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高效液相色谱法测定注射用黄芩茎叶总黄酮中野黄芩苷含量
【编者按】医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果
的论说性文章。
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求，解决您在论文写作中的难题。
高效液相色谱法测定注射用黄芩茎叶总黄酮中野黄芩苷含量
作者：
李国军，毛晓霞，苏占辉，刘玉翠，陈四平
【摘要】目的测定注射用黄芩茎叶总黄酮中野黄芩苷的含量。
方法高效液相色谱
法。
结果野黄芩苷进样量在0.91～4.55g范围内，峰面积积分值与进样量有良好的线性
关系，r=0.9999，平均加样回收率为99.23%，RSD=2.21%。
结论该法可以用于该药的
质量控制。
【关键词】注射用黄芩茎叶总黄酮野黄芩苷高效液相色谱法
1
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黄芩茎叶为唇形科植物黄芩ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥地上部分,其有效部位
为黄芩茎叶总黄酮（totalflavonoidsfromstemsandleavesofScutellariabaicalensisGeorgi,
SSF），其化学成分主要包括野黄芩苷、黄芩苷、芹菜素苷、白杨素-7-O--D-葡萄糖醛
酸苷等黄酮类化合物。
其中野黄芩苷具有清热解毒、扩张血管、改善体内微循环等明
显药理活性[1]。
药理学研究发现黄芩茎叶总黄酮具有较强的抗病毒、抗炎、抗氧化、
降血脂和较强的记忆改善作用[2～4]。
为了有效地发挥黄芩茎叶的药用价值，方便急诊
及不能口服药物的病人，我们将黄芩茎叶有效成分精制纯化，研制了注射用黄芩茎叶
总黄酮。
本实验通过建立HPLC法测定注射用黄芩茎叶总黄酮中野黄芩苷含量的方法
来控制制剂的内在质量。
1仪器与试药
1.1仪器Shimadzu10ATvp高效液相色谱仪，CLASSvp5.0色谱数据工作站，瑞士产
梅特AG-245型电子分析天平，惠普HP-8453紫外可见分光光度计，KQ-100E型超声
波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
1.2试药野黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号110842-200504），注射用
黄芩茎叶总黄酮（承德医学院中药研究所研制）。
2
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2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱为DiscoveryC18（4.6mm250mm,5流动相为以甲醇-0.1%甲酸
溶液进行梯度洗脱，0～30min由40%的甲醇的0.1%甲酸溶液增加到70%甲醇的0.1%
甲酸溶液;流速0.8ml/min;检测波长335nm;柱温26℃;进样量10l。
2.2检测波长的选择将野黄芩苷对照品溶液进行光谱扫描，结果最大吸收波长为335
nm，故选择335nm为检测波长。
2.3对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷减压干燥器中干燥24h的野黄芩苷对照
品22.75mg至50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液
（0.455mg/ml），备用。
精密吸取上述溶液5ml至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，
摇匀;作为对照品溶液（0.2275mg/ml）。
2.4供试品溶液的制备取黄芩茎叶总黄酮冻干粉10mg,精密称定，置10ml量瓶
中，加甲醇适量，超声处理20min使溶解，放冷，补加甲醇至刻度，摇匀，放置，取
上清液用微孔滤膜（0.45m）滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
2.5空白试验按照样品制备工艺，制成不含黄芩茎叶总黄酮成分的空白冻干粉针，作
为阴性对照，同法测定。
结果空白冻干粉在与野黄芩苷对照品相同保留时间处无色谱
3
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峰，故认为无干扰。
2.6线性关系考察精密吸取浓度为0.455mg/ml的野黄芩苷对照品储备液2，4，6，
8，10l依次注入色谱仪中，在前述色谱条件下，测定野黄芩苷的峰面积，结果见表
1。
以进样量X（g）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准工作曲线，见图1。
回归
处理得直线方程为Y=5106X-351032，r=0.9999。
表1线性关系测定结果（略）x
【摘要】目的测定注射用黄芩茎叶总黄酮中野黄芩苷的含量。
方法高效液相色谱
法。
结果野黄芩苷进样量在0.91～4.55g范围内，峰面积积分值与进样量有良好的线性
关系，r=0.9999，平均加样回收率为99.23%，RSD=2.21%。
结论该法可以用于该药的
质量控制。
【关键词】注射用黄芩茎叶总黄酮野黄芩苷高效液相色谱法
黄芩茎叶为唇形科植物黄芩ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥地上部分,其有效部位
为黄芩茎叶总黄酮（totalflavonoidsfromstemsandleavesofScutellariabaicalensisGeorgi,
SSF），其化学成分主要包括野黄芩苷、黄芩苷、芹菜素苷、白杨素-7-O--D-葡萄糖醛
酸苷等黄酮类化合物。
其中野黄芩苷具有清热解毒、扩张血管、改善体内微循环等明
显药理活性[1]。
药理学研究发现黄芩茎叶总黄酮具有较强的抗病毒、抗炎、抗氧化、
降血脂和较强的记忆改善作用[2～4]。
为了有效地发挥黄芩茎叶的药用价值，方便急诊
及不能口服药物的病人，我们将黄芩茎叶有效成分精制纯化，研制了注射用黄芩茎叶
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总黄酮。
本实验通过建立HPLC法测定注射用黄芩茎叶总黄酮中野黄芩苷含量的方法
来控制制剂的内在质量。
1仪器与试药
1.1仪器Shimadzu10ATvp高效液相色谱仪，CLASSvp5.0色谱数据工作站，瑞士产
梅特AG-245型电子分析天平，惠普HP-8453紫外可见分光光度计，KQ-100E型超声
波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
1.2试药野黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号110842-200504），注射用
黄芩茎叶总黄酮（承德医学院中药研究所研制）。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱为DiscoveryC18（4.6mm250mm,5流动相为以甲醇-0.1%甲酸
溶液进行梯度洗脱，0～30min由40%的甲醇的0.1%甲酸溶液增加到70%甲醇的0.1%
甲酸溶液;流速0.8ml/min;检测波长335nm;柱温26℃;进样量10l。
2.2检测波长的选择将野黄芩苷对照品溶液进行光谱扫描，结果最大吸收波长为335
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nm，故选择335nm为检测波长。
tips:
感谢大家的阅读，本文由我司收集整编。
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短柄南蛇藤茎普通粉与超微粉的挥发性成分对比研究
作者：
霍昕，丁丽娜，刘建华，高玉琼，刘文炜
【摘要】目的研究短柄南蛇藤中的挥发性成分。
方法利用有机溶剂-水蒸气蒸馏提
取短柄南蛇藤茎普通粉和超微粉挥发油，采用GC-MS进行测定，结合计算机检索技术
对分离化合物进行结构鉴定，应用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。
结果从短柄南蛇藤茎普通粉和超微粉中分别分离鉴定出9种和21种化学成分，分别占
挥发油总量的95.960%和97.518%。
短柄南蛇藤叶两种粉末挥发油成分中，含有9种相
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同成分，其中含量最高的为油酸（普通粉56.711%，超微粉56.988%）。
结论该文首次对
短柄南蛇藤茎普通粉与超微粉的挥发性成分进行对比研究。
【关键词】短柄南蛇藤茎普通粉短柄南蛇藤茎超微粉挥发性成分气相色谱-质谱
联用技术
Abstract：
ObjectiveTostudythechemicalconstituentsofvolatileoilfromCelastrus
rosthornianusLoes.MethodsThechemicalcompositionsofthevolatileoilfromtheplants
obtainedbyOrganic-teamdistillationwithhexanewereanalyzedbyGC-MS.The
constituentswereidentifiedbytheirmassspectra.Therelativepercentageoftheoil
constituentswascalculatedfromtheGCpeakareas.Results9and21chemicalcomponents
areidentifiedfromordinarypulverizationandmicro-millingofthestemsofCelastrus
rosthornianusLoesrespectively.Theamountoftheidentifiedcomponentswereaccountedfor
morethan95.960%and97.518%ofallthevolatileoilrespectively.Therewerethesameof9
componentsinthetwooils.Olenolicacidhadthehighestcontent（ordinarypulverization
56.711%，micro-milling56.988%）.ConclusionThispaperreportsthecomparisonofvolatile
constituentsfromthestemsofCelastrusrosthornianusLoesforthefirsttime.
Keywords：
OrdinarypowderofthestemsofCelastrusrosthornianusLoes;Micro-milling
ofthestemsofCelastrusrosthornianusLoes;Volatileoil;GC-MS
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短柄南蛇藤CelastrusrosthornianusLoes为卫矛科南蛇藤属植物，生于山坡、路旁草
丛和灌丛中，分布于陕西、浙江、福建、湖北、广东、广西、四川、贵州、云南等
地。
其根、茎叶、果实等均可入药。
短柄南蛇藤茎味辛、苦，性平、小毒，功效为祛
风除湿，活血止血，解毒消肿，主治风湿痹痛，跌打损伤，脘腹痛，牙痛，疝气痛，
月经不调，经闭，血崩，肌衄，疮肿，带状疱疹，湿疹[1]。
文献资料[2～5]表明，对
短柄南蛇藤的研究主要集中在根皮及藤茎的化学成分和抗肿瘤、杀虫活性方面，对短
柄南蛇藤茎挥发性成分及其对比研究的报道较少。
本文首次利用简便的有机溶剂-水蒸
气蒸馏法提取短柄南蛇藤茎的挥发油,对其化学组成进行了定性定量的研究，并对其普
通粉与超微粉进行对比分析。
1仪器与材料
1.1仪器
挥发油提取器;美国惠普公司（HcwlcttPackard）HP-6890/HP5973GC-MS气质联用
仪;SYFM-8Ⅱ型超微粉碎机（济南松岳机器有限责任公司）。
1.2试剂与材料蒸馏水、正己烷（重蒸馏）、无水硫酸钠（国产分析纯试剂）。
短柄南蛇
藤茎普通粉（80目）、短柄南蛇藤茎超微粉（300目），来自贵州镇远，经贵阳中医学院孙
庆文老师鉴定为卫矛科植物短柄南蛇藤CelastrusrosthornianusLoes的干燥藤茎。
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2方法
2.1短柄南蛇藤挥发油的提取
分别取短柄南蛇藤茎普通粉与超微粉各20g，于磨口烧瓶中，加2000ml蒸馏水及
适量正己烷，采用《中国药典》挥发油提取装置[6]提取，收集上层油状物，用无水硫
酸钠干燥作为供试品。
2.2短柄南蛇藤茎普通粉与超微粉挥发性成分定性定量分析
取短柄南蛇藤茎普通粉与超微粉提取物各1l，进样，用GC-MS仪器进行分离测
定。
2.3气相色谱-质谱条件
2.3.1气相色谱条件HP-5MS5%PhenylMethylSiloxane（30m250m0.25m）弹性石英
毛细管柱,柱温50℃，保留2min，以4℃min-1升温至280℃，保持2min;汽化室温度
250℃;载气为高纯度氦气（99.999%）;柱前压7.62Psi;流速1.0ml/min;进样量1分流比
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40∶1。
2.3.2质谱条件离子源为EI源;离子源温度230℃;四级杆温度150℃;电子能量70eV;
发射电流34.6倍增器电压2013V;接口温度280℃;溶剂延迟4min;质量范围10～500
amu。
2.4定性与定量分析
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2.3对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷减压干燥器中干燥24h的野黄芩苷对照
品22.75mg至50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液
（0.455mg/ml），备用。
精密吸取上述溶液5ml至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，
摇匀;作为对照品溶液（0.2275mg/ml）。
2.4供试品溶液的制备取黄芩茎叶总黄酮冻干粉10mg,精密称定，置10ml量瓶
中，加甲醇适量，超声处理20min使溶解，放冷，补加甲醇至刻度，摇匀，放置，取
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上清液用微孔滤膜（0.45m）滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
2.5空白试验按照样品制备工艺，制成不含黄芩茎叶总黄酮成分的空白冻干粉针，作
为阴性对照，同法测定。
结果空白冻干粉在与野黄芩苷对照品相同保留时间处无色谱
峰，故认为无干扰。
2.6线性关系考察精密吸取浓度为0.455mg/ml的野黄芩苷对照品储备液2，4，6，
8，10l依次注入色谱仪中，在前述色谱条件下，测定野黄芩苷的峰面积，结果见表
1。
以进样量X（g）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准工作曲线，见图1。
回归
处理得直线方程为Y=5106X-351032，r=0.9999。
表1线性关系测定结果（略）
结果表明野黄芩苷进样量在0.91～4.55g范围内，峰面积积分值与进样量有良好的线
性关系。
2.7精密度实验精密吸取野黄芩苷对照品溶液（0.2275mg/ml）10l，连续进样6次，
记录对照品峰面积依次为10527733，10519059，10419713，10553602，10523
716，10630278，测定结果RSD为0.64%,表明精密度良好。
2.8稳定性实验精密吸取同一供试品溶液10l，于制样后0，2，4，8，24h连续进样
测定，峰面积分别为10589059，10823828，10499713，10533653，10714625，测
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定结果RSD为1.27%，表明供试品溶液在室温条件下24h内稳定。
2.9重复性实验取同批样品（批号080718）5份，按样品含量测定项下依法平等操作，
测定每份样品中野黄芩苷含量分别为0.221,0.214,0.219,0.229,0.218mg/mg，测定结果
RSD为2.52%。
2.10加样回收率实验取6份已知野黄芩苷含量的供试品5mg（批号080718，平均含
量为0.220mg/mg），精密称定，各精密加入野黄芩苷储备液（0.455mg/ml）3ml，按供试
品溶液制法制备，依法测定，计算加样回收率，结果平均回收率为99.23%，RSD为
2.21%。
结果见表2。
表2野黄芩苷回收率实验（略）
2.11样品中野黄芩苷的含量测定精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10l，分别进
样测定，色谱图见图2，以外标法计算注射用黄芩茎叶总黄酮中野黄芩苷的含量。
测定
3批，每批测定3份。
结果见表3。
表3样品中野黄芩苷含量（略）
3讨论
本文采用HPLC法对注射用黄芩茎叶总黄酮中主要成分野黄芩苷进行含量测定，通
过加样回收率及精密度实验，证明该方法简便、准确、可靠，可以用于控制该药制剂
的内在质量。
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通过对不同批次样品含量测定结果，建议注射用黄芩茎叶总黄酮中野黄芩苷含量应
不低于0.200mg/mg。
【参考文献】
[1]国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册[M].北京：
人民卫生出版
社，1986:
946.
[2]MoorePB,DayJP,TaylorGA,etal.Absorptionofaluminium26inAlzheimer’s
disease,measuredusingacceleratormassspectrometry[J].DementGeriatrcognDisord,2000,
11
（2）:
66.
[3]ShangYZ,GongMY,ZhouXX,etal.ImprovingeffectsofSSFonmemorydefectsand
pathologicalchangesofneuralandimmunologicalsystemsinsenescentmice[J].Acta
PharmarcolSin,2001,22（12）:
1078.
[4]周晓霞，李素婷，周晓慧，等.黄芩茎叶总黄酮抗炎作用实验研究[J].中国中医药信
息杂志，2000,7（4）:
27.
13
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