沙门菌检验.ppt

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沙门菌检验严纪文沙门菌概况nn沙门菌是1885年由Salmon氏等在猪霍乱流行时，分离出的猪霍乱沙门菌，由于Salmon氏对本属细菌的发现贡献卓越，故定名为沙门菌属。

nn沙门菌属是肠杆菌科中最重要的病原菌。

它是一群抗原结构、生化特性相似的革兰氏阴性杆菌。

血清型繁多，目前已发现的沙氏菌有2500多个血清型和变种。

我国自1911年至90年代初已有255个血清型。

nn虽然沙门菌的血清型很多，但多数国家从人体、动物和食品中分离出沙门菌仅约4050个血清型。

而在一个国家中的一定时期只约有10个血清型是比较常见的。

分类：

nn伤寒沙门菌（伤寒、副伤寒）-传染病防治法中规定报告的乙类传染病。

nn非伤寒沙门菌-食品卫生标准的检测的主要对象。

沙门菌的生物学特性形态与染色性：

nn革兰氏阴性杆菌，无芽胞,一般无荚膜。

nn除鸡瘟沙门菌（S.pullorum）和鸡沙门菌（S.gallinarum）外均有动力。

为周身鞭毛，并多数有菌毛。

nn大小：

13um0.51um。

nn营养需求不高，需氧或兼性厌氧。

普通营养培养基上均能生长，能够利用柠檬酸盐作为碳源。

nn在普通肠道选择性平板上基本上形成无色菌落。

菌落中等大小，半透明，表面光滑，边缘整齐或呈锯齿状。

nn不分解乳糖，大部分菌株产H2S，发酵葡萄糖产酸不产气。

培养与生化特性nn最适培养温度为37，最适pH7.27.6。

nn耐受胆盐，在粪便、土壤、食品、水中可生存5个月至二年之久。

沙门菌的分布nn沙门菌广泛存在于自然环境中。

nn通过沙门菌病患者或健康带菌的人和动物的排泄物污染环境和食品。

nn易于污染的高危食物：

畜禽肉类、蛋、奶及其制品。

nn沙门菌在肉类中不分解蛋白质，不产生靛基质，所以当食品污染了沙门菌后，通常没有感官性状的改变。

修订内容nn前增菌:

取消样品分类，前增菌液统一为“缓冲蛋白胨水”。

nn对所有样品均进行818h前增菌。

原标准只对冻肉、蛋品、乳品等加工食品进行前增菌。

nn修改了样品的处理方式：

增加拍击式均质器，均质袋可直接培养。

nn样品液增加调整pH值。

nn选择性增菌：

使用“TTB、SC”，取消“MM”。

nn分离培养基：

使用BS、XLD、HE、科玛嘉显色培养基。

取消DHL、SS。

nn生化鉴定：

生化鉴定：

1.1.采纳采纳API20EAPI20E或或VitekVitekGNIGNI为传统生化鉴定方法为传统生化鉴定方法的选择性替代方法。

的选择性替代方法。

2.2.生化鉴定项目进行调整：

生化鉴定项目进行调整：

原国标中生化鉴定是将可疑菌落同时接种于三糖原国标中生化鉴定是将可疑菌落同时接种于三糖铁（铁（TSITSI）琼脂、蛋白胨水）琼脂、蛋白胨水（供做靛基质试验供做靛基质试验）、尿素琼脂尿素琼脂（pH7.2）（pH7.2）、氰化钾、氰化钾（KCN）（KCN）培养基和赖氨培养基和赖氨酸脱羧酶试验培养基；酸脱羧酶试验培养基；现修改为：

在接种现修改为：

在接种TSITSI琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时增加一项营养琼脂（养基的同时增加一项营养琼脂（NANA），经），经TSITSI琼琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的选择后，可筛掉脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的选择后，可筛掉大部分非沙门氏菌株，大大减少了工作量，同时大部分非沙门氏菌株，大大减少了工作量，同时也满足了也满足了API20EAPI20E或或VitekVitekGNIGNI鉴定的需要。

鉴定的需要。

为保持与原标准的一致性，新标准也保留了可以同时直接接种蛋白胨水（供做靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、KCN培养基的内容。

本部分还增加了对疑似菌落进行留样确认的部分，以备必要时复查，这对生化鉴定不确定的菌落进行进一步验证是非常必要的。

nn血清学鉴定中的菌体分群改为选择性试验项目。

nn报告：

综合以上生化试验和血清学鉴定的结果,报告25g样品中检出或未检出沙门菌。

培养基的改变旧标准旧标准前增菌：

前增菌：

BPWBPW增菌：

增菌：

MM（MM（或或TTB）TTB）、SCSC分离培养：

分离培养：

BSBS、DHL（DHL（或或HEHE、WSWS、SS）SS）生化鉴定：

生化管生化鉴定：

生化管新标准新标准前增菌：

前增菌：

BPWBPW增菌：

增菌：

TTBTTB、SCSC分离培养：

分离培养：

BSBS、XLDXLD、显色培养基显色培养基生化鉴定：

生化管、生化鉴定：

生化管、API20EAPI20E生化鉴定试剂生化鉴定试剂盒、盒、VITEKGNIVITEKGNI生化生化鉴定卡鉴定卡沙门菌的检验程序检样检样前增菌法前增菌法25g25g样品样品BPWBPW225mL225mL818h818h3613611mL1mL检样检样TTB10mLTTB10mL1mL1mL检样检样SC10mLSC10mLBSBSXLD（XLD（或或HEHE、显色培养基显色培养基）3613614048h4048h3613611824h1824h挑取可疑菌落挑取可疑菌落421421，1824h1824h361361，1824h1824h沙门菌的检验程序可疑菌落可疑菌落TSITSI（斜面、底层、产气、斜面、底层、产气、HH22SS），），蛋白胨水（靛基质），蛋白胨水（靛基质），尿素（尿素（pH7.2）pH7.2），KCNKCN，赖氨酸、营养琼脂赖氨酸、营养琼脂（NA）（NA）HH22SS，靛基质靛基质尿素，尿素，KCNKCN赖氨酸赖氨酸HH22SS，靛基质靛基质尿素，尿素，KCNKCN赖氨酸赖氨酸HH22SS，靛基质靛基质尿素，尿素，KCNKCN赖氨酸赖氨酸/非如左述的各种反非如左述的各种反应结果应结果甘露醇甘露醇+，山梨醇，山梨醇+ONPGONPG非沙门菌非沙门菌血清学鉴定血清学鉴定报告报告商商品品化化生生化化鉴鉴定定系系统统nn称取25g（mL）样品放入盛有225mLBPW的无菌均质杯中，以8000r/min10000r/min均质1min2min，或置于盛有225mLBPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min2min。

若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。

无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于361培养8h18h。

nn如为冷冻产品,应在45以下不超过15min,或25不超过18h解冻。

前增菌nn轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL,转种于10mLTTB内,于421培养18h24h。

同时,另取1mL,转种于10mLSC内,于361培养18h24h。

nn分别用接种环取增菌液1环,划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或显色培养基平板）。

于361分别培养18h24h（XLD琼脂平板、HE琼脂平板、显色培养基平板）或40h48h（BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落。

增菌与分离沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性选择性琼脂平琼脂平板板沙门氏菌沙门氏菌BSBS琼脂琼脂菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色,菌落周围培养基可呈黑色或棕菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落色；有些菌株形成灰绿色的菌落,周围培养基不变周围培养基不变HEHE琼脂琼脂蓝绿色或蓝色蓝绿色或蓝色,多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色,中中心黑色或几乎全黑色；心黑色或几乎全黑色；XLDXLD琼琼脂脂菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心色中心科玛嘉科玛嘉显色培显色培养基养基菌落为紫红色菌落为紫红色nn接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时，可直接接种蛋白胨水（供做靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN）培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。

于361培养18h24h,必要时可延长至48h。

nn将已挑菌落的平板储存于25或室温至少保留24h，以备必要时复查。

生化试验nn自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，分别接种三糖铁（TSI）琼脂、赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板；取菌落一部分于斜面划线和底层穿刺。

nn接种针在接种TSI后不要灭菌，直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于361培养18h24h，必要时可延长至48h。

沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结果三糖铁琼脂三糖铁琼脂赖氨酸脱羧酶试验培养基赖氨酸脱羧酶试验培养基初步判断初步判断斜面斜面底层底层产气产气硫化氢硫化氢-+（）（）（）（）可疑沙门氏菌属可疑沙门氏菌属-+（）（）（）（）可疑沙门氏菌属可疑沙门氏菌属+（）（）（）（）可疑沙门氏菌属可疑沙门氏菌属+/非沙门氏菌非沙门氏菌注：

阳性，阴性；（）多数阳性注：

阳性，阴性；（）多数阳性,少数阴性；少数阴性；/阳性或阴性。

阳性或阴性。

该表显示：

只有在三糖铁斜面产酸、底层产酸；同时赖氨酸阴性的菌株可排该表显示：

只有在三糖铁斜面产酸、底层产酸；同时赖氨酸阴性的菌株可排除。

其他反应结果均有沙门菌属的可能，同时也均有不是沙门菌的可能。

除。

其他反应结果均有沙门菌属的可能，同时也均有不是沙门菌的可能。

沙门氏菌属生化反应初步鉴别表反应反应序号序号硫化氢硫化氢（HH22SS）靛基靛基质质pH7.2pH7.2尿尿素素氰化钾氰化钾（KCNKCN）赖氨酸脱赖氨酸脱羧酶羧酶A1A1A2A2A3A3/注：

阳性；阴性；注：

阳性；阴性；/阳性或阴性。

阳性或阴性。

反应序号反应序号A1A1：

典型反应判定为沙门氏菌属。

如尿素、典型反应判定为沙门氏菌属。

如尿素、KCNKCN和赖氨酸和赖氨酸脱羧酶脱羧酶33项中有项中有11项异常项异常,按下表可判定为沙门氏菌。

按下表可判定为沙门氏菌。

如有如有22项异常为项异常为非沙门氏菌。

非沙门氏菌。

沙门氏菌属生化反应初步鉴别表pH7.2pH7.2尿素尿素氰化钾氰化钾（KCN）（KCN）赖氨酸脱羧赖氨酸脱羧酶酶判判定定结结果果甲型副伤寒沙门氏菌甲型副伤寒沙门氏菌（要求血清要求血清学鉴定结果学鉴定结果）沙门氏菌沙门氏菌或或（要求符合本要求符合本群生化特性群生化特性）沙门氏菌个别变体沙门氏菌个别变体（要求血清学要求血清学鉴定结果鉴定结果）注：

表示阳性；表示阴性。

注：

表示阳性；表示阴性。

反应序号反应序号22：

补做甘露醇和山梨醇试验，沙门菌靛基质阳性变体两项结：

补做甘露醇和山梨醇试验，沙门菌靛基质阳性变体两项结果均为阳性；果均为阳性；反应序号反应序号33：

补做：

补做ONPGONPG，ONPGONPG阴性，同时赖氨酸脱羧酶阳性为沙门菌；阴性，同时赖氨酸脱羧酶阳性为沙门菌；但甲型副伤寒沙门菌赖氨酸脱羧酶为阴性。

但甲型副伤寒沙门菌赖氨酸脱羧酶为阴性。

沙门氏菌属各生化群的鉴别必要时按此表进行沙门菌生化群鉴定必要时按此表进行沙门菌生化群鉴定项项目目卫矛醇卫矛醇山梨醇山梨醇水杨苷水杨苷ONPGONPG丙二酸丙二酸盐盐KCNKCN注：

表示阳性注：

表示阳性;表示阴性。

表示阴性。

沙门菌的增菌培养基nn缓冲蛋白胨水（BPW）肉汤：

是基础增菌培养基，不含任何抑制成分，有利于受损伤的沙门菌复苏。

使受损伤的沙门菌细胞恢复到稳定的生理状态。

一般用于加工食品或冷冻食品的前增菌。

沙门菌的增菌液nn四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）：

含有胆盐，抑制革兰氏阳性球菌和部分大肠埃希氏菌的生长，而伤寒与付伤寒沙门菌仍能生长。

nn亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）：

可对伤寒及其他沙门菌作选择性增菌，亚硒酸与蛋白胨中的含硫氨基酸结合，形成亚硒酸和硫的复合物，影响细菌硫代谢，从而抑制大肠埃希氏菌、肠球菌和变形杆菌的增殖。

沙门菌的分离培养基nn亚硫酸铋琼脂（BS）：

含有煌绿、亚硫酸铋能抑制大肠杆菌、变形杆菌和革兰氏阳性菌的生长，但对伤寒、副伤寒等沙门菌的生长无影响。

伤寒杆菌及其