实验室常用缓冲液配置方法.docx

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实验室常用缓冲液配置方法

实验室常用缓冲液配置方法

1）1MTris-HCl（pH7.4,7.6,8.0）

组份浓度：

1MTris-HCl

配制量：

1L

配制方法：

1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

PH值

浓HCl

7.4

约70ml

7.6

约60ml

8.0

约42ml

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2）10×TEBuffer（pH7.4,7.6,8.0）

组份浓度：

100mMTris-HCl,10mMEDTA

配制量：

1L

配制方法：

1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTris－HClBuffer（PH7.4，7.6，8.0）

100ml

500mMEDTA（PH8.0）

20ml

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合。

3.将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。

4.室温保存。

3）1.5MTris-HCl（pH8.8）

组份浓度：

1.5MTris-HCl

配制量：

1L

配制方法：

1.称量181.7gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.用浓盐酸调节pH值至8.8。

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

4）3M醋酸钠（pH5.2）

组份浓度：

3M醋酸钠

配制量：

100ml

配制方法：

1.称量40.8gNaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解

2.加入冰醋酸调节pH值至5.2

3.加去离子水将溶液定容至100ml

4高温高压灭菌后，室温保存。

5）PBSBuffer

组份浓度：

137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4

配制量：

1L

配制方法：

1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

NaCl

8g

KCl

0.2g

Na2HPO4

1.42g

KH2PO4

0.27g

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。

6）10M醋酸铵

组份浓度：

10M醋酸铵

配制量：

100ml

配制方法：

1.称量77.1g醋酸铵置于100～200ml烧杯中，加入约30ml的去离子水搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100ml。

3.使用0.22mm滤膜过滤除菌。

4.密封瓶口于室温保存。

注意：

醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7）苯酚/氯仿/异戊醇（25:

24:

1）

配制方法：

1.说明：

从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25:

24:

1）。

氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2.配制方法：

将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24:

1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

8）10％（W/V）SDS

组份浓度：

10％（W/V）SDS

配制量：

100ml

配制方法：

1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加入溶解

2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2

3.将溶液定容至100ml后，室温保存。

9）2NNaOH

组份浓度：

2NNaOH

配制量：

100ml

配制方法：

1.量取80ml去离子水置于100～200ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。

2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100ml。

4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

10）2.5NHCl

组份浓度：

2.5NHCl

配制量：

100ml

配制方法：

1.在78.4ml的去离子水中加入21.6ml的浓盐酸（11.6N），均匀混合。

2.室温保存。

11）5MNaCl

组份浓度：

5MNaCl

配制量：

1L

配制方法：

1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800ml的去离子水后搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

11）20％（W/V）Glucose

组份浓度：

20％（W/V）Glucose

配制量：

100ml

配制方法：

1.称取20gGlucose置于100～200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水后，搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100ml。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

12）SolutionI（质粒提取用）

组份浓度：

25mMTris-HCl（pH8.0）,10mMEDTA,50mMGlucose

配制量：

1L

配制方法：

1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTris-HCl（PH8.0）

25ml

0.5MEDTA（PH8.0）

20ml

20％Glucose（1.11M）

45ml

dH2O

910ml

2.高温高压灭菌后，4℃保存。

3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA（20mg/ml）。

13）SolutionII（质粒提取用）

组份浓度：

200mMNaOH，1％（W/V）SDS

配制量：

500ml

配制方法：

1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中

10％SDS50ml

2NNaOH50ml

2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀

3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月

注意：

SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌

14）SolutionIII（质粒提取用）

组份浓度：

3MKOAc,5MCH3COOH

配制量：

500ml

配制方法：

1.称量下列试剂，置于500ml烧杯中。

KOAc                 

147g 

CH3COOH

57.5ml

2.加入300ml去离子水后搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至500ml。

4.高温高压灭菌后，4℃保存。

15）0.5MEDTA（pH8.0）

组份浓度：

0.5MEDTA

配制量：

1L

配制方法：

称取186.1gNa2EDTA·2H2O，置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌。

3.用NaOH调节pH值至8.0（约20gNaOH）。

注意：

pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

4.加去离子水将溶液定容至1L。

5.适量分成小份后，高温高压灭菌。

6.室温保存。

16）1MDTT

组份浓度：

1MDTT

配制量：

20ml

配制方法：

1.称取3.09gDTT，加入到50ml塑料离心管内。

2.加20ml的0.01MNaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22mm滤器过滤除菌。

3.适量分成小份后，-20℃保存。

17）10mMATP

组份浓度：

10mMATP

配制量：

20ml

配制方法：

1.称取121mgNa2ATP·3H2O，加入到50ml塑料离心管内。

2.加20ml的25mMTris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。

3.适量分成小份后，-20℃保存。

一.常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺（Spermidine）:

溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：

溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）：

将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白（BSA）：

加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，

须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：

在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg的二硫苏糖醇

至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：

溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：

溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：

溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/LEDTA:

配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/LHEPES：

将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/LHCl：

加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/mlIPGT：

溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2:

溶解20.3gMgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。

100mmol/LPMSF：

溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。

分成小份并用铝箔将装液管包裹

或贮存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）：

将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－freeRNase）：

溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH5.0）。

溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。

用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。

（配制过程中要戴手套）

5mol/L氯化钠（NaCl）：

溶解29.2g氯化钠