、特殊杂质
杂质限量:
概念、计算(例子)
一般杂质检查
氯化物
原理:
硝酸条件下,氯化钠对照,硝酸银,生成氯化银,检查Cl-
方法:
稀硝酸、硝酸银、标准氯化钠0.01mg/ml,暗处放置5min,黑色背景下观察白色沉淀
注解:
每50ml中含50-80μg的Cl为宜;硝酸避免碳酸银、磷酸银等的干扰;不澄清可过滤,滤纸先用硝酸洗净Cl-;供试液如有色,采用内消色法;高锰酸钾加乙醇褪色。
硫酸盐
原理:
盐酸条件下,硫酸钾对照,氯化钡,生成硫酸钡,检查SO42-
方法:
稀盐酸、25%氯化钡、标准硫酸钾100μg/ml,黑色背景下观察白色沉淀
注解:
每50ml中0.1-0.5mg的SO42-为宜;盐酸作用:
避免碳酸钡、磷酸钡等的干扰;供试液不澄清可过滤,滤纸先用盐酸洗净硫酸盐;供试液如有色,采用内消色法。
铁盐(硫氰酸盐法)
原理:
盐酸条件下,硫酸铁铵对照,硫氰酸铵,生成硫氰酸铁,检查Fe3+、Fe2+
方法:
稀盐酸、过硫酸铵、硫氰酸铵溶液、标准铁溶液10μg/ml,比较颜色深浅
注解:
每50ml中含10-50μg的Fe3+最佳色泽梯度;盐酸作用:
避免Fe3+水解;过硫酸铵可氧Fe2+成Fe3+,防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。
供试液如有色,采用正丁醇或异戊醇,取醇层比色。
重金属
概念与原理:
与硫代乙酰胺或硫化钠显色的一类金属总称;限度用铅离子表示。
方法:
三个
硫代乙酰胺法:
pH3-3.5醋酸盐缓冲液中,甲、乙、丙三管,甲为对照,乙为供试液,丙为对照+供试液,则:
乙<甲≤丙为合格;标准液为硝酸铅,10μg/ml的Pb,标准铅溶液1-2ml。
甲>丙,则第二法。
炽灼后的硫代乙酰胺法:
用于难溶、易于重金属离子形成配位化合物的有机药物;炽灼温度500-600℃
硫化钠法:
用于只溶解于碱性水溶液的药物,如磺胺、巴比妥类;硫化钠显色剂。
砷盐:
两个方法
古蔡氏法
原理:
砷盐与氢生成的砷化氢,遇溴化汞,生成黄色至棕色的砷斑
方法:
1.盐酸+Zn+碘化钾+酸性氯化亚锡;醋酸铅棉花60-80mm/60mg;溴化汞试纸;2.标准砷溶液:
三氧化二砷配储备液,临用稀释(1μg/ml),用量:
2ml
二乙基二硫代氨基甲酸银法
显色:
砷化氢与Ag(DDC)成红色胶态银;目视或510nm处检测
碘化钾与酸性氯化亚锡的作用:
五价砷至三价
干燥失重:
水分或有机溶剂
常压干燥
常压恒温干燥:
恒重的扁称量瓶,细粉,厚度
常压室温干燥:
不耐热药物;硅胶、硫酸和五氧化二磷
减压干燥
减压恒温干燥:
熔点低、热不稳定药物,水分难除
减压室温干燥:
熔点低,不能加热药物
热重分析:
瓷坩埚、微量分析天平;结晶水测定、贵重药物或空气易被氧化药物
炽灼残渣
原理:
有机药物的无机金属氧化物或盐等杂质
方法:
恒重的坩埚,硫酸,700-800℃炽灼
易炭化物
原理:
遇硫酸易炭化或氧化的微量有机杂质
方法:
硫酸,标准比色液比较
残留溶剂
有机溶剂分类:
四类(一类:
苯、四氯化碳;二类:
乙腈、甲醇、三氯甲烷)
方法:
气相色谱法
色谱柱:
极性聚乙二醇类;中等极性硅氧烷类
载气:
氮气
检测器:
FID,ECD
色谱系统适用性:
理论板数(填充柱不低于1000)、分离度(大于1.5)
溶液颜色
方法
与标准比色液比较:
重铬酸钾、氯化钴、硫酸铜,五种色调储备液,10个色号标准比色液
分光光度法
色差计法(目视法不易判别时)
澄清度
原理:
注射剂原料的不溶性杂质
方法:
浊度标准液:
硫酸肼+乌洛托品;伞棚灯;1000lx水平观察。
典型药物分析
药物分析考试的重点:
50%
复习方法
熟悉药物所在章节,有助于回忆起其内容
药物构性关系是分析方法的基础
在药物的,注意有特点的鉴别、检查和含量测定各项中反应(项目)名称、试剂、方法和现象的归纳、比较和总结
重点是一般性规律、特色项目(如药物专属反应)(方法)的总结
第九章 芳酸及其酯类药物的分析
本章药物及特点
阿司匹林:
酯、酚羟基、羧基、苯环
布洛芬:
羧基、苯环
丙磺舒:
卞酸基
鉴别
阿司匹林原料
三氯化铁反应(酚羟基):
煮沸+三氯化铁试液—紫堇色
水解反应:
碳酸钠+煮沸+稀硫酸—白色沉淀+醋酸臭气
红外:
-OH,C=O,C-O,C=C
丙磺舒