Keywords:
equineparasites;FEC;influencefactors;analysis
引言
FecalEggsCounts（FEC）为时下国外较为流行的定量判断马体内携带寄生虫数量的一种检测方法[1]。
这种方法主要通过采集马匹新鲜分球，然后在实验室利用特殊溶剂和仪器进行过滤，将寄生虫虫卵与粪便杂质分离开，随后，在显微镜下利用计数板进行计数得出每克粪便寄生虫虫卵数。
寄生虫虫卵数受很多因素的影响，例如饲养环境，年龄，性别，驱虫，管理，季节，马的品种等很多因素影响[2]。
本文主要对饲养环境，性别和季节三个因素进行探讨。
与此同时，注意控制了其他因素的一致性，防止干扰。
如所有实验马匹年龄均在5-20岁之间[3]，实验马匹品种均为美国夸特马。
本文通过对马排泄物中寄生虫虫卵数的与环境，性别，季节三个因素进行分析，得出马体内荷虫数与后三者之间的关系，进而为马场寄生虫管理提供参考和意见。
1研究目的
通过对莫瑞州立大学马场的马匹粪便中寄生虫数量的计数，判断其体内寄生虫数目的大小。
同时，结合马匹的所处季节，性别以及饲养环境进行数据的对比分析，进而探讨马匹体内寄生虫数目的多少与其性别，季节和饲养环境是否存在关系以及关系的强度。
研究这些关系存在的原因，进而提出相应的管理和防治建议。
2研究对象与饲养管理环境
本研究主要基于对莫瑞州立大学马场的随机40匹马的FEC实验数据的整理分析，莫瑞州立大学马场及马匹情况如下：
莫瑞州立大学总共有56匹马，其中有20匹为舍饲管理，平时主要在马房内活动，主要用于马术教学，有教学课时会拉出马房进行教学骑乘或调教，活动时间大概为1h。
上午，在没有教学任务的情况下，会将马匹散放于放牧区。
马匹自由活动，时间通常为2-4h。
其它时间，这些马匹主要都关在马房之中。
饲养方式较为精细，定时将定量的干草放于马房之中，每天一次精饲料饲喂，时间通常为下午4点前后。
饮用水为桶装，每日更换。
每天有人会将马房打扫和更换垫料。
其余36匹马为散养管理，轮流散放于7片放牧区（Field）。
喂养方式较为粗放，主要将干草平铺于放牧区中部，马匹随意采食，每天会有一次精饲料的饲喂，精饲料盛放于饲喂台，供马匹自由采食。
除用于教学骑乘和训练外，马匹自由活动，教学骑乘和训练通常为1h。
在日常管理和驱虫防疫方面，所有马匹都处于相同管理方式和相同驱虫防疫方式。
所有马匹在近六个月中，无患重大疾病或接受对实验结果有重大影响的治疗（如抗生素类药物治疗）的马匹[4]。
所有马匹健康状况良好。
3研究方法
3.1取样方法及样本情况
本次实验随机抽取检查两次。
时间分别为2013年9月24日和2014年2月5日，所有粪便样品保证在此日期前后数天内收集完毕,，保证样品的新鲜度以及实验结果的可比性[5]。
两次抽检马匹数均为40匹。
第一次检查的有效马匹数（实验数据可用的马匹数）为38匹，第二次随机抽取的有效马匹数为34匹。
第一次F（Field,放牧区）/S（Stall,马房）比例为7/31，第二次为8/26。
第一次性别比例为S（Stallion,公马）/M（mare,母马）/G（Gelding,骟马）=0/11/27。
第二次性别比例为S/M/G=1/12/13。
所有马匹年龄都处于5-16yr的区间内，对实验结果基本无影响。
每次收集马粪样本大概为50-100g。
这些样品被收集在保鲜袋中，随后存放于冰箱中等待进一步的处理。
3.2FecalEggCounts（粪便虫卵计数实验）
FEC实验利用麦克马斯特技术来测定每克马粪样品中寄生虫虫卵数量，每个实验样品都由第一和第二操作者操作[6]。
3-10min后，通过麦克马斯特小室进行计数。
每个在麦克马斯特小室网格线内的完整圆线虫虫卵都进行计数。
在样品次级处理前，每个粪便样品在保鲜袋内进行手工揉碎。
对于每个样品，称取三个4g的次级样品，随后对次级样品进行浸泡搅拌处理，使虫卵能够充分地融入到所用的特定溶剂中。
在虫卵充分与粪便分离后，将混合液倒入漏斗中，将含有虫卵的溶液与粪便分离开来。
之后，利用毛细管吸取适量所得液体并将此液体滴加到有麦克马斯特小室网格线的载玻片上。
最后，在显微镜下进行虫卵计数，所得数值即为每克马粪便中含有的虫卵数。
3.3数据分析方法
马体内荷虫数受到很多因素的影响，进而导致其排泄物中虫卵数也收到外界很多因素的影响[7]。
因此，影响EPG（EggsPerGram,每克粪便虫卵数）的变量有很多，因此在分析的过程中，采取统一其他变量，分析特定一个变量的方法。
在统计分析前，采用检验行为数据分布型，根据其正态性选用相应方法统计分析，不符合正态分布的数据采用非参数检验进行量化分析。
数据分析利用SPSS19.0软件和Excel进行。
4结果与分析
利用Excel软件对数据进行了筛选和整理，之后利用SPSS软件进行数据分析。
4.1季节影响因素分析
对数据进行处理分析，在统一饲养环境和性别变量后，得出不同季节（春、秋）放牧区携带各范围EPG的母马和骟马的数量占总数的比例（表1）。
表1不同季节（春、秋）放牧区携带各范围EPG的母马和骟马数占总数的比例（%）
EPG（%）
春季/放牧区
秋季/放牧区
母马
骟马
母马
骟马
Low022.22a
35.29a
51.36c
65.22c
Medium20011.11a
23.53a
24.32c
21.74b
High
80066.67a
41.18a
24.32c
13.04c
注：
①EPG采用的是0~100%的百分比评分标准表示
②表中1、3列上标字母相同表示差异不显著（p＞0.05），相邻字母表示差异显著（p＜0.05），相间字母表示差异极显著（p＜0.01）。
相邻列不进行比较。
③以下同
由上述图表可以明显看出（2,4列相比，除携带中范围EPG马匹比例外，携带各范围EPG马匹比例差异极显著（P<0.01）），在相同饲养环境，春季携带高范围EPG的骟马的数量明显高于秋季（41.18%/13.04%）.春季中间范围携带中范围EPG的骟马的数量略高于秋季（23.52%/21.74%）。
春季低EPG的骟马的数量明显低于秋季（65.22%/35.29%）。
总体而言，相对于秋季，春季携带高范围EPG的骟马的比例明显增加，意味着春季骟马携带高寄生虫数量的比例更大。
因而，不同的季节对骟马的EPG有明显影响。
在相同饲养环境，1列和3列相比，携带各范围EPG的马匹比例差异极显著（P<0.01）。
春季高EPG母马的数量明显高于秋季（66.67%/0.00%）.春季携带中间范围EPG的母马的数量略低于秋季（11.11%/25.00%）。
春季携带低范围EPG的母马的数量明显低于秋季（22.22%/75.00%）。
总体而言，相对于秋季，春季携带高范围EPG母马的比例明显增加，意味着春季母马携带高寄生虫数量的比例更大。
因而，不同的季节对携带各范围EPG的母马比例有明显影响。
总结而言，不管是骟马还是母马，在相同饲养环境和其他条件下，季节都对马匹EPG有明显的影响。
相对而言，春季季节对马匹携带EPG有正向影响，而秋季则对马匹携带EPG有负向影响。
4.2性别影响因素分析
对原始数据进行处理分析，在统一饲养环境和季节变量后，得出下列图表数据。
表2不同性别放牧区携带各范围EPG的马匹在不同季节数量占总数的比例（%）
EPG（%）
骟马/放牧区
母马/放牧区
春季
秋季
春季
秋季
Low035.29a
65.22a
22.22c
51.36c
Medium20023.53a
21.74a
11.11c
24.32c
High
80041.18a
13.04a
66.67c
24.32c
从上表可以明显看出（1列和3列相比，2列和4列相比，各范围EPG差异极显著（P<0.01）），相同饲养环境和季节下，不同性别对不同范围EPG的马匹比例有明显影响。
携带高范围EPG的母马比例要明显高于骟马（41.18%/24.32%和66.67%/41.18%）。
携带中范围EPG的母马比例和骟马在不同季节的高低关系不统一，但总体相差不多（11.11%/23.53%和24.32%/21.74%）。
携带低范围EPG的母马比例低于骟马（22.22%/35.29%和51.36%/65.22%）。
总体而言，在相同的季节里，相同饲养环境下，以及其他条件因素相同的情况下，携带高EPG的母马数量要明显多于骟马数量。
相同环境条件下，母马体内寄生虫的数量更倾向于高于骟马体内寄生虫的数量。
4.3饲养环境影响因素分析
表3不同饲养环境下春秋季携带各范围EPG的骟马数量占总数的比例（%）
EPG（%）
圈养/骟马
散养/骟马
春季
秋季
春季
秋季
Low060.00a
75.00a
35.29c
65.22c
Medium20030.00a
25.00a
23.53c
21.74c
High
80010.00a
0.00a
41.18c
13.04c
由上述图表可以明显看出（1列和3列相比，2列和4列相比，各范围EPG差异极显著（P<0.01）），在春季，散养环境下高EPG的骟马的比例要明显高于舍饲环境下高EPG的骟马的比例（41.18%/10.00%），而舍饲环境下中低EPG的骟马的比例都略高于散养环境下的骟马比例。
总结而言，骟马在散养环境中携带高EPG的比例要高于其在舍饲环境下携带高EPG的比例。
在秋季，散养环境下高EPG的骟马的比例要明显高于舍饲环境下高EPG的骟马的比例（13.04%/0.00%），而舍饲环境下中低EPG的骟马的比例都略高于散养环境下的母马比例。
总结而言，母马在散养环境中携带高EPG的比例要高于其在舍饲环境下携带高EPG的比例。
有上述两组结论可以得出，不过是春季还是秋季，在同样性别和其他条件下，饲养环境都对马匹携带EPG的高低有明显影响。
散养环境下，马匹携带高EPG的比例要高于舍饲环境下的马匹。
5讨论
5.1马匹寄生虫影响因素分析
从实验结果来看，在其他条件相同的情况下，不同季节（春秋季为例）对马匹体内寄生虫的数量有明显影响，除季节因素外，性别差异和饲养环境的不同也对马匹寄生虫病有着重要的影响。
总体而言，春季马匹寄生虫病情况要比秋季严重；母马体内寄生虫的数量普遍高于骟马体内寄生虫数量；散养环境下，马匹更易感染寄生虫。
5.2马匹寄生虫影响因素原因分析以及管理建议
5.1.1季节影响因素原因分析及建议
相关研究表明[8]，在美国中部地区，圆虫卵的数量从春季开始上升（马内寄生虫的防治）。
而经历夏季高温和强烈的阳光暴晒后，寄生虫卵对马场的污染开始下降，草地单位虫卵数从五月到八月会急剧下降。
这些研究成果可以解释本次春季马寄生虫病比秋季马寄生虫病严重的实验结果。
分析其原因，可能是因为高温和阳光对草地中虫卵的生存和传播有抑制作用，因此，马匹体内荷虫数在春季温度回暖的时候较高，随后在夏季高温暴晒中开始下降，经过夏季（5月到8月）到秋季（9月）后，马匹携带寄生虫数已极大地降低。
对此，建议马场管理者在春季和秋季择机进行两次驱虫。
春季是寄生虫开始数量回升和传播的时候，此时进行驱虫管理，有利于控制寄生虫流行程度以及传播，而且，在寄生虫爆发的高峰期进行驱虫，有利于防止寄生虫抗药性的产生[10]。
秋季后期（10月后），寄生虫数量开始恢复上升，会产生第二个高峰期，此时应进行第二次驱虫，理由同第一次。
考虑到寄生虫抗药性问题，最好在驱虫前进行FEC试验，然后只对EPG大于200的马匹进行驱虫。
这样可以大大节省马场的开支（甚至可以节省78%的驱虫支出），同时，这样也可以有效地降低寄生虫抗药性的产生。
5.1.2性别影响因素原因分析及建议
参考以往国外的研究成果[9]，相对于雄性马属动物，雌性马属动物更容易感染寄生虫。
这与本次实验结果也相当吻合。
分析其原因，可能是由于不同的生理构造或行为习惯造成的。
对此，马场管理者在进行马匹寄生虫防治管理的时候应该区别对待，不能所有马匹共用同一套驱虫模式。
对于母马应该给与更多的关注，寄生虫检查和管理。
尤其是在母马妊娠生产的过程中，应格外注意相应地防疫和寄生虫管理，防止母马将疾病或寄生虫传播给马驹。
5.1.3饲养环境影响因素原因分析及建议
饲养环境对马寄生虫病的影响得到了很多研究的验证[10]，散养环境下的马匹携带寄生虫的比例要明显高于舍饲环境下的马匹。
分析其原因，应该是草地环境较为适宜寄生虫虫卵的滋生和传播。
草地上的马匹排泄物一般不能及时甚至不能清除，这样就将马体内排出的寄生虫虫卵极大地保留在马匹生活环境中，随后，由于散养环境下的寄生虫传播方式更为丰富[11]，如蚊虫，马匹相互接触，采食草料行为。
这些都使得寄生虫可以迅速大范围地在散养马匹中流行开来。
而在舍饲环境下，马房会每天清扫，马匹排泄物会及时地被清除出马匹的生活环境。
这样就防止了寄生虫虫卵的进一步污染。
同时，在马房中，由于环境相对干净，蚊虫等传播方式会减少很少。
单独的马房也将马匹相互分离开来，这样就避免了马匹之间的直接接触，以及草料交杂采食的行为，这样进一步减少了寄生虫的传播。
对此，马场管理者应该为马匹营造一个相对“干净”的饲养生活环境。
在这种环境下，马匹的排泄物应该及时清除，同时，注意感染寄生虫马匹和健康马匹的隔离。
具体建议有：
首先，尽量将马匹饲养于马房之中，同时要定期保持马房的清洁和消毒。
由于条件的限制不得不将马匹散养于放牧区的时候，可注意草场的管理和循环交杂放牧[12]。
草场应该及时清理马匹排泄物，草料尽可能放置于饲料台上，避免污染。
设置若干草场区，进行循环放牧。
草场在夏季（5月到8月）的时候，可进行翻地处理，借助高温和阳光杀死土壤中的寄生虫虫卵。
同时，如条件许可，可尝试与其他大型动物，如牛，进行交杂放牧[13]。
可以降低单位草地寄生虫密度。
其次，定期进行马匹EPG检查，对EPG高于200的马匹进行隔离和单独驱虫管理。
最后，条件许可的情况下，马场定期灭杀蚊虫及设施草地消毒，抑制寄生虫滋生和传播。
6结论
（1）在春季，携带高EPG的马匹比例要高于秋季。
（2）携带高EPG的母马比例要高于骟马。
（3）相对于舍饲环境下的马匹，散养环境下携带高EPG的马匹比例要明显高很多。
致谢
感谢大学四年来培养我，关心我的所有老师。
感谢潘庆杰教授、李桢博士以及莫瑞州立大学Dr.Porr对论文的指导。
感谢莫瑞州立大学动物实验室的帮助。
参考文献：
[1]Denwood,M.J.;Reid,S.W.J.;Love,S.;Nielsen,M.K.;Matthews,L.;McKendrick,I.J.;Innocent,G.T.ComparisonofthreealternativemethodsforanalysisofequineFecalEggCount[2]Traversa,Donato.Equineparasites:
diagnosisandcontrol-acurrentperspective[J].Parasites&Vectors.2009Supplment2,2：
1-2.
[3]Francisco,I.;Arias,M.;Cortiñas,F.J.;Francisco,R.;E.Mochales;Dacal,V.;Súarez,J.L.;Uriarte,J.;Morrondo,P.;Sánchez-Andrade,R.;Díez-Bãnos,P.;Paz-Silva,A.IntrinsicFactorsInfluencingtheInfectionbyHelminthParasitesinHorsesunderanOceanicClimateArea[4]HelenaCarstensenDVM,LeneLarsenDVM,ChristianRitzMSc,PhD,MartinK.NielsenDVM,PhD,DiplEVPC.DailyVariabilityofStrongyleFecalEggCountsinHorses[J].Journalof
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