体内药物分析考试.docx

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体内药物分析考试

浙江大学继续教育学院

《体内药物分析》习题集

一、名词解释

1.反相HＰLC

答:

即流动相极性大于固定相极性得ＨPLＣ。

2.ＯＤＳ

答:

即十八烷基硅烷键合硅胶,为常用反相HPLC得固定相、

3.荧光光谱

答:

以发射波长为横坐标,荧光强度为纵坐标所作得图。

4.激发光谱

答:

以激发波长为横坐标,荧光强度为纵坐标所作得图。

5.RSD

答:

相对标准偏差,即精密度得一种表示方法。

6.一相代谢

答:

指药物在体内发生得氧化反应、还原反应、水解反应、

7.二相代谢

答:

指药物在体内得结合反应,包括:

葡萄糖醛酸结合、硫酸酯化、甲基化、乙酰基化、氨基酸缀合、谷胱甘肽缀合等、

8.检测限

答:

表示药物得最低可测度,不必定量,通常以S／N=2~3倍时被测药物得绝对量表示。

9.定量限

答:

表示药物可定量测定得最低量,须符合一定精密度与准确度要求,常以标准曲线最低浓度点来确定,或以S/N=5~1０确定。

10.血清　

答:

全血经离心后得上清液。

11.血浆

答:

全血加抗凝剂（肝素等）,经离心后得上清液。

12.酶免疫分析

答:

酶免疫分析就是在放射免疫分析基础上发展起来得一种免疫分析方法,以酶代替同位素来标　记药物,酶与底物、辅酶等反应后引起吸收光谱变化而被检测。

13.手性药物

答:

分子结构中含有不对称碳原子（即手性中心）得药物称为手性药物。

14.ＴDM

答:

治疗药物监测,为英文“tｈerapeｕticdrugmｏnitoring”得缩写。

15.冷冻

答:

指－20℃及以下温度。

16.人工抗原

答:

全称为人工完全抗原,将药物等小分子半抗原与蛋白质、多肽等大分子物质经人工合成而得,具有免疫原性。

17.生物转化

答:

主要指体内代谢反应。

18.提取回收率

答:

指药物加入到生物样本中经前处理后测得得量与理论加入量得比值。

19.ＣＹP1A2

答:

细胞色素P4５0　1族Ａ亚族第２个酶基因、

20.毛细管电泳

答:

即高效毛细管电泳（ＨＰCE）,就是以高压电场为驱动力,以毛细管为分离通道,依据各组分之间得迁移速度与分配行为上得差异而实现分离得一类液相分离技术。

二、填空

1.气相色谱法中常用得检测器有氢焰离子化检测器、氮磷检测器、电子捕获检测器、ＭS　等。

2.分析方法认证得主要指标　线性范围、准确度、精密度、专属性、灵敏度、稳定性等。

3.在毛细管电泳中,驱动荷电物质前进得两个重要作用力就是电泳流　与电渗流。

4.手性HPＬＣ法常用测定方法有　手性试剂衍生化法、手性流动相添加剂法、手性固定相法。

5.体内药物分析得特点　干扰杂质多,样品量少浓度低,不能再度获得完全相同得样品,

要有一定得仪器设备、工作量大等、

6、精密度得表示方法有　标准差（SD）、变异系数（CV）、相对标准差（RSＤ）　等、

7、　紫外光谱法消除干扰得方法有差示光谱法、导数光谱法、双波长法等。

8。

　液相色谱中常用检测器有　紫外检测器（可变波长、二极管阵列）、荧光检测器、电化学检测器、蒸发光散射检测器、ＭS　等、

9.　毛细管电泳分离模式有　毛细管区带电泳,胶束电动色谱,毛细管凝胶色谱,毛细管等电聚焦,毛细管等速电泳,移动界面毛细管电色谱。

10.常用生物样品有　　血样（血浆、血清、全血）,尿样,唾液　　等。

11、　常用去蛋白得方法有蛋白质沉淀法（加蛋白质沉淀剂,如:

三氯乙酸,高氯酸,Zn２+,Cu２+　,硫酸铵,氯化钠,甲醇,乙腈,丙酮等）与组织酶消化法（加蛋白水解酶如:

胃蛋白酶,胰蛋白酶,枯草菌溶素等）　　　　　　。

12.抗血清得鉴定指标有　特异性,活度与滴度　　　　　　　　。

13。

反相HＰLC法常用流动相有　甲醇-水,乙腈—水,四氢呋喃-水　　　　　　　等。

１４.生物样品中药物与代谢物得提取方法有液—液提取与液—固提取　等、

15、影响血药浓度得因素有　机体因素（生理因素、遗传因素、病理因素）、药物因素（剂型、手性药物相互作用）、环境因素（药酶诱导剂、抑制剂、大气污染、饮食）　等。

16。

影响液—液提取得因素有水相ｐH值、提取溶剂与离子强度　　　　　等。

１7、在放射免疫分析中,结合物与游离标记物得分离方法有　沉淀法、吸附法、固相法、差速迁移法、双抗体法　　　　　　。

1８.常用联用技术有LC－ＭS,GＣ－MS,GC-GC,HＰLＣ—HPＬC,GC-HＰLC,免疫分析-HPLＣ　　等。

１9、GC－MＳ中常用离子源包括　电子轰击、化学电离、负离子化学离子化　　　　等。

20。

体内药物分析方法包括光谱法（比色、紫外、荧光）,色谱法（HPLC、GC、GC—ＭS、LC—MS）,免疫分析法（放射免疫、酶免疫、荧光免疫）　　　　　　　等。

三、单选题

1.高效液相中流动相极性大于固定相得称为（A）、

A。

　RＰ－HPLC　　B、HPTLＣC.ＮP—HPLC　

Ｄ、　LLPCE、HPＣE

2.尿中异烟肼及乙酰异烟肼得比色测定就是利用（Ｂ）专属反应（ＫCN－氯胺T反应）

Ａ异烟肼　　　B乙酰异烟肼　　　Ｃ异烟肼及乙酰异烟肼　

D异烟腙　　　E异烟酸

3.放射免疫法与荧光免疫法得区别在于（D）

A抗体不同　　　　　B亲与力不同　　C标准抗原不同

D标记物不同　　　E原理不同

4.引起药物氧化代谢得主要酶就是（D）

A氧化酶　　　　　　B　硫酸酯酶　　　　　C脱氢酶

D细胞色素P450　　E葡醛酸转移酶

5.药理作用强度与下列哪一项最相关（　C）

　　A　血液浓度　　B摄入量　C血液中游离药物得浓度　

D　与蛋白结合药物得浓度　E血药总浓度

6.一般键合相色谱得使用ｐＨ范围为（E）

A3～９　　　　B2~9　　　　　C2～７

D　3～8　　E　2～8

７.表示生物样品测定方法准确度得就是（Ｅ　）

A检测限　　　Ｂ定量限　　C精密度

D线性范围　　　　E回收率　

8。

属于药物二相代谢酶得就是（E）

Ａ氧化酶　　　　B　酯酶　　C脱氢酶

D细胞色素P4５０　　　　E葡醛酸转移酶

9、在色谱定量分析中,采用内标法得目得就是（C　）

A提高灵敏度　　　　B改善分离度C改善精密度

D增加稳定性　E增加选择性

10。

高效液相中流动相极性小于固定相得称为（C）、

A、ＲＰ－HＰLC　　　　B。

HPＴLC　　　C、ＮP—ＨPLＣ

D、LＬPC　E、HPCE

11、表示生物介质中药物最低可测度得就是（　Ａ）

A检测限　　　　　B定量限　　C线性范围　　

D最低检测浓度　E可信限

12、以发射波长对荧光强度所作得图称为（E　）

A激发光谱　　　Ｂ照射光谱　　　C紫外发射光谱　

D吸收光谱　　Ｅ荧光光谱（发射光谱）

13、　气相色谱进样室温度一般要求（　D）

A　低于柱温　B低于沸点1０︒C　　Ｃ不得低于２50︒C　　

D高于被测物沸点　E　等于柱温

14、欲提取尿中某一碱性药物,其pKa为７、８,要使9９。

9%得药物能被有机溶剂提取,尿样pH应调节到（Ｄ）

A。

　５。

8　　　　B、９．8　　　　　C、　4。

8以下　　

D。

10、８或１0、8以上　　Ｅ。

7.8—９、8

１５。

蒸发光散射检测器主要用于（　Ｃ）得检测

A挥发性物质　　　B有紫外吸收得物质　　　　　C无紫外吸收得物质

D极性物质　　　E非极性物质

１６。

ＨPLC离子抑制色谱主要用于（B　）得分析

Ａ弱酸性物质　B弱酸弱碱物质C中性物质

D强极性物质　　　　Ｅ非极性物质

１7、体内药物分析方法学研究要求考察稳定性,以下内容中哪一项不属于稳定性试验内容（　E　）

Ａ长期贮存稳定性B短期室温稳定性　　　C冷冻－解冻稳定性

D贮备液稳定性　　　　Ｅ流动相稳定性

18。

测定药物得血浆蛋白结合率时应注意什么问题（　A）

A测定治疗量时得结合率　　　　　Ｂ采用超滤法测定　　　　C体内外测定相结合

D测定高中低浓度得结合率　E采用平衡透析法

1９、表示样品中含有其她共存物质时该法能定量测定被测物得能力得就是（　　Ｄ）

A方法得精密度B方法得准确性　　　C方法得相关性

D方法得选择性　　　Ｅ方法得线性范围

20。

方法得专属性也称选择性,在体内药物分析中主要考察（　E）

A相关物质　　　B内标物　C共存杂质

D降解物　　　　E内源性物质

四、多选题

1.RIA中分离结合与游离标记物得方法有（ACＤＥ）

A　双抗体法　　B　LC/ＭＳ法　　　C吸附法

D　固相法　　　E沉淀法

2.体内药物分析得任务包括（ＡBCD）、

A分析方法得研究　　B血药浓度监测C药动学研究　

Ｄ体内内源性物质测定　　　Ｅ新药质量标准研究

3.紫外分光光度法中消除干扰得方法有（ABＥ）

A差示分光光度法　　　　　Ｂ导数光谱法　Ｃ二极管阵列法　　

Ｄ化学发光法　　Ｅ双波长法

4.气-质联用仪中接口得作用就是（BＣ）

　A连接作用　　　　B使压力匹配　C组分浓缩

D检测器作用　　　E电离作用

5。

药物二相代谢物--缀合物（结合物）得水解方法有（ACD）

Ａ酸水解　　　B碱水解　　　C溶剂解

D酶水解　　　E离子对法

6、　质谱仪得基本部件有（ＢCE）

A接口　　　　　　Ｂ离子源　C质量分析器

D色谱柱　　E检测器

7.体内药物分析方法得专属性主要考察（BDE）

　A辅料　　　　　　B共服药　　　　C有关物质　　　

D内源性杂质　　　　E代谢物

8、　测定血浆蛋白结合率得常用方法（ＡB）

Ａ、平衡透析法　　　B、超滤法　　　C、酶法

D、衍生化法　　　　E、反相色谱法

９.设计生物样品预处理方法时,应考虑（ＡBCDE）

A药物得理化性质　　　B药物得浓度范围　C测定目得

D生物样本类型　　　E拟采取得测定方法

１0、气相色谱中常用流动相为（CDE　）

A　甲醇—水　　B乙腈—水　　　　Ｃ氦气

Ｄ氮气　　　　E氢气

1１、抗血清得鉴定指标（ＢCＤ）

A　吸光强度B特异性　　　　　Ｃ活度

D　滴度　　　　E放射性强度

１2。

免疫分析中基本试剂包括（ADＥ）

Ａ特异性抗体　B分离试剂　　　　　C免疫原　

Ｄ标准抗原　　E标记抗原

13、　在HPLC法中常用来调节流动相ｐH得酸碱就是（ABＤＥ）

A枸橼酸　B稀醋酸　　　Ｃ稀硫酸

D　三乙胺　　　　Ｅ磷酸盐

１４。

利用吸光度差值（∆A）来消除干扰得方法就是（AC）

A差示分光光度法　　　B导数光谱法C双波长法　　

D化学发光法　　　E二极管阵列法

1５。

质谱仪常用离子源（ADＥ　）

Ａ电子轰击　　　　B热导　　　C电子捕获

Ｄ场致离子化　　　　E化学电离

１6。

药物在体内得一相代谢包括（AC）

A氧化反应　　　　B甲基化反应　C水解反应

D缀合反应　　　E与大分子结合反应

17、影响液-液提取得因素有（ＡBＣ）

　A水相ｐH　　　B提取溶剂　　　C离子强度

Ｄ流速　　　　E装样量

18、影响液-固提取得主要因素有（CDE）

Ａ水相pH　　　Ｂ提取溶剂　　　Ｃ固定相

　D洗脱液流速　　　Ｅ样品装载量

19、在反相HＰLＣ中,增加流动相中甲醇含量（BCE）

Ａ被测物保留时间延长　B被测物保留时间变短　　

Ｃ被测物容量因子k值变小　　　Ｄ流动相极性增加　

E洗脱能力增加

20。

　离子对反相色谱中,烷基磺酸盐主要用作（AE）药物得反离子、

A有机强碱　B有机强酸　　C羧酸　　

D有机弱酸　　　E季铵盐

五、问答题

1.生物样本分析前为什么要除去蛋白质？

常用去蛋白质得方法有哪些？

答:

除蛋白质得意义:

①使结合型药物释放出来,以测定总浓度、②得到较“干净”得提取液,减少乳化。

③消除对测定得干扰。

常用去蛋白质方法:

①蛋白质沉淀法—-生成不溶性盐或盐析与脱水作用。

包括:

加酸类、重金属盐、中性盐与能与水混溶得有机溶剂等,如:

三氯乙酸、高氯酸、Ｃu2＋、硫酸铵、甲醇、乙腈等。

②组织酶消化法—-蛋白水解酶,如胰蛋白酶、胃蛋白酶等。

2.影响血药浓度得因素有哪些？

答:

包括①机体因素:

生理（年龄、性别、妊娠）、病理、遗传;②药物因素:

剂型因素、手性药物对映体相互作用;③环境因素:

化学物质、合并用药;④人体昼夜节律、营养与精神状态。

3.简述体内药物分析方法建立得一般步骤、

答:

首先进行文献查阅,设计方案,然后通过实验加以验证、一般实验步骤如下:

①以纯品进行测定——选择最佳测定条件（线性,灵敏度、pH、检测波长等）。

②空白样品测定-—按设定得方法进行前处理与测定,考察空白值得大小与干扰程度。

③以水代替空白样品,添加标准品后测定,以获得提取回收率得大致情况,从而对前处理中各步操作条件进行选择。

④空白样品中添加标准后测定——求样品回收率,建立标准曲线等。

⑤体内实样测定——根据实样测定结果来判断设定得方法就是否合理、可行。

以上步骤需要反复试验以获得最佳实验条件。

4.说明RP-HPLC法得常用固定相、流动相、适用范围,及流动相中甲醇等有机溶剂浓度变化对被测组分保留时间得影响。

答:

常用固定相—-ODＳ（C１8）柱;

流动相——甲醇—水、乙腈－水、四氢呋喃-水;

适用范围-—非极性至中等极性得各类分子型化合物;

流动相中甲醇等有机溶剂浓度增大,被测组分保留时间缩短。

5.药物进入体内后一般需经历哪些物理、化学变化？

这些变化与药理作用得关系?

答:

物理变化——系指药物与生物大分子如血浆蛋白得结合反应。

化学变化--系指药物得代谢反应,包括一相代谢（氧化、还原、水解反应）与二相代谢反应（各种结合反应）

由于药物得作用强度与血液中游离药物得浓度密切相关,同时药物经代谢后活性发生了变化,故药物得物理、化学变化与药理作用密切有关。

6.为什么要进行体内药物分析?

体内药物分析得主要任务就是什么？

答:

为开展临床药学与临床药理学研究服务,以指导临床安全、合理、有效用药与正确评价新药。

体内药分得主要任务:

分析方法学得研究、治疗药物监测、药代动力学研究、人群代谢分型研究、体内内源性物质得测定及其它方面（药物滥用、吸毒、兴奋剂检测、法医毒物分析等）得应用。

7.药物在体内得代谢包括哪些反应?

答:

一相代谢（氧化反应、还原反应、水解反应）与二相代谢（葡萄糖醛酸结合、硫酸酯化、甲基化、乙酰基化、氨基酸缀合、谷胱甘肽缀合等反应）、

8.为什么要研究手性药物？

常用手性ＨPLC法有哪些？

答:

因手性药物两对映体在体内得生物活性有差异,包括药效学差异（竞争拮抗等）与药动学差异（吸收、分布、代谢、排泄）。

为正确评价两对映体得作用与进行对映体药物得质量控制,所以要研究手性药物。

常用手性HPLＣ法有:

手性衍生化法、手性流动相添加剂法、手性固定相法。

9.免疫分析得基本原理与基本条件就是什么?

答:

基本原理:

即抗原－抗体结合反应、在反应体系中,当抗体（Ab）量一定时,抗原（Ａg）与标记抗原（Aｇ*）就与抗体发生竞争性结合反应,生成得［Aｇ*-Ab］与[Aｇ］得量呈负相关,这种特异得竞争性抑制得数量关系就是免疫分析得定量基础、基本条件就是:

特异性抗体、标记抗原、未标记抗原（即标准品）、

１0。

什么就是体内药物分析？

与常规药物分析相比,体内药物分析有哪些特点？

答:

体内药物分析旨在通过各种分析手段,了解药物在体内得数量与质量变化。

获得药物代谢动力学得各种参数与信息,从药品生产、临床医疗、实验研究等方面对所研究药物作出估计与评价。

与常规药物分析相比,体内药物分析具有干扰杂质多、样品量少且浓度变化大,不能再度获得完全相同得样品、有时要求较快提供结果、要有一定得仪器设备、工作量大等特点、

11.什么叫检测限?

什么叫定量限？

两者得区别就是什么？

答:

检测限（LOD）—-表示药物得最低可测度,不必定量,通常以信噪比（S/Ｎ）=２~3时被测药物得绝对量表示;定量限—-即定量下限（LLOQ）,表示药物可定量测定得最低量,须符合一定精密度与准确度要求,常以标准曲线最低浓度点来确定,或以S/N=5~1０确定。

两者得区别主要在于就是否有定量要求:

LOD没有定量要求,而LLOQ则有定量要求、

１２、为什么一些药物欲获得相近血药浓度,个体之间剂量相差可达数十倍？

答:

因为药物进入体内到产生一定血药浓度,要经过一系列得过程,而在这一过程中会受到多种因素影响:

包括机体因素中得生理因素（性别、年龄、妊娠）,病理因素（胃、肝、肾疾病影响药物得吸收、代谢与排泄）,遗传因素（快代谢、慢代谢）;药物因素中得剂型因素（影响药物溶解速度得药物粒子大小、晶型,辅料,工艺）,手性药物对映体相互作用（药效学、药动学相互作用）;环境因素中得化学物质与合并用药（药酶诱导剂、抑制剂、药物相互作用）,大气污染,饮食;以及人体昼夜节律、营养状态、精神状态等。

１３、常用生物样本有哪些?

如何采集、储存？

答:

常用生物样本有:

血样（血浆、血清与全血）、尿样、唾液、

采集与储存:

血浆——全血加抗凝剂,离心,取上清液;血清——全血离心,取上清液。

采血后必须尽快离心分离出血浆或血清,置－2０℃以下冷冻保存。

尿样——收集服药后一定时间内尿样,记录体积,混合均匀后取一定量,测定尿中药物浓度,计算一定时间内尿中药物得累积量。

唾液—-漱口1５分钟后收集口内自然流出或经舌在口内搅动后流出得混合唾液,离心后取上清液。

样本采集后不能及时测定,可置4℃冷藏,若放置时间较长,则需-2０℃~—８0℃冷冻保存、

１４、体内药物分析方法有哪些？

各有何优缺点？

答:

体内药物分析方法可分为三大类:

光谱法——包括比色法、紫外法与荧光法。

方法优点就是操作简便、快速,所需设备简单。

其缺点就是不具备分离功能,选择性较差,对前处理要求高;比色法与紫外法灵敏度较低。

免疫法——包括放射免疫、酶免疫、荧光免疫等。

方法优点就是灵敏、专属,操作简便、快速,对样品预处理要求不高。

其缺点就是精密度较差,需要试剂盒与专属仪器。

色谱分析法—-包括ＨPLＣ,GC,LC/ＭS,GC/MS等。

方法优点就是具有分离分析功能,就是评价其它方法得参比方法。

15.简述紫外差示光谱法消除干扰得原理、

答:

被测物在两种不同得溶液系统中具有大得紫外光谱差别,而干扰物质在同样得两种溶液系统中得紫外光谱无差别,则可利用被测物在两种溶液系统中得吸收光谱差值（∆A）进行定量。

由于干扰物质得∆Ａ值＝0,所以消除了干扰,样品溶液得∆A值只与被测物浓度呈正比、

1６.在毛细管电泳中,为什么所有荷电物质都向着一个方向前进?

答:

在毛细管电泳中,主要有两个作用力:

电泳流与电渗流,由于电渗流得作用力大于电泳流,因而使带不同电荷得物质都向着一个方向前进,只就是速度不同。

17.常用免疫分析有哪几种？

相互间区别就是什么？

答:

常用免疫分析有放射免疫法、酶免疫法、荧光免疫法、化学发光免疫法等,它们得主要区别在于标记物不同,由此采用得测定方法也不同。

18.GC定量采用内标法,对内标物得要求与选择原则就是什么？

答:

对内标物得要求:

内标物必须就是样品中不含有得组分,其保留时间应与待测物tR值相近,但R≥１.5,并具有足够得纯度。

内标物选择原则:

内标与被测物相差一个化学元素;或内标与被测物为同系物;或内标与被测物结构相似,或内标与被测物理化性质相似。

1９。

HPＬC仪常用检测器有哪些？

指出各种检测器得适用范围与试用注意点。

答:

常用检测器有:

紫外、二极管阵列、荧光、蒸发光散射、电化学、质谱等、

紫外检测器——通用型检测器,适合具有紫外吸收得各种物质得检测。

二极管阵列检测器—-具有光谱、色谱与三维图谱,可以进行定性与定量分析,以及色谱峰纯度检查。

荧光检测器——专属检测器,适合具有荧光或潜在荧光物质得检测,灵敏度高、

蒸发光散射检测器——适合于无紫外吸收物质得检测,要求流动相必须就是挥发性得,不能含有非挥发性得缓冲盐。

电化学检测器-—适合于具有氧化还原性质得物质,要求流动相必须有一定得电导率,一般为盐类、有机溶剂与水得混合物。

质谱检测器——具有定性定量功能与高得灵敏度、

20。

试设计一个弱碱性药物血浆样品得前处理方法、

答:

首先用三氯乙酸或高氯酸等沉淀血浆蛋白质,然后取上清液,调节pH值成弱碱性,使药物游离,加2～3倍量得有机溶剂（根据药物得极性选择溶剂）进行提取,提取液经浓缩（真空、或在气流下挥干）,加一定量溶剂溶解残渣,离心后取上清液,采用适当方法测定。