《临床生物化学和生物化学检验》.docx

《临床生物化学和生物化学检验》.docx

《《临床生物化学和生物化学检验》.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《《临床生物化学和生物化学检验》.docx（23页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

《临床生物化学和生物化学检验》

《临床生物化学与检验》

实验教学大纲

（供检验医学专业本科教学使用）

蚌埠医学院

生物化学与分子生物学教研室制定

二OO八年八月

蚌埠医学院

《临床生物化学与检验》课程实验教学大纲

课程编号：

课程名称：

临床生物化学与检验

英文名称：

ClinicalBiochemistryandTechniquesofBiochemistry

课程性质：

专业主干课程

适用专业：

医学检验本科

考核方式：

日常考核、操作考核、提交实验结果。

实验成绩的构成是由实验报告成绩、平时成绩、实验考核成绩三部分组成。

实验总成绩40分，其中实验报告成绩15分、平时成绩10分、实验考核成绩15分。

课程简介：

本课程是医学检验专业本科生的必修课程，临床生物化学和生物化学检验是由生物化学、分析化学、临床医学等学科交叉融合而形成边缘学科，是临床医学的不可分割的重要组成部分，是医学检验专业学生的主干课程之一。

临床生物化学和生物化学检验着重阐述了人体疾病发病机制中的生物化学改变，临床生物化学检验方法的原理、方法学评价、检测结果的临床意义和如何按循证医学要求合理选择相关检验指标。

教学大纲要求总学时162学时，其中理论教学68学时、实验教学68学时，实验教学共15实验类别，共计26个实验。

选用教材：

钱士匀.主编.临床生物化学与检验实验指导.人民卫生出版社，第三版.2007.

实验一生化实验要求、电教

一、类别：

示教性实验

二、实验目的和要求：

【掌握】

1.正确使用玻璃器材。

包括：

⑴认识玻璃器材。

⑵掌握玻璃器材的分类。

⑶掌握玻璃器材的正确使用方法。

⑷掌握玻璃器材的正确清洗方法。

⑸了解玻璃器材的校准方法。

2.正确使用各种加样器。

【熟悉】

1.实验室的规则。

2.药品和试剂的分级和使用原则。

【了解】检验科临床生化室的基本操作流程及实验室规则。

三、实验内容：

1．介绍实验室的一般规则，包括实验秩序、药品和试剂使用规则。

2．发实验器材。

3．观看电教，熟悉相关器材与仪器的正确使用。

四、学时：

4学时

五、主要仪器设备：

电视机、放像机、可调微量加样器等。

六、实验中注意事项：

1．观看电教片时，注意记录电教中的要点。

2．认真观察授课教师的示教内容。

3．遵守课堂纪律，熟悉实验室规则。

2．注意操作时试剂的加入顺序。

实验二血清蛋白质测定

一、类别：

设计性实验

二、实验目的和要求：

【掌握】

1．双缩脲法测定血清蛋白质含量的原理和方法。

2．溴甲酚绿法测定血清清蛋白的原理和方法。

3．醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质的原理、操作步骤、实验结果的分析及注意事项。

【熟悉】

1．双缩脲法测定血清蛋白质含量的注意事项及临床意义。

2．溴甲酚绿法测定血清清蛋白的注意事项及临床意义。

3．琼脂糖凝胶电泳法分离血清蛋白质的原理及操作步骤。

4．血清蛋白电泳的临床意义。

5．蛋白质测定的各种方法的原理及评价。

【了解】

1．血清中其它蛋白质的测定原理。

2．聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质的原理。

三、实验内容：

1．介绍双缩脲法测定血清总蛋白质含量的原理、操作方法及注意事项等内容。

2．介绍溴甲酚绿法测定血清清蛋白的原理、操作方法及注意事项等内容。

3．介绍蛋白质测定的各种方法的原理及评价。

4．介绍醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质的原理、操作步骤、实验结果的分析及注意事项。

5．介绍琼脂糖凝胶电泳法分离血清蛋白质的原理及操作步骤。

6．学生按操作步骤进行实验，并对结果进行分析。

四、学时：

8学时

五、主要仪器设备：

水浴箱、分光光度计、离心机、微量加样器及电泳仪、电泳槽等。

六、实验中注意事项：

（一）双缩脲法测定血清总蛋白质试验的注意事项：

1．黄疸血清、严重溶血；葡萄糖、酚酞及溴磺酞钠对测定血清总蛋白有明显干扰，需用标本空白管来消除。

2．高脂血症混浊血清会干扰双缩脲法测定血清总蛋白的比色，可采用下述方法消除：

取2支带塞试管或离心管，各加待测血清0.1ml，再加蒸馏水0.5ml和丙酮10ml，塞紧并颠倒混匀10次后离心，倾去上清液，将试管倒立于滤纸上吸去残余液体。

向沉淀中分别加入双缩脲试剂及双缩脲空白试剂，再进行与上述相同的其他操作和计算。

（二）溴甲酚绿法测定血清清蛋白试验的注意事项：

1．BCG是一种pH指示剂，变色域为pH3.8（显黄色）～5.4（显蓝绿色），因此控制反应液的pH是溴甲酚绿法测定血清清蛋白的关键。

2．配制BCG试剂也可用其他缓冲液如枸橼酸盐或乳酸盐缓冲液。

但以琥珀酸盐缓冲液的校正曲线通过原点，线性好，灵敏度高，成为首选推荐配方。

3．当60g/L的白蛋白标准液与BCG结合后，溶液光径1.0ml，在630nm处测定的吸光度应为0.811±0.035，如达不到此值，表示灵敏度较差。

（三）醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质试验的注意事项：

1．通电时，不得接触槽内缓冲液或CAM，以防触电。

2．CAM在电泳前，必须浸泡在巴比妥缓冲液中，使薄膜浸泡透彻。

3．缓冲液液面要保证一定高度，同时电泳槽两侧的液面应保持同一水平，否则通过薄膜时有虹吸现象，会影响蛋白质分子的泳动速度。

4．电泳常见的缓冲液为巴比妥缓冲液，用硼砂，Tris和EDTA组成的缓冲液可以分离出前白蛋白，三种-球蛋白，三种β-球蛋白和γ-球蛋白。

5．电泳后区带应无拖尾，各区带明显分开，如果电泳图谱分离不清或不整齐，最常见的原因有：

①点样过多；②点样不均匀、不整齐，样品触及薄膜边缘；③薄膜过湿，样品扩散；④薄膜未完全浸透或温度过高导致局部干燥或水分蒸发；⑤薄膜与滤纸桥接触不良；⑥薄膜位置歪斜、弯曲，与电流方向不平行；⑦缓冲液变质；⑧样品不新鲜；⑨CAM质量不高等。

6．染料问题染料的选择应对蛋白质的各组分亲和力相同，吸光度与蛋白质的浓度成正比。

并要求水溶性好、染料稳定、吸光度敏感，形成的染料蛋白质复合物稳定且易洗脱比色。

现在常用丽春红S、氨基黑10B和尼基黑作为染料，其中尼基黑对蛋白质吸光度比氨基黑10B敏感3倍以上。

用光密度计扫描定量一般用丽春红S染色，比色法定量既可用丽春红S也可用氨基黑10B染色。

在血清蛋白正常浓度范围内，丽春红S能与各蛋白质组分成正比例结合而氨基黑10B却对白蛋白染色过深，导致白蛋白结果偏高，球蛋白偏低。

实验三血糖测定、半自动生化分析仪的使用

一、类别：

验证性实验

二、实验目的和要求：

【掌握】GOD-POD法测定血糖的原理、方法、操作方法、及注意事项。

【熟悉】

1．血糖测定的临床意义。

2．己糖激酶法测定血糖的原理和方法。

3．半自动生化分析仪如何进行血糖浓度的测定。

【了解】邻甲苯胺法测定血糖的原理。

三、实验内容：

1．介绍GOD-POD法测定血糖的原理、注意事项及临床意义。

2．介绍己糖激酶法测定血糖的原理和方法。

3．讲授半自动生化分析仪的操作方法及如何进行血糖浓度的测定。

4．学生按操作步骤进行实验，并对结果进行分析。

四、学时：

4学时

五、主要仪器设备：

水浴箱、分光光度计、离心机、BT-224型半自动生化分析仪等。

六、实验中注意事项：

1．葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为α型，64%为β型。

葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。

国外某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完成自发变旋过程。

新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上（最好过夜），待变旋平衡后方可应用。

2．葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。

因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。

3．测定标本以草酸钾－氟化钠为抗凝剂的血浆较好。

取草酸钾6g，氟化钠4g。

加水溶解至100ml。

吸取0.1ml到试管内，在80℃以下烤干使用，可使2～3ml血液在3～4天内不凝固并抑制糖分解。

实验四血清总胆固醇和血清甘油三酯测定

一、类别：

验证性实验

二、实验目的和要求：

【掌握】

1．磷酸甘油氧化酶法测定甘油三酯的原理。

2．胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇的原理。

【熟悉】

1．乙酰丙酮显色法测定甘油三酯的原理、操作方法、注意事项及临床意义。

2．邻苯二甲醛法测定总胆固醇的原理、操作方法、注意事项及临床意义。

3．测定甘油三酯和总胆固醇的临床意义。

【了解】胆固醇和甘油三酯的测定发展史及方法学进展。

三、实验内容：

1．介绍胆固醇和甘油三酯的测定发展史。

2．介绍乙酰丙酮法测定甘油三酯的原理、操作方法、注意事项及临床意义。

3．介绍磷酸甘油氧化酶法测定甘油三酯的原理。

4．介绍胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇的原理。

5．介绍邻苯二甲醛法测定总胆固醇的原理、操作方法、注意事项及临床意义。

6.学生按操作步骤进行实验，并对结果进行分析。

四、学时：

4学时

五、主要仪器设备：

水浴箱、分光光度计、微量加样器、BT-224型半自动生化分析仪等。

六、实验中注意事项：

（一）乙酰丙酮法测定甘油三酯实验的注意事项：

1．血清TG易受饮食的影响，在进食脂肪后可以观察到血清中甘油三酯明显上升，2～4h内即可出现血清混浊，8h以后接近空腹水平。

因此，要求空腹12h后再进行采血，并要求72h内不饮酒，否则会使检测结果偏高。

2．显色后吸光度随时间延长会有一定量的增高，故加样后要立即比色，当标本过多时，可置冰箱中逐管进行比色。

3．本方法所用试剂较稳定，室温下可保存半年，分装使用可避免因试剂污染而引起的空白值升高。

4．皂化、氧化及显色的时间和温度对吸光度均会有影响，所以每测定一批都应该同时做标准对照。

5．TG在12.93mmol/L以下时，线性关系良好，当血清明显混浊时，可用生理盐水作倍比稀释后再测。

6．以血浆作标本时，还应注意抗凝剂的影响，通常使用EDTAK2（1mg/ml）作抗凝剂。

（二）邻苯二甲醛法测定总胆固醇实验的注意事项：

1．注意浓硫酸试剂使用的注意事项。

2．注意加入浓硫酸后要在旋涡混匀器上振荡至少1分钟或采取冲洗混匀的方式。

3．显色液稳定时间为半小时。

实验五血清钠、钾、氯的测定

一、类别：

综合性实验

二、实验目的和要求：

【掌握】

1．离子选择电极法测定血清钠、钾、氯的原理、方法及注意事项。

2．硫氰酸汞比色法测定血清氯的原理、方法及注意事项。

【熟悉】

1．火焰光度法测定钠、钾的原理和方法。

2．血清钠、钾、氯测定的临床意义。

3．血气分析仪的使用。

【了解】电解质分析仪的维护与保养。

三、实验内容：

1．介绍火焰光度法测定钠、钾的原理、方法及注意事项。

2．介绍离子选择电极法测定血清钠、钾、氯的原理、方法及注意事项。

3．硫氰酸汞比色法测定血清氯的原理、方法及注意事项。

4．观看电教（火焰光度计、离子选择电极及血气分析仪的使用）。

5．进行IMS-972型电解质分析仪使用方法、授课教师示教及学生上机操作练习。

6．学生按操作步骤进行实验，并对结果进行分析。

四、学时：

8学时

五、主要仪器设备：

水浴箱、分光光度计、离心机、电视机、放像机、IMS-972型电解质分析仪等。

六、实验中注意事项：

（一）电解质分析仪的使用注意事项：

1．ISE分析仪钠电极多采用硅酸铝玻璃电极膜制成，使用期较长。

钾电极多采用缬氨霉素膜制成，有规定的寿命，需定期更换。

2．每个工作日后，必须清洗电极和管道，以防蛋白质沉积。

定期用含有蛋白水解酶的去蛋白液浸泡管道。

并按厂家规定的程序对仪器进行定期的维护保养。

3．作尿样检测时，应离心尿样、以去除细胞、晶体等；同时稀释尿样，将一份尿样用9份尿样稀释液稀释、不得分析未经稀释的尿样。

4．在ISE使用中发现的误差有两类，其一是由于离子选择性电极薄膜的蛋白质漂浮，或由于薄膜的污染而改变了电极选择性离子反应性，造成各种误差；其二是“溶剂排斥效应”引入误差，与样品中脂类和蛋白质占据体积有关。

5．测定用玻璃器皿必须用去离子水冲洗干净，不得有离子污染。

6．溶血或延迟分离血清可使血清钾浓度升高，应及时分离血清，置于有塞试管内冰箱保存。

若遇到标本溶血，应在报告单上注明，以避免医生误解。

（二）火焰光度法测定钠、钾的注意事项：

1．血清稀释必须准确，若遇血清标本结果异常偏低时，必须反复测定和核对。

2．火焰光度计的各管道应保持通畅，不得有堵塞，燃料气压及助燃气压应保持恒定，并有一定比例，应防止室内空气流动造成的火焰摆动。

3．所用燃料为易燃物，有一定的危险性，应注意安全。

（三）硫氰酸汞比色法测定血清氯的注意事项：

1．本法对氯离子并非特异，其它一些卤族元素如F－、Br－、I－与之起同样呈色反应。

但在正常人血液中，上述元素含量较低，故可忽略不计。

若接受大量含上述离子药物治疗时，可使血清中氯测定结果偏高。

2．显色液的呈色强度与硫氰酸汞和硝酸汞的含量有关。

如呈色过强，线性范围在125mmol/L以下，要增加硝酸汞的用量。

呈色太弱，要增加硫氰酸汞的用量，使用前二者要进行调整，使其色泽在460nm波长，10mm光径比色杯测定，吸光度值在0.4左右为宜。

3．本法校正曲线不通过零点，但汞离子调控适当，则氯离子在70～140mmol/L范围线性良好（此范围可满足临床需要）。

4．本法呈色温度应不低于20℃，室温过低易产生混浊，影响比色。

实验六血清钙磷测定

一、类别：

验证性实验

二、实验目的和要求：

【掌握】

1.甲基百里香酚蓝法测定血清总钙的原理、操作及注意事项。

2．离子选择电极法测定钙离子的原理。

3．邻苯二胺比色法测定血清磷的原理原理、方法及注意事项。

【熟悉】

1．偶氮胂Ⅲ比色法测定血清总钙的原理。

2．孔雀绿直接比色法测血清磷的原理。

3．血清钙磷测定的临床意义。

【了解】其他测定血清钙磷的方法。

三、实验内容：

1.介绍甲基百里香酚蓝法测定血清总钙的原理、操作及注意事项。

2．介绍离子选择电极法测定钙离子的原理。

3．介绍邻苯二胺比色法测定血清磷的原理、方法及注意事项。

4．介绍孔雀绿直接比色法测血清磷的原理。

5．学生按操作步骤进行实验，并对结果进行分析。

四、学时：

4学时

五、主要仪器设备：

水浴箱、分光光度计、离心机、IMS-972型电解质分析仪等。

六、实验中注意事项：

（一）甲基百里香酚蓝法测定血清总钙的注意事项：

1．MTB是一种优良的金属络合剂，也是酸碱指示剂。

其水溶液在pH6.5～8.5为浅蓝色，在10.5～11.6为灰色，在12.7以上为深蓝色。

为保证测定的精密准确，必须在强碱性环境进行显色反应（通常是用12±0.3）。

2．MTB溶液在pH＜4.0的酸性溶液中稳定，而在碱性条件下不稳定，容易在空气中逐渐氧化褪色，故显色剂宜新鲜配制。

3．所用的玻璃器材必须严格清洗，以防止微量钙和其它金属离子的污染。

4．EGTA能螯合钙，消除钙质与MTB的显色反应，用作消除干扰实验。

5．标本不能溶血。

6．高脂血症时，亦可在测定管中加消色剂0.02ml。

（二）邻苯二胺比色法测定血清磷的注意事项：

1．预保温阶段可消除内源性的次黄嘌呤和黄嘌呤的干扰。

2．标本应避免溶血，因红细胞中含有高浓度的有机磷酸酯，在贮存期间易水解生成无机磷。

溶血标本贮存在4℃，无机磷平均每天增加4～5mg，并且在室温或37℃下水解更快。

3．血清中磷是稳定的，4℃可稳定数天，冷冻时可过数月。

避免水汽蒸发。

实验七血清尿素、肌酐测定

一、类别：

验证性实验

二、实验目的和要求：

【掌握】

1.二乙酰一肟法测定血清尿素的原理、操作及注意事项

2.碱性苦味酸法测定肌酐的原理、操作及注意事项。

【熟悉】

1.脲酶法测定尿素的原理及注意事项。

2.酶法测定肌酐的原理。

3.血清尿素、肌酐测定的临床意义。

【了解】其他测定血清尿素、肌酐的方法。

三、实验内容：

1．介绍二乙酰一肟法测定血清尿素的原理、操作及注意事项。

2．介绍脲酶法测定尿素的原理。

3．介绍碱性苦味酸法测定肌酐的原理、操作及注意事项。

4．介绍酶法测定肌酐的原理。

5．学生按操作步骤进行实验，并对结果进行分析。

四、学时：

4学时

五、主要仪器设备：

水浴箱、分光光度计、离心机及BT-224型半自动生化分析仪等等。

六、实验中注意事项：

（一）二乙酰一肟法测定血清尿素的注意事项：

1．试剂中加入氨基硫脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象，（每小时小于5%）。

煮沸显色经冷却后，应及时比色。

2．尿液中尿素也可用此法测定，但因浓度高，需先用去离子水作50倍以上稀释。

3．本法试剂单一，方法简便，但试剂具毒性和腐蚀性。

4．线性上限仅达7.14mmol/L；回收率为96%～102.1%。

（二）碱性苦味酸法测定肌酐的注意事项：

1．反应温度以15～25℃为宜，10℃以下，会抑制Jaffe反应。

温度升高，可使碱性苦味酸溶液显色增深，但测定管较标准管更为明显。

2．呈色后标准管色泽较稳定，但测定管吸光度随时间延长而增加，可能与血标本中存在的非特异性物质有关，故在加显色剂后30min内比色为宜。

3．苦味酸一定要纯，否则需纯化。

若含有杂质，则使试剂空白吸光度增加而影响测定结果。

实验八ALT测定及其标准曲线绘制

一、类别：

验证性实验

二、实验目的和要求：

【掌握】

1．改良赖氏法测血清ALT原理、操作及注意事项。

2．ALT校正曲线的绘制方法与注意事项。

3．连续监测法测血清ALT原理。

【熟悉】

1．血清ALT测定的临床意义。

2．ALT测定的方法学比较。

【了解】其他测定血清ALT的方法。

三、实验内容：

1．介绍改良赖氏法测血清ALT原理、操作及注意事项。

2．ALT校正曲线的绘制要点及注意事项。

3．介绍连续监测法测血清ALT原理。

4．学生按操作步骤进行实验，并对结果进行分析。

四、学时：

4学时

五、主要仪器设备：

水浴箱、分光光度计、离心机及BT-224型半自动生化分析仪等等。

六、实验中注意事项：

1．丙酮酸标准液的配制丙酮酸不稳定，见空气易发生聚合反应，生成多聚丙酮酸，而失去其化学性质。

在配制标准曲线时，不会出现显色反应。

此时应将变性的丙酮酸放在干燥箱（40～55℃）2～3h，或干燥器中过夜后在使用。

2．基质液中的α-酮戊二酸和显色剂2，4-二硝基苯肼均为呈色物质，称量必须很准确，每批试剂的空白管吸光度上下波动不应超过0.015A，如超出此范围，应检查试剂及仪器等方面问题。

3．加入2，4-二硝基苯肼溶液后，应充分混匀，使反应完全。

实验九LD总酶及其同工酶的测定

一、类别：

设计性实验

二、实验目的和要求：

【掌握】

1．比色法测LD总酶活性原理、操作及注意事项。

2．连续监测法测血清LD总酶活性原理。

3．CAM电泳法分离血清LD同工酶原理、操作及注意事项。

4．用酶促反应液进行显色的原理与操作。

【熟悉】

1．比色法测LD总酶活性校正曲线绘制。

2．琼脂糖电泳法分离血清LD同工酶原理、操作及注意事项。

3．血清LD总酶及其同工酶的测定的临床意义。

4．标本的储存方法。

【了解】其他测定血清LD总酶及其同工酶的方法。

三、实验内容：

1．介绍比色法测定血清LD总酶活性的原理、操作及注意事项。

2．介绍连续监测法测血清LD总酶活性原理。

3．介绍CAM电泳法分离血清LD同工酶原理、操作及注意事项。

4．介绍用酶促反应液进行显色的原理与操作。

5．琼脂糖电泳法分离血清LD同工酶原理、操作及注意事项。

6.学生按操作步骤进行实验，并对结果进行分析。

四、学时：

8学时

五、主要仪器设备：

水浴箱、分光光度计、离心机、BT-224型半自动生化分析仪、电泳仪、电泳槽等。

六、实验中注意事项：

（一）比色法测定血清LD总酶的注意事项：

1．不同的LD同工酶对温度的敏感性是不同的，组织提取液若放于－20℃过夜，LD4和LD5会丧失全部的活性。

血清标本应存放于室温下，一般2～3d不会出现活性的丢失。

如果血清标本需要存放较长时间，应加入10mg/ml的NAD+或3.1mg/ml的谷胱甘肽后于4℃保存。

2．LD活性测定也可用抗凝血浆，但不同抗凝剂对LD测定的影响不同：

草酸盐抗凝剂、EDTA能抑制LD活性，而肝素的影响不大。

3．由于红细胞、血小板中含有大量的LDH，故严禁使用溶血标本。

在采用血浆作为标本时必须用3000r/min离心15min以除去血小板。

4．LD活性能被巯基试剂所抑制，硼酸、丙二酸、草酸、以及EDTA都是竞争性抑制剂。

（二）CAM电泳法分离血清LD同工酶的注意事项：

1．红细胞中LD1与LD2活性很高，因此标本严禁溶血。

2．LD4与LD5（尤其是LD5）对热很敏感，因此底物-显色液的温度不能超过50℃，否则易变性失活。

3．LD4和LD5对冷不稳定，容易失活，应采用新鲜标本测定。

如果需要，血清应放置于25℃条件下保存，一般可保存2～3d。

4．PMS对光敏感，故底物-显色液需避光，否则显色后凝胶板背景颜色较深。

实验十ALP、AMY测定

一、类别：

验证性实验

二、实验目的和要求：

【掌握】

1．磷酸苯二钠比色法测定血清碱性磷酸酶的原理、操作及注意事项。

2．用碘-淀粉比色法测血清AMY的原理、操作及注意事项。

3．连续监测法测定淀粉酶的原理。

4．连续监测法测定ALP的原理。

【熟悉】血清ALP、AMY测定的临床意义。

【了解】其他测定血清ALP、AMY的方法。

三、实验内容：

1．介绍磷酸苯二钠比色法测定血清碱性磷酸酶的原理、操作及注意事项。

2．介绍连续监测法测定ALP的原理。

3．介绍用碘-淀粉比色法测血清AMY的原理、操作及注意事项。

4．介绍连续监测法测定淀粉酶的原理。

5．学生按操作步骤进行实验，并对结果进行分析。

四、学时：

4学时

五、主要仪器设备：

水浴箱、分光光度计、离心机、BT-224型半自动生化分析仪等。

六、实验中注意事项：

（一）磷酸苯二钠比色法测定血清碱性磷酸酶的注意事项：

1．底物溶液中不应含有游离酚，如有酚则空白管显红色，说明磷酸苯二钠已经开始分解，应弃去不用。

2．铁氰化钾溶液中加入硼酸有稳定显色作用。

该液应避光保存，如出现蓝绿色即应废弃。

3．加入铁氰化钾溶液后必须立即混匀，否则显色不完全。

4．黄疸血清及溶血血清应分别作对照管，一般血清标本可以共用对照管。

（二）碘-淀粉比色法测血清AMY的注意事项：

1．酶活性在400U以下时，与底物的水解量成线性。

如测定管吸光度小于空白管吸光度一半时，应加大血清稀释倍数或减少稀释血清加入量，测定结果乘上稀释倍数。

2．草酸盐、枸橼酸盐、EDTA-Na2及氟化钠对AMY活性有抑制作用，肝素无抑制作用。

3．唾液含高浓度淀粉酶，须防止带入。

4．淀粉产品不同，其空白吸光度可有明显差异，一般空白吸光度应在0.40以上。

5．缓冲淀粉溶液若出现混浊或絮状物，表示缓冲淀粉溶液受污染或变质，不能再用，应重新配制。

6．本法亦适用于其他体液淀粉酶的测定。

尿液先作20倍稀释后测定。

实验十一尿酸测定、r-GT测定

一、类别：

验证性实验

二、实验目的和要求：

【掌握】

1．磷钨酸还原法测血清尿酸的原理、操作及注意事项。

2．尿酸酶－过氧化物酶偶联法测定血清尿酸原理。

3．连续监测法测定血清r-GT原理、操作及注意事项。

【熟悉】

1．重氮反应比色法测血清r-GT原理、操作及注意事项。

2．血清尿酸测定、r-GT测定的临床