质量检验方法验证管理规定.docx
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质量检验方法验证管理规定
检验方法验证管理规程
一.目的：
制定质量检验方法验证管理规定，明确质量检验方法验证容，规对新开发的检验方法、药典或客户提供的检验方法[检验方法仅限于气相色谱法（GC）、高效液相色谱法（HPLC）]需进行的可行性及适用性的验证程序，确保检验方法、转移应用的检验方法有效、正确实施。
二.围：
适用于对开发和新建立的分析方法、药典方法及客户提供的方法转移应用进行验证。
三.职责：
中心化验室对本规程的执行负责。
四.容：
1.引用标准
根据ICH的GMP指南要求、中国药典2010年版及中国制药企业GMP指南要求而制定。
2.验证容
2.1新开发的检验方法的转移应用确认
2.1.1选择性（或专属性）
选择适当的仪器、试剂（包括仪器型号、GC或HPLC色谱柱，流动相配比等）使原料药生产工艺中可能存在的杂质（包括原料，中间产品，前体及降解产物）与成品较好地分开，并确保主成份峰中没有其他干扰物质峰存在，必要时可采用二极管阵列检测器或质谱对组分的单一性进行评价和确认。
2.1.2精密度
2.1.2.1系统精密度
通过对单个测定值与平均值之间的偏差程度来衡量系统的误差。
对同一均匀的样品溶液或标准品溶液，连续重复进样六次，记录每次进样后各组分的响应，峰面积或峰高，计算各响应值与平均值之间的偏差——相对标准偏差RSD。
2.1.2.2方法精密度
通过测定样品含量与真值（平均值）的偏差程度来衡量样品制备过程（包括称量，稀释）中的误差。
分别对同一批号的样品称量六次，按含量测定方法测定其含量，计算每一单一含量与平均含量之间的相对标准偏差RSD，除另有规定外通常RSD≤2.0%。
2.1.2.3中间精密度
2.1.2.3.1按验证确定的方法，同一人用同一仪器检测三批样品，每间隔24小时以上，测定一次，共测定3次。
2.1.2.3.2由两人使用不同的仪器分别检测同三批样品。
2.1.3方法的线性围
2.1.3.1在含量测定浓度的80～120%选择五个不同的浓度点，每一个浓度需测定二次，记录各对应浓度下的相应响应值（峰高，峰面积或峰面积的比值），以衡量样品量与检测器响应间的线性对应关系。
2.1.3.2接受标准：
相关系数r＝0.99～1.00
2.1.3.3在HPLC法有关物质测定时，测定浓度从总杂质120%至LOQ浓度选取五个点，每个浓度点测定二次。
GC法残留溶剂测定时，测定浓度从残留溶剂限度的120%至LOQ浓度选取五个点，每个浓度点测定二次。
2.1.4方法的准确度
衡量该方法的实测结果与真实值的吻合程度，即方法的回收率。
2.1.4.1取已知浓度的样品（浓度围为含量测定浓度的80%、100%、120%）各三份，每份进样测定三次，计算该方法的百分回收率。
2.1.4.2用HPLC法进行有关物质测定准确度试验，取杂质的LOQ、50%、100%、120%浓度四个点（也可根据产品质量情况选择其他点），每个浓度点测定三次。
计算百分回收率。
2.1.4.3GC法残留溶剂准确度试验，取残留溶剂限度的LOQ、50%、100%、120%四个浓度点（也可根据产品质量情况选择其他点）溶液，若样品测定浓度值低于限度值的10%时，应增加测定限度的10%的浓度点溶液。
加入样品中，每个浓度点测定三次，计算扣除样品浓度后的百分回收率。
2.1.5最小检测限
2.1.5.1仪器能检测到样品中各组分的最低检测浓度，不需定量。
2.1.5.2操作
在仪器系统性实验符合检测要求的条件下，测定三次空白样品，洗脱时间需用覆盖整个样品中所有组分的流出。
计算平均噪声水平。
根据产品检验规程规定的检测浓度配制梯度浓度，单针进样。
当信噪比为3.0±1.0，确定该浓度为待确定的最小检测限。
将该浓度溶液重复进样三次，若三次所得图谱的信噪比均为3.0±1.0，则确定该浓度为最小检测限。
2.1.6最小定量限
2.1.6.1能够重复的、准确的测量峰面积（相当于供分析物）的进样量。
峰高等于噪声高的10.0±1.0。
2.1.6.2操作：
按检测限方法测定仪器的平均噪声，按最小检测限操作方法操作，将按信噪比为10.0±1.0的浓度定为最小定量限。
2.1.7方法耐用性（仅在新开发的方法的第一次验证时进行）
HPLC法，方法耐用性要求进行改变流动相比例和流动相PH值的测试，主要考察原料药生产工艺中可能存在的杂质（包括原料中间产品、前体及降解产物）与成品主峰的分离度达到要求，并确保成品主峰中没有干扰峰存在，同时观察杂质峰的出峰顺序是否发生变化。
GC法，方法耐用性要求进行改变柱温和载气流速测试，主要考察所有残留溶剂峰之间的分离度是否仍达到标准要求。
2.1.8溶液稳定性
HPLC法，将配制好的溶液每隔半小时进样一次，连续进样5次（即放置两小时），比较含量和有关物质的变化。
2.2药典、客户提供的检验方法的转移应用确认
2.2.1方法选择性
选择适当的仪器、试剂（包括仪器型号、GC或HPLC色谱柱，流动相配比等）使原料药生产工艺中可能存在的杂质（包括原料，中间产品，前体及降解产物）与成品较好地分开，并确保成品峰中没有其他干扰物质峰存在，必要时可采用二极管阵列检测器或质谱对组分的单一性进行评价和确认。
2.2.2系统适应性
按药典方法及客户方法规定操作。
2.2.3系统精密度、中间精密度、最小检测限、最小定量限、耐用性、溶液稳定性六项分别按2.1.2.1、2.1.2.3、2.1.5、2.1.6、2.1.7及2.1.8操作。
4.3中间产品分析（面积归一化法）的方法验证
2.3.1选择性
选择适当的仪器、试剂（包括仪器型号、GC或HPLC色谱柱，流动相配比等）使原料药生产工艺中可能存在的杂质（包括原料，中间产品，前体及降解产物）与成品较好地
分开，并确保成品峰中没有其他干扰物质峰存在，必要时可采用二极管阵列检测器或质谱对组分的单一性进行评价和确认。
2.3.2系统精密度
通过对单个测定值与平均值之间的偏差程度来衡量系统的误差。
对同一均匀的样品溶液连续重复进样六次，记录每次进样后各组分的响应，峰面积或峰高，计算各响应值与平均值之间的偏差——相对标准偏差RSD。
2.3.3最小检测限
在仪器系统性实验符合检测要求的条件下，测定三次空白样品，洗脱时间需用覆盖整个样品中所有组分的流出。
计算平均噪声水平。
根据产品检验规程规定的检测浓度配制梯度浓度，单针进样。
当信噪比为3.0±1.0，确定该浓度为待确定的最小检测限。
将该浓度溶液重复进样三次，若三次所得图谱的信噪比均为3.0±1.0，则确定该浓度为最小检测限。
2.3.4最小定量限
按检测限测定方法测定仪器平均噪音，然后按信噪比等于10.0±1.0配制中间产品前一步主原料的样品溶液。
连续进样三次，计算组分的最小定量限。
2.3.5准确度
取常规检测浓度的150%、50%，检测所得含量，应与100%浓度所测含量SD≤2.0%。
2.3.6溶液稳定性
HPLC法，将配制好的溶液每隔1进样一次，连续进样5次（即放置5小时），比较含量和有关物质的变化。
2.4不同的检验项目在进行分析方法验证或分析方法确认时须进行的验证或确认容参考下表：
性能
参数
鉴别
含量
有关物质（定量）
有关物质（限度）
验证
确认
验证
确认
验证
确认
验证
确认
准确度
No
No
Yes
No
Yes
可能
No
No
精密度
No
No
Yes
可能
Yes
Yes
No
No
专属性
Yes
可能
Yes
可能
Yes
Yes
Yes
Yes
LOD
No
No
No
No
No
No
Yes
Yes
LOQ
No
No
No
No
Yes
Yes
No
No
线性
No
No
Yes
No
Yes
No
No
No
围
No
No
Yes
No
Yes
No
No
No
耐用性
Yes
Yes
Yes
Yes
Yes
Yes
Yes
Yes
注：
验证或确认时除参考上表外，还应根据产品的实物质量水平确定须进行验证或确认的项目容。
3.模板
进行检验方法验证或确认时，可参考下列模版形成验证或确认的方案和报告，也可根据客户的要求在下列模版的基础上进行修改。
3.1含量测试方法验证或确认模版（见附件1）
3.2有关物质测试方法验证或确认模版（见附件2）
3.3残留溶剂检测方法验证或确认模版（见附件3）
3.4检验方法验证或确认计划模板（见附件4）
4.注意事项
4.1在分析方法验证前，应确保分析仪器设备经过确认并处于其校验有效期。
4.2试验过程应详细记录,包括色谱条件，样品、对照品、所用试剂的来源，含量，称量值,稀释过程,简要操作方法,仪器型号，计算公式及结果，必要的数据统计等。
4.3已验证过的分析方法的任何修改都应当保存完整的记录，其包括修改的原因和相关数据说明，用来证明该修改后的方法和规定的方法同样准确可靠。
附件1：
含量测试方法验证或确认模版
1.目的：
2.方法来源：
3.验证所用仪器设备及色谱条件
3.1仪器设备
名称
型号
序列号
供应商
高效液相色谱
进样器
泵
检测器
色谱工作站
色谱柱
3.2测试条件
检测波长：
柱温：
流速：
进样量：
3.3溶液制备
3.3.1流动相的配制：
3.3.2空白（或稀释剂）：
3.3.3样品溶液的制备：
3.3.4标准品溶液的制备：
3.4验证所使用的试剂与标准品
名称
规格
批号
供应商
4.验证过程
4.1系统适用性
待仪器稳定后，进规定量的标准溶液，注入色谱仪，平行进样6次，记录色谱图。
进样次数
保留时间（min）
峰面积
1
2
3
4
5
6
平均值
RSD%
计算N=T=（除另有规定外RSD≤2.0%，T≤2.0）
4.2专属性
进空白溶液、标准溶液、如有必要配制含生产产品所用主原料、中间、副产物的测试溶液，并进样。
应证明以上物质不干扰被测物的测定个。
除另有规定外，其相邻组分分离度应不小于1.5。
名称
保留时间
分离度
4.3系统精密度（同系统适用性）
4.4方法精密度
用被测物质标准品定量称样并配制成相对浓度为80%、100%、120%三种测试溶液，每种溶液制备3份，每份溶液进样三次。
计算每个样品三次进样的平均峰面积及RSD；计算每个浓度点的3份溶液的含量及相应的RSD；计算每个浓度点的平均含量及3个点间相应的RSD。
除另有规定外RSD应≤2.0%。
数据填入下表中：
相对浓度
80%
100%
120%
称样
峰面积
测试1
测试2
测试3
平均值
RSD%
含量
RSD%
平均含量
RSD%
4.5线性
用被测物质标准品定量称样并配制成相对浓度为80%，90%，100%，110%，120%五种测试溶液。
每个样品进样2次，计算平均峰面积。
以样品平均浓度对相应平均峰面积做回归曲线，计算回归方程及相应的线性回归系数。
相关系数应0.999～1.00。
线性结果
浓度
相对浓度
峰面积1
峰面积2
平均峰面积
平均值
回归方程
相关系数
4.6准确度
同方法精密度。
计算每个样品溶液的平均含量，并计算3个浓度点的9个溶液的总平均含量值与大于95%的置信区间。
样品真实含量（100%）应包括在测试结果的大于95%置信区间。
数据填入下表中：
相对浓度
80%
100%
120%
称样
峰面积
测试1
测试2
测试3
平均值
含量
平均含量
SD
大于95%置信区间
真实含量
100%
注：
大于95%置信区间的计算公式：
X=2.628（SD/n1/2）
X：
样品的平均值SD：
样品的标准偏差
4.7中间精密度
按规程要求操作，数据填入下表：
测试条件
不同条件下含量结果
平均值
RSD%
日期
批号
第一天
第二天
第三天
人员和
仪器
批号
人员A（使用仪器1）
人员B（使用仪器2）
RSD除另有规定外应≤2.0%
4.8耐用性
4.8.1溶液稳定性（仅在新开发的方法的第一次验证时进行）
将制备好的标准品溶液和样品溶液每隔一小时进样一次，计算含量结果。
溶液放置时间
主峰保留时间
含量结果
1小时
2小时
3小时
4小时
5小时
平均值
RSD%
4.8.2分别调整流动相pH（±0.2pH）、流速（±50%）、柱温（±20%）检测同三批样品，计算含量结果的RSD%≤2.0%。
5.结论
附件2有关物质测试方法验证或确认模版
1.目的：
2.方法来源：
3.验证所用仪器设备及色谱条件
3.1仪器设备
名称
型号
序列号
供应商
高效液相色谱
进样器
泵
检测器
色谱工作站
色谱柱
3.2测试条件
检测波长：
柱温：
流速：
进样量：
3.3溶液制备
3.3.1流动相的配制：
3.3.2空白（或稀释剂）：
3.3.3样品溶液的制备：
3.3.4标准品溶液的制备：
3.4验证所使用的试剂与标准品
名称
规格
批号
供应商
4.验证过程
4.1系统适用性（如没有要求不需要进行）
按系统适用性溶液制备的要求进行制备，待仪器稳定后，进样。
计算R=T=（除另有规定外R≥1.5,T≤2.0）
4.2专属性
进空白溶液、被测杂质溶液、如有必要配制含生产产品所用主原料、中间产品、副产物及药物主成分的测试溶液，并进样。
应证明以上物质不干扰被测杂质的测定。
除另有规定外，其相邻组分分离度应不小于1.5。
名称
保留时间
分离度
4.3系统精密度（同系统适用性）
4.4最小检测限
进样品稀释剂溶液为空白，调整仪器了灵敏度，连续进样3次，记录在被测物出峰时间围的仪器噪音水平，计算平均噪声。
准确配制被测物质标准溶液，逐步稀释至一定浓度并进样，计算S/N，以S/N在3左右的样品浓度为最小检测限浓度。
类别
平行测定次数
平均噪声
噪声1
噪声2
噪声3
空白溶液
谱图号
类别
浓度（mg/ml）
进样次数
平均峰高
信噪比
检测限%
X1
（峰高）
X2
（峰高）
X3
（峰高）
杂质1
谱图号
4.5定量限
准确配制被测物质标准溶液，逐步稀释至一定浓度并进样，计算S/N，以S/N在10左右的样品浓度为最小检定量浓度。
类别
浓度（mg/ml）
进样次数
平均峰高
信噪比
定量限%
X1
（峰高）
X2
（峰高）
X3
（峰高）
杂质1
谱图号
4.6线性
用已知杂质标准品定量称样并配制成相对浓度为最小定量限浓度、50%、80%、100%、120%五种测试溶液。
每个溶液进样2次，计算平均峰面积。
以样品平均浓度对相应平均峰面积做回归曲线，计算回归方程及相应的线性回归系数。
相关系数应0.999～1.00。
线性结果
浓度
相对浓度
峰面积1
峰面积2
平均峰面积
平均值
回归方程
相关系数
4.7准确度（已知杂质标准品可得时用加样回收率来验证，当杂质标准品不可得时不需验证）制备含已知杂质为LOQ、50%、100%、120%四种浓度的溶液。
选择一批样品定量称样15份，其中3份作为空白，其余12份分别加入上述四种浓度的溶液，每种浓度的溶液平行加入三份样品中，进样。
浓度
样重（g）
测试结果
面积
测试结果%
理论含量%
回收率%
谱图号
空白
LOQ
50%
100%
120%
4.8中间精密度
按规程要求操作，数据填入下表：
测试条件
不同条件下含量结果
平均值
RSD%
日期
批号
第一天
第二天
第三天
人员和
仪器
批号
人员A（使用仪器1）
人员B（使用仪器2）
RSD除另有规定外应≤2.0%
4.9耐用性（仅在新开发的方法的第一次验证时进行）
4.9.1溶液稳定性
将制备好的标准品溶液和样品溶液每隔一小时进样一次，计算含量结果。
溶液放置时间
主峰保留时间
含量结果
1小时
2小时
3小时
4小时
5小时
平均值
RSD%
4.9.2分别调整流动相pH（±0.2pH）、流速（±50%）、柱温（±20%）、更换色谱柱检测同三批样品，计算含量结果的RSD%≤2.0%。
5.结论
附件3残留溶剂测试方法验证或确认模板
1.目的：
2.方法来源：
3.验证所用仪器设备及色谱条件
3.1仪器设备
名称
型号
序列号
供应商
气相色谱
气相色谱仪
顶空进样器
色谱工作站
色谱柱
3.2测试条件
分流比：
检测器温度：
进样器温度：
载气：
柱温程序：
柱流速或柱前压：
进样量：
检测器：
顶空条件：
3.3溶液制备
3.3.1标准溶液配制：
3.3.2空白（或稀释剂）：
3.3.3样品溶液的制备：
3.4验证所使用的试剂与标准品
名称
规格
批号
供应商
4.验证过程
4.1系统适用性
待仪器稳定后，进规定量的标准溶液，注入色谱仪，平行进样6次，记录色谱图。
类别
平行测定6次的峰面积
x平均
RSD
x1
x2
x3
x4
x5
x6
溶剂1
溶剂2
谱图号
计算N=T=R=（除另有规定外RSD≤2.0%，T≤2.0，R≥1.5）
4.2方法专属性
单独进样稀释用的溶剂，证明该溶剂对被测残留溶媒无干扰；单独进样每一个须测定的溶剂标准品，确定其保留时间；进样标准溶液，计算分离度以确定所有待检溶剂间
无干扰。
数据填入下表：
溶剂名称
溶剂1
溶剂2
保留时间
谱图号
4.3系统精密度（同系统适用性）
4.4最小检测限
进样品稀释剂溶液为空白，调整仪器了灵敏度，连续进样3次，记录在被测溶剂出峰时间围的仪器噪音水平，计算平均噪声。
准确配制被测溶剂标准溶液，逐步稀释至一定浓度并进样，计算S/N，以S/N在3左右的溶剂浓度为最小检测限浓度。
类别
平行测定次数
平均噪声
噪声1
噪声2
噪声3
空白溶液
谱图号
类别
浓度（mg/ml）
进样次数
平均峰高
信噪比
检测限%
X1
（峰高）
X2
（峰高）
X3
（峰高）
溶剂1
溶剂2
谱图号
4.5定量限
准确配制被测溶剂标准溶液，逐步稀释至一定浓度并进样，计算S/N，以S/N在10左右的溶剂浓度为最小检定量浓度。
类别
浓度（mg/ml）
进样次数
平均峰高
信噪比
定量限%
X1
（峰高）
X2
（峰高）
X3
（峰高）
谱图号
4.6线性（当样品中待测溶剂为未检出时，可不进行此项验证）
用已知溶剂标准品定量称样并配制成相对浓度为最小定量限浓度、50%、80%、100%、120%五种测试溶液。
每个溶液进样2次，计算平均峰面积。
以样品平均浓度对相应平均峰面积做回归曲线，计算回归方程及相应的线性回归系数。
相关系数应0.999～1.00。
线性结果
浓度
相对浓度
峰面积1
峰面积2
平均峰面积
平均值
回归方程
相关系数
4.7准确度（当样品中待测溶剂为未检出时，可不进行此项验证）
制备含已知溶剂为LOQ、50%、100%、120%四种浓度的溶液。
选择一批样品定量称样15份，其中3份作为空白，其余12份分别加入上述四种浓度的溶液，每种浓度的溶液平行加入三份样品中，进样。
浓度
样重（g）
测试结果
升级会员 