海洋鱼低聚肽美国专利译文.docx
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海洋鱼低聚肽美国专利译文
海洋鱼低聚肽美国专利译文
（12）美国专利（10）专利号:
USA6,855,727B2
（45）专利申请日期:
Feb.15,2005
（54）控制肌肉疲劳的综合疗法和提供肌肉的方法FOREIGNPATENTDOCUMENTS
疲劳控制效果
（75）发明人:
YoshiharuMatahira,Shimada（JP）;KazuakiKikuchi,Hujieda（JP）
（73）受让人:
YaizuSuisankagakuIndustryCo.,Ltd.,Yaizu（JP）
（*）注:
除任何免责声明外，本专利的期限将根据《美国法典》第35U.S.C.154（b）的规定，本专利的期限可延长或调整0天。
（21）申请编号:
09/933,438
（22）申请日期:
Aug.20,2001
（65）之前发布数据：
US2002/0103244AlAug1,2002
ForeignApplicationPriorityData
（30）国外优先申请数据
Dec.4,2000（JP）.....2000-368299
May.15,2001（JP）......2000-368299
（51）IntCL.7.............A01N43/50;A61K6/00;A61K47/00;A61K9/48;A61K9/20
（52）U.S.CL..............514/396;424/400;424/439;424/426;424/451;
536/1.11514/2;514/23;514/773;514/777
（58）搜索区...............424/400,439,
424/441,451,464,520,548,514/396,2,23,773,777;536/1.11
参考文献引用
美国专利文件
4,028,184A*6/1977Ishiyameetal.....435/92
5,391,550A*2/1995Carnigliaetal...514/23
5,397,786A*3/1995Simone........514/300
5,965,595A*10/1999Harrisetal.....514/400
6,159,942A*12/2000St.Cyretal......514/23
6,420,342B1*6/1977St.Cyretal.......514/23
（外国专利文件）
EP324227AL7/1989
EP0449787*2/1991
EP0652012*11/1993
EP0652012*5/1995
EP0710485AL5/1996
（下一页继续）
安大略省的出版物
BralleyJ.A.和IordR.S.“治疗慢性疲劳综合症需要特定的氨基酸供应吗?
”应用营养学杂志，第46卷，第3期，（1994），第74-78页。
“补充肌酸可提高正常受试者在休息和运动肌肉中的肌酸水平”，《临床科学》，83，页367-374，（1992）。
苏山等，“鲸中咪唑类化合物的色谱分析”，《日本科学渔业学会通报》，第33卷，第2期，第141-146页，（1967）。
主审查员~加里·昆兹
阿西比亚尼审查员shdirmih的Gollamudi
（74）律师，代理人，或者弗里斯豪夫，霍尔茨，古德曼Chick,RC.
（75）摘要
一种用于在运动中或运动后减少肌肉疲劳或类似症状的抗肌肉疲劳的药物组合物，包括从作为活性成分的鱼类、河鱼、家禽、肉或类似物的提取物中获得的咪唑化合物。
所述抗疲劳组合物中的咪唑化合物优选为从组氨酸、丝氨酸、肌肽、巴伦宁及其盐组成的组中选择的至少一个化合物。
该抗疲劳组合物优选地进一步含有d-核糖作为活性成分。
通过口服抗疲劳成分，可使运动中或运动后血浆中的乳酸含量保持在较低水平，从而控制运动引起的肌肉疲劳，提高运动能力。
20份索赔，7份图纸
游泳时间（秒）
依次排序：
对照组、葡萄糖组、果糖组、核糖组、鹅肌肽组、鹅肌肽、葡萄糖混合物组、鹅肌肽/果糖混合物组、鹅肌肽/核糖组合物组
差异有统计学意义（p<0.05）
与其他组相比
外国专利文件
EP873754Al10/1998
EP0894439Al2/1999
EP983726Al3/2000
EP58-165774A9/1983
EP59-21087111/1984
EP60-0940755/1985
EP61181357*8/1986
EP07-025838A1/1995
EP08-198748A8/1996
游泳时间（秒）
依次排序：
对照组、葡萄糖组、果糖组、核糖组、鹅肌肽组、鹅肌肽、葡萄糖混合物组、鹅肌肽/果糖混合物组、鹅肌肽/核糖组合物组
差异有统计学意义（p<0.05）与其他组相比
差异有统计学意义（p<0.01）与其他组相比
图1的原始数据：
每组测量小鼠（n=10）在水浴中游泳的时间。
通过普通学生的测试，计算出各组间差异数据分布中的t值。
所示组为对照组（第1组）、葡萄糖组（第2组）、果糖组（第3组）、核糖组（第4组）、鹅肌肽组（第5组）、鹅肌肽/葡萄糖组（第6组）、鹅肌肽/果糖组（第7组）和鹅肌肽/核糖组（第8组）。
根据系统方差估计，阴影框中大于3.499和2.365的t值分别等于p<0.01和p<0.05。
图1中所示的有关组之间差异的t值用粗体框表示。
图2的原始数据：
每组测量小鼠（n=10）游泳运动后血浆乳酸浓度。
通过一个普通学生的测试，计算出各组间差异数据分布中的t值。
所示组为对照组（第1组）、葡萄糖组（第2组）、果糖组（第3组）、核糖组（第4组）、鹅肌肽/葡萄糖组（第5组）、鹅肌肽/果糖（第7组）和鹅肌肽/核糖组（第8组）。
根据系统方差估计，阴影框中大于3.499和2.365的t值分别等于p<0.01和p<0.05。
图2所示的有关组之间差异的t值用粗体框表示
游泳时间（秒）
依次排序：
对照组、试验组、
游泳时间（秒）
依次排序：
对照组、试验组、
游泳时间（秒）
依次排序：
对照组、鹅肌肽组、核糖组、鹅肌肽/核糖组合物组
差异有统计学意义（p<0.05）与其他组相比
与所有其他组相比
游泳时间（秒）
依次排序：
对照组、鹅肌肽组、核糖组、鹅肌肽/核糖组合物组
差异有统计学意义（p<0.05）与其他组相比
差异有统计学意义（p<0.01）与其他组相比
肌肉疲劳控制
组成和方法
提供肌肉
疲劳控制失效
发明领域
本发明涉及一种可从鱼、贝类、家禽、肉等获得的咪唑化合物的抗疲劳成分。
发明背景
在剧烈运动中，利用肌肉中糖原产生的葡萄糖，进行厌氧糖酵解反应，合成肌肉收缩所需的ATP。
然后，乳酸作为代谢物被储存起来，肌肉内的pH值趋于降低，从而降低肌肉收缩的效率。
这种情况被称为代谢性酸中毒，人们认为这种情况会导致肌肉疲劳。
因此，为了通过持续运动来控制肌肉疲劳，引起代谢性酸中毒是非常重要的。
近年来，补充肌酸在运动员中很流行。
众所周知，肌酸在体内转化为磷酸肌酸，具有高能磷酸盐化合物的能量传递功能，而乳酸是合成AFF必不可少的成分，通过摄入肌酸，肌肉中的肌酸含量增加，极限运动或锻炼的表现将得到改善（Harris，R.C.ctal:
Clin。
《科学》杂志，83,367-374,1992年）。
此外，如果糖原作为一种能源变得不脆弱，体内脂肪很容易被利用，同时，血液中的氨基酸也被转化为能量。
因此，人们也试图尽可能地提高血液中的氨基酸浓度，利用它作为能量来源，改善肌肉疲劳和肌力下降。
特别是作为能量来源的可使用氨基酸是支链氨基酸（例如亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸）。
例如，JP-A-58-165774、JP-A-7-25838和JP-A-2000-26290披露了上述支链氨基酸作为食品的用途。
此外，JP-A-8-198748和JP-A-9-249556披露为改善运动功能，提高康复效果血液中氨基酸的含量是通过给予一种氨基酸成分来控制的，这种氨基酸成分是由一种维平黄蜂（黄蜂属）幼虫包围的唾液中的氨基酸组成的。
顺便说一句，从鱼、贝类、家禽、肉或类似物中获得的提取物含有多种氨基酸，通常被广泛用作调味品。
但对其生理活性的研究却很少。
发明概要：
因此，本发明的目的是提供一种功能性食品材料，其利用可从鱼类、贝类、家禽、肉等获得的提取物。
本发明者在研究从霍尼托鱼肉或金枪鱼肉制备的调味品提取物的生理活性的过程中，注意到该提取物中含有大量的咪唑化合物，并对其进行了广泛的研究，结果发现，所述咪唑类化合物具有改善运动性能的作用，即抗疲劳作用。
此外，他们还发现，通过将咪唑化合物与D-核糖结合使用，可以获得5种更优异的抗疲劳效果，并在此基础上完成了本发明。
即，本发明提供一种抗疲劳成分，其包含作为10种活性成分的咪唑化合物。
根据本发明，可以提供一种抗疲劳成分，通过使用鱼类、贝类、家禽、肉等获得的提取物并经口摄入，可以减少运动期间或之后的肌肉疲劳等
图纸的简要说明：
图1是显示小鼠游泳时间测量结果的图。
图2是表示小鼠第一次悬挂时间的测量结果的图。
图3是表示小鼠第二次悬挂时间的测量结果的图。
图4是表示运动负荷后一小时时小鼠血浆乳酸量的图。
图5是显示小鼠游泳时间测量结果的图。
图6是示出运动负荷后小鼠血浆中乳酸量的图。
首选的描述
实例：
在下文中，将参考优选实施例进一步详细描述本发明。
作为本发明抗疲劳活性成分咪唑化合物的具体实例，可提到组氨酸、鹅肌肽（p-丙氨酸-l-甲基组氨酸）、肌肽（p-丙氨酸组氨酸）、缬氨酸（p-丙氨酸-3-甲基组氨酸）等。
在本发明中，优选含有从组氨酸、鹅肌肽、肌肽和缬氨酸及其盐中选择的至少一种作为活性成分。
此外，还可提取盐酸、硫酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、抗坏血酸、苹果酸、琥珀酸、己二酸、葡萄糖酸、酒石酸等盐、矾。
上述咪唑化合物包含在鱼、鸡、肉或牲畜肉、鲸鱼肉等中。
这些物质可以通过水萃取、热水萃取、醇萃取或超临界萃取等方法得到。
例如，鹅肌肽是在下面的方式中获得的。
首先，根据传统方法从鲣鱼、金枪鱼、牛、鸡等肉中制备提取物，通过加入适量的水将提取物的纯度（Bx）调整为1-10%，然后用超滤膜去除高分子量蛋白质，回收低分子量肽组分（分馏分子量：
5000～50000，）。
然后，按照文件中描述的方式（Suyamaetal:
Bull.Japan.Soc.Scient.Fish.,33,141-146,1967），使用强酸性树脂对适当浓缩的低分子量肽组分进行离子交换色谱，并回收有效成分。
然后，将该废水脱盐，然后调节pH值，然后冷冻干燥得到鹅肌肽。
此外，肌肽可从猪肉中获得，缬氨酸可从鲸肉（如须鲸）中获得，方法与上述类似。
本发明的抗疲劳成分可以优选地包含D-核糖作为附加活性成分。
D-核糖是一种属于醛糖的单糖，存在于自然界中具有磷酸键的核苷或核苷酸。
在本发明中，可以使用商用的，例如WakoJunyaku有限公司购买。
下文将解释本发明抗疲劳成分中上述活性成分的优选量。
（1）当本发明的抗疲劳成分含有（单独作为活性成分的咪唑化合物，咪唑化合物含量优选至少质量10%，更优选至少质量50%）时，如果咪唑化合物含量小于质量10%，则不能预期足够的抗疲劳效果。
当本发明的抗疲劳成分含有咪唑化合物和D-核糖作为活性成分时，优选含有5%-50%质量的咪唑化合物和5%-50%质量的D-核糖。
还优选含有质量百分比为10%-50%的咪唑化合物和质量百分比为10%-50%的D-核糖。
如果咪唑化合物和D-核糖的量超出上述范围，则不可能产生协同抗疲劳作用。
此外，本发明的抗疲劳成分可优选地包含选自牛磺酸、肌酸、维生素H、维生素C、类胡萝卜素、还原型谷胱甘肽和矿物质的至少一种。
通过包含上述组分，可以预期各成分所固有的生理活性效应，例如牛磺酸、肌酸等的抗疲劳作用，以及维生素E、维生素C、类胡萝卜素和还原型谷胱甘肽等的抗氧化作用。
作为矿物质，（适用于食品和饮料的族金属元素，例如钙、钠、镁、硒、铁、锌等）可以提到。
本发明的防伪成分除上述基本成分外，还可适当地含有赋形剂、糖类、香料、着色剂、脂肪和油、蛋白质等。
作为本发明抗疲劳组合物的产品的配方并没有特别的限制，可以根据使用目的适当地选择，例如，可以提到片剂、粉末、颗粒、胶囊、糊剂、溶液等。
本发明的抗疲劳组合物的每日有效摄取量为体重的1~200）mg/kg，以咪唑化合物而言，最好为体重的5~30mg/kg。
此外，即使咪唑化合物和d-核糖同时使用，每日有效摄取量也在体重的1至200毫克/公斤之间，最好是体重的5至30毫克/公斤之间。
本发明的抗疲劳组合物可以添加到食品和饮料中，如软饮料、药片、零食、汤粉或香肠。
在这种情况下，以咪唑类化合物（或咪唑类化合物和d-核糖的总量）为标准，建议以100~2000mg的剂量添加到食品和饮料中，最好是400~2000mg。
如果咪唑类化合物的添加量（或咪唑类化合物和D-核糖的总量）小于100mg，抗疲劳效果就不能期望那么高，如果超过2000mg，就会影响食品和饮料的口感，这是不可取的。
准备示例1
制备鹅肌肽
对按常规方法制备的10kg鲣鱼提取物（Bx.=55%），加入4倍量的水稀释，然后使用超滤膜（分离分子量:
10000），去除高分子量蛋白，回收低分子量肽片段。
恢复分数集中和接受治疗一个充满强酸性树脂柱层析法（商品名“安伯来特ir-120m”,Rohm&Haas有限公司）生产的平衡与0.38n柠檬酸钠水溶液（pH4.0）和筛选了0.38ncilratc钠水溶液（pH4.0）的数量从4.5到6.0倍的树脂体积,然后收集筛选了分数（可参考“Suyamaetal:
Bull.Japan.Soc.Scient.Fish.,33,141-146，1967”）.并对该溶液进行脱盐和pH值调节，然后冻干得到45g粉末，用日立公司生产的氨基酸分析仪对所得粉末进行分析，发现纯度为盐化物鹅肌肽的98%。
准备示例2
制备鹅肌肽
除按常规方法从猪肉中提取10kg提取物（Bx.=30%>）并得到24g粉末外，按例1的方法进行纯化。
该粉末的纯度为盐酸肌肽的92%。
准备示例3
试剂准备
除按常规方法从长须鲸中提取10公斤（Bx.=50%）的提取物外，按Lxample1相同的方法进行纯化，结果获得40克粉末。
该粉末的纯度可达92%。
测试示例1
SPF级小鼠20只（雄性），6-wccks龄，分为两组（试验组和对照组;每组由10老鼠）,4小时禁食后,口服是硬,注射用水将应用于对照组的200毫克/公斤体重和盐酸水溶液的愚笨的准备Lxample1（40毫克/毫升）将被应用到测试组的数量2（X>毫克/公斤的体重。
在口服1小时后，小鼠被准确地装入下列强迫运动中。
小鼠置于水浴中（W265mmxD427mmxH204mm）。
含20℃水，吹气使水面起伏，测量游泳时间。
每只老鼠都装了一个重物!
，相当于小鼠平均体重的10%，游泳时间以小鼠从开始游泳到头部浸泡至少7秒为单位。
当3分钟过去了，从测量完（他游泳石灰（!
从测量完游泳时间（第二次悬挂时间）起30分钟后，让老鼠吊在一根金属丝上，直到它坠落的时间被测量。
此外，在运动负荷后1小时，收集血液并分离血浆，测量血浆中的乳酸含量，测定乳酸含量的方法与市面上的试剂盒（商品名:
F-kit）一致。
乳酸酸”;由BeringerMannheimCo.生产）。
测量结果以平均值±标准差（n=10）表示，显著性检验采用学生检验。
图1为游泳时间测量结果。
从图1可以看出，实验组的游泳时间比对照组长。
图2和图3显示了第一次和第二次悬挂时间的测量结果。
从无花果。
2和3，我们发现，在每种情况下，试验组比对照组显示出更长的挂起时间。
特别是第二次悬挂时间，与对照组相比，试验组有显著性差异（p<0.01）。
图4为运动负荷完成后1小时血浆中乳酸的量。
从HG.4中发现，与对照组相比，试验组血浆乳酸含量明显降低（p<0.05）。
测试示例2
40SPF:
将6-wceks龄小鼠（雄性）分为4组（对照组和试验组，即灌服安塞林组、灌服核糖组和灌服安塞林/核糖混合物组，每组10只），禁食4h，强制口服给药，使对照组注射用水量为2（）0mg/kg体重；将实施例1中制备的盐酸安舍林水溶液（40mg/ml）以200mg/kg体重的剂量（以盐酸安舍林计）施加到给药组；将D-核糖（40mg/ml）的水溶液以200mg/kg体重的量（以D-核糖计）施加到核糖组合物；以及将盐酸鹅肌肽和D-核糖以1:
1的质量比结合在一起的混合物（40mg/ml）的水溶液，将以200mg/kg体重的剂量（以盐酸安塞林和D-核糖的总量计）应用于鹅肌肽/核糖混合物组。
口服1小时后，准确测量小鼠游泳时间，方法与实验例1相同。
运动负荷后1小时采集血液，分离血浆，测定血浆中乳酸含量与测试示例1中的方式相同。
各测量值以平均值±标准差（n=10）表示，采用t检验进行显著性差异检验。
图5示出了各个组的游泳时间的结果。
从图5可以看出，试验组的游泳时间比对照组长。
尤其是鹅肌肽/核糖混合物组与其他组相比，游泳时间显著延长（p<0.05）
图6示出运动负荷后血浆中的乳酸量。
从图6可以看出，与对照组相比，服用鹅肌肽组（减少23.9%）和服用核糖核酸组（减少29.4%）的血浆乳酸含量保持较低的显著水平（p<0.05）。
与对照组相比，鹅肌肽/核糖混合给药组（降低42.0%）血浆乳酸含量明显降低（p<0.01）。
以上结果提示，口服鹅肌肽可提高运动成绩。
此外，由于运动后血浆乳酸含量较低，提示运动可以抑制或控制肌肉疲劳。
此外，考虑到各组的给药量（200mg/kg体重）是恒定的，因此，与单独使用鹅肌肽或D-核糖的情况相比，联合使用鹅肌肽和D-核糖可以协同控制疲劳。
实例：
含有本发明抗疲劳成分的食品和饮料的配方如下所示。
表1显示了运动员营养饮料的配方，表2显示了片剂的配方。
表1
原材料
每100毫升（g）
安塞林（盐酸）
0.5g
D-核糖
1g
牛磺酸
1g
维生素C
0.4g
果糖液态糖
10g
酸化剂
适量
香水
适量
防腐剂
适量
表2
原材料
质量（%）
安塞林（盐酸）
5
D-核糖
30
肌酸
2
维生素C
1
维生素E
0.1
葡萄糖
20
糊精
33.8
矿物质
5
酸化剂
3
香水
0.1
如上所述，根据本发明可以获得一种抗疲劳组合物，通过该组合物可以使运动中或运动后血浆中的乳酸量保持较低，并且能够通过运动来控制肌肉的疲劳。
因此，通过口服抗疲劳成分，可以控制肌肉疲劳，从而提高运动能力。
专利申请范围：
1.一种控制肌肉疲劳的组合物，主要由控制肌肉疲劳的（A）咪唑化合物的增效量组成，该化合物为丝氨酸或其盐和（b）D-核糖。
2.根据权利要求1所述的成分，其中咪唑化合物Ls的质量分数至少为10%。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中the咪唑化合物的质量分数为5-50%，D-核糖的质量分数为5-50%。
4.一种肌肉疲劳控制成分，主要由（i）肌肉疲劳抑制协同有效量的（A）为aascrinc或其盐的咪唑化合物和（b）D-核糖；和（ii）从牛磺酸、crcatic、维生素E、维生素C、胡萝卜素组分中选择的至少一种物质组成，还原型谷胱甘肽和一种矿物，选自钙、钠、镁、硒、铁和锌。
5.一种提供肌肉疲劳控制效果的方法，包括向有需要的人口服肌肉疲劳控制成分，其基本上由（A）为鹅肌肽碱或其盐的咪唑化合物和（b）D-核糖的协同有效量组成。
6.根据权利要求5所述的方法，其中咪唑化合物的质量分数至少为10%
7.根据权利要求5所述的方法，其中咪唑化合物的质量分数为5-50%，D-核糖的质量分数为5-50%。
8.一种提供肌肉疲劳控制效果的方法，包括向有需要的人口服一种肌肉疲劳控制成分，其基本上由（i）肌肉协同faliguc控制有效量（A）一种为鹅肌肽碱或其盐的咪唑化合物和（b）D-核糖和（ii）在从the组中选择的至少一种物质，包括牛磺酸、肌酸、维生素E、维生素C、类胡萝卜素、还原型谷胱甘肽和从钙、钠、镁、硒、铁和锌组中选择的矿物质。
9.根据权利要求5所述的方法，其中复方咪唑的剂量为每日体重1至200mg/kg。
10.根据权利要求5所述的方法，其中，以咪唑化合物为例，其组成为每日给药剂量为5至30mg/kg体重。
11.根据权利要求5的方法，其中咪唑类化合物和d-核糖的每日总剂量为1至200mg/kg体重。
12.根据权利要求7所述的方法，其中咪唑化合物和d-核糖的每日总剂量为5至30mg/kg体重。
13.根据权利要求1所述的组成，其中所述组合物还包括赋形剂。
14.根据权利要求1所述的成分，其中所述成分还包括香水。
15.根据权利要求1所述的组成，其中所述组合物还包括着色剂。
16.根据权利要求1所述的成分，其中所述成分还包括防腐剂。
17.根据权利要求5所述的方法，其中所述组合物还包括赋形剂。
18.根据权利要求5所述的方法，其中所述成分还包括香水。
根据权利要求5所述的方法，其中所述组合物还包括着色剂。
根据权利要求5的方法,其中所述成分还包括防腐剂。
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