蚕蛹蛋白多肽保健功效的研究.docx

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蚕蛹蛋白多肽保健功效的研究

摘要

实验研究蚕蛹蛋白多肽的保健功效，包括抗疲劳作用和免疫调节作用两个部分。

抗疲劳实验将蚕蛹蛋白多肽分为高、中、低剂量组，分别为2.4、1.2、0.6g/kg·d喂饲小鼠28d，观察小鼠爬杆时间、负重游泳时间，测定血清尿素氮、肝糖原和肌糖原含量，测定游泳前、游泳后0、15、60min血清乳酸含量的变化。

实验结果表明蚕蛹蛋白多肽能显著增加小鼠爬杆时间和负重游泳时间，增加小鼠运动过程中肝糖原和肌糖原含量，较少血清尿素氮的含量，并能显著降低游泳后血清乳酸的增加量；免疫调节实验也将蚕蛹蛋白多肽分为高、中、低剂量组，分别为5.0、2.6、0.5g/kg·d喂饲小鼠40d，观察小鼠免疫器官指数变化、迟发型变态反应（DTH）、抗体生成细胞数和碳廓清能力等四个实验项目。

实验结果表明与阴性对照组比较，蚕蛹蛋白多肽能显著增加小鼠胸腺指数，增加小鼠足跖肿胀度，增加小鼠抗体细胞生成数量，增加单核－巨噬细胞吞噬能力。

实验得到如下结论：

蚕蛹蛋白多肽具有明显的抗疲劳作用和免疫调节作用。

关键词：

蚕蛹蛋白；多肽；抗疲劳；免疫调节

Abstract

Theexperimentalstudyonhealthfunctionofsilkwormpupaproteinpeptides,includinganti-fatigueeffectandimmuneregulationeffectsoftwoparts.Silkwormpupaproteinpolypeptideanti-fatigueisdividedintohigh,medium,andlowdosegroups,respectively,2.4,1.2,0.6g/kg·dmicefed28D,observationofclimbingtime,loadedswimmingtimeinmice,determinationofureanitrogen,serumliverglycogen,andmuscleglycogencontent,determinationofswimming,swimbackbeforechangesofserumlacticacidcontentof0,15g.ExperimentalresultsindicatesthatsilkwormpupaproteinmorepeptidecansignificantlyincreasedsmallratsclimbingRodtimeandloadingswimmingtime,increasedsmallratsmovementprocessintheliverglycogenoriginalandmuscleglycogencontent,lessserumureanitrogenofcontent,andcansignificantlyreduceswimmingHouserumlacticacidofincreasedvolume;immuneregulationexperimentalalsowillsilkwormpupaproteinmorepeptideisdividedintohigh,andinthe,andlowdosegroup,respectivelyfor5,and2.6,and0.5G/kg·dfeedfeedingsmallrats40D,observationsmallratsimmuneorganindexchanges,andlatehairallergy（DTH）,andantibodygeneratedcellnumberandcarbonclearanceability,fouraexperimentalproject.Experimentalresultsshowthatcomparedwiththenegativecontrolgroup,SilkWormpupaproteinorpeptidecansignificantlyincreasethemousethymusindex,increasemousePlantarfootswelling,increasethenumberofantibodiesinmicecells,increasethephagocytosisofmononuclear-macrophage.Experimentalcometothefollowingconclusion:

silkwormpupaproteinpolypeptidehasobviousanti-fatigueeffectandimmuneregulationeffects.

Keywords:

silkwormpupaprotein;peptide;anti-fatigue;immuneregulation

目录

摘要I

AbstractII

1.概述1

2.材料与方法2

2.1材料、试剂与仪器2

2.2蚕蛹蛋白多肽的制备2

2.3实验动物及分组2

2.4实验方法[8]3

2.4.1负重游泳实验3

2.4.2爬杆实验3

2.4.3血尿素的测定3

2.4.4血乳酸的测定3

2.4.5肝糖原的测定4

2.4.6肌糖原的测定4

2.4.7小鼠免疫器官指数的测定5

2.4.8迟发型变态反应[足跖增厚法（DTH）]5

2.4.9抗体生成细胞数检测（Jerne改良玻片法）5

2.4.10小鼠碳廓清实验6

2.5统计分析6

3.结果与分析6

3.1蚕蛹蛋白多肽对小鼠游泳时间、爬杆时间的影响6

3.2蚕蛹蛋白多肽对小鼠血清尿素氮、肝糖原和肌糖原含量的影响7

3.3蚕蛹蛋白多肽对小鼠血乳酸的影响8

3.4蚕蛹蛋白多肽对小鼠免疫器官指数的影响9

3.5蚕蛹蛋白多肽对小鼠迟发型变态反应（DTH）的影响.9

3.6蚕蛹蛋白多肽对小鼠抗体生成细胞数的影响10

3.7蚕蛹蛋白多肽对小鼠碳廓清能力的影响10

4.结论11

参考文献：

12

1.概述

我国是养蚕大国，蚕蛹资源十分丰富，而且蚕蛹具有较高的营养价值。

据报道，鲜蛹中含蛋白质14%～15%，干蛹中含蛋白质45%～50%，含有18种氨基酸，配比均衡，且人体必需氨基酸含量丰富，其生物效价与酪蛋白和大豆蛋白相当[1-4]，具有补充机体营养、促进生长发育、抗疲劳、抗衰老、提高人体免疫力等多种功能[5-6]，是一种优质蛋白质资源。

蚕蛹蛋白水解后形成的多肽及氨基酸具有多种生理功能，多肽特别是小分子寡肽的吸收速度比游离氨基酸更快[7]。

本实验采用一种电磁裂解装置制备蚕蛹蛋白多肽，研究其抗疲劳作用及免疫调节作用。

2.材料与方法

2.1材料、试剂与仪器

蚕蛹市售；昆明种小鼠，6～8周龄，♀♂各半，体重18～22g，由吉林大学实验动物中心提供。

全血乳酸测定试剂盒、（二乙酰一肟法）、璃游泳缸（80cm×80cm×70cm）、玻璃杆（Φ25cm×0.8cm）、铅丝、752型分光光度计、ECA-2000B型半自动生化分析仪、超速离心机、水浴锅、温度计、秒表、电子秤、卡尺（精密度0.02mm）、绵羊红细胞（SRBC）、微量注射（50μL）、二氧化碳培养箱、恒温水浴、离心机、手术器械、玻片架、200目筛网、SRBC、补体（豚鼠血清）、Hank’s液、SA缓冲液、琼脂糖、722分光光度计、血色素吸管、印度墨汁、Na2CO3等。

2.2蚕蛹蛋白多肽的制备

蚕蛹蛋白多肽电磁裂解装置其工作原理是当物料进入裂解仓后，由高频交变电磁场的作用下，物料升温，物料中分子在交变电磁场影响下，不断扭转、拉伸，使其分子断裂，物料中的水分被加热成水蒸气后由冷凝器降温，收集的冷凝水中含有多种小肽成分。

收集到的冷凝水即为蚕蛹蛋白多肽液。

2.3实验动物及分组

将小鼠随机分为4组，每组72只，组间体重经检验无显著差异。

对照组、低剂量、中剂量组和高剂量组，饲养受试物量分别对应为：

0、0.6、1.2和2.4g/kg的蚕蛹蛋白多肽，对照组给同体积的蒸馏水。

每10g体重给予受试物0.2ml。

采取灌胃法，连续饲喂28d后，测定各指标。

将小鼠随机分为4个组，即即3个实验组和1个对照组，每组48只小鼠，组间体重经检验无显著差异。

对照组、低剂量、中剂量组和高剂量组，饲养受试物量分别对应为：

0、0.5、2.6、5.0g/kgBW（分别相当于人体推荐用量的30、10倍和3倍），同时设一个阴性对照组（给予蒸馏水）。

采用经口给予蚕蛹蛋白多肽，按0.2ml/10gBW的容量灌胃。

2.4实验方法[8]

2.4.1负重游泳实验

末次给予受试物30min后，给小鼠负体重5%重量，将小鼠放于水深不少于30cm，水温25±1℃的游泳箱中。

记录自游泳开始至头部全部沉入水中8s不能浮出水面的时间作为小鼠游泳时间。

2.4.2爬杆实验

末次给予受试物30min后，将小鼠放在爬杆架的有机玻璃棒上，使其肌肉处于紧张状态，记录小鼠由于肌肉疲劳从有机玻璃上跌落下来的时间。

第三次跌落时终止实验，累计三次的时间作为爬杆时间。

2.4.3血尿素的测定

末次给予受试物30min后，将小鼠放于水温25±1℃的游泳箱中游泳90min，息60min后摘眼球取血，取血清用试剂盒（二乙酰一肟法）测定，按试剂盒说明书进行操作。

2.4.4血乳酸的测定

末次给予受试物30min后，剪尾进行第一次取血，处理好伤口后不负重，放于水温30±1℃的水中游泳10min停止，剪尾进行第二次取血，安静15min后剪尾进行第三次取血，安静60min后剪尾进行第四次取血，每次取血0.1ml，分别按试剂盒要求测定血清乳酸含量。

2.4.5肝糖原的测定

末次给予受试物30min后，将小鼠放于水温30±1℃的水中游泳60min后停止，立即处死小鼠取出肝脏，精确称取200mg，加入三氯乙酸（TCA）4ml，每管匀浆1min，3000r/min离心15min，取上清液转移至另一试管内。

在沉淀中加入TCA4ml。

匀浆1min，再次离心15min，取上清液，与第一次离心的上清液合并，充分混匀。

取1ml上清液，每管加入95%的乙醇4ml,充分混匀至两种液体间不留有界面。

室温放置过夜。

沉淀完全后将试管于3000r/min离心15min。

小心倒掉上清液并使试管放置10min，用2ml蒸馏水振荡溶解并转移至10ml比色管中，同时在标准管中加入2ml蒸馏水，将各管置于冰水浴中，加入10ml蒽酮试剂，混匀，冷却至室温后，将各管置于沸水浴中煮沸15min，立即移至冰水浴，冷却至室温，混匀，在620nm波长下，用空白管调零，比色测定吸光度。

每100g肝组织中糖原的毫克数＝（A1/A2）×0.5×（8/W）×100×0.9

式中，A1和A2分别为试样管和标准管吸光度、W为所取的肝组织重量（g）；0.5是0.5ml葡萄糖标准液中的葡萄糖含量、8为100mg肝组织的提取液体积、0.9为将葡萄糖换算成糖原的系数。

2.4.6肌糖原的测定

末次给予受试物30min后，将小鼠放于水温30±1℃的水中游泳60min后停止，立即处死小鼠取出肌肉，以0.9％NaCl溶液冲洗后，用滤纸吸干，准确称取肌肉1g，放入盛有3ml30％KOH的试管中，置沸水